血清学试验.pdf

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1、血清学试验方法血清学试验方法血清学试验是检测正常与异常血清中各种物质含量的一种快速、有效、简便可靠的实验技术。该技术应用于实验室免疫学、血液学诊断等多个领域，提供了有效的检测方法。下面就血清学实验方法给出介绍。血清学实验的基本步骤是以下几方面：1.采集样本。血清的实验首先要求从血液或淋巴液中采集标本，以获得质量合格的血清。2.血液凝固剂的使用。凝固剂的选择主要有EDTA，但也可以使用不同的凝固剂，以获得有效的凝固液。3.血清分离。血清分离可以使用重力离心分离法，也可以以压力法等不同方法进行。4.血清实验。血清学实验检测方法有标准曲线法、测定法、免疫分析仪等。5.结果分析。完成实验后应对结果进行

2、批判性评价，以确定是否有致病和疾病发生的可能性，并给出临床决策的依据。1.标本的正确采集。准确的标本采集，是影响血清实验结果真实性的关键因素。2.标本有效保存和运输。标本在运输过程中未受到影响，实验结果才是可靠的。3.标本清洗。标本清洗是影响分离血清中固体颗粒和杂质的关键步骤。4.分离血清。血清的有效分离是血清学实验的基础。5.实验检测方法的确定。选择正确的实验检测方法，是保证实验质量可靠的关键因素。6.实验结果的数据处理。对实验结果的数据处理是对实验结果的成败关键。7.结果报告的审核签发。审核签发表明结果的可信度，保障研究成果的准确性。血清学试验简介血清学试验简介血清学反应是指：相应的抗原与

3、抗体在体外肯定条件下作用，可消失肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分别到的细菌，以最终确认检测结果。血清学反应的一般特点：1)抗原体的结合具有特异性，当有共同抗原体存在时，会消失交叉反应。2)抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。3)抗原体的结合是按肯定比例进行的，只有比例适当时，才能消失可见反应。4)血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不消失肉眼可见现象。其次阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几非常

4、以至更长时间。而且，在其次阶段反应中，电解质、PH、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。习惯上将经典的血清学反应分三种类别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。、凝集反应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参加下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应第 1 页 共 4 页（Agglutination reaction）。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，由于单位体积抗体量大，做定量试验时，应稀释抗体。）直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所消失的反应，称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。a.玻片凝集法。是一种

5、常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若消失肉眼可见的凝集块，即阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定。b.试管凝集法。是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于帮助诊断某些传染病及进行流行病学调查。如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。由于要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37或56，24 小时观看，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。）间接凝集反应将可溶性抗

6、原（抗体）先吸附在一种与免疫无关的，颗粒状微球表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在有电解质存在的条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应(Indirect agglutination)。由于载体增大了可溶性抗原的反应面积。当载体上有少量抗原与抗第 2 页 共 4 页体结合。就消失肉眼可见的反应，敏感性很高。、沉淀反应可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过肯定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。）环状沉淀反应：是一种定

7、性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁缓缓加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面消失白色的沉淀圆环。）絮状沉淀反应：将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者比例适当时，会消失肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。）琼脂集中试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内集中，若抗原抗体对应，且二者比例合适，在其集中的某一部分就会消失白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。琼脂集中可分为单向集中和双向集中两种类型。单向集中是一种定量试验。可用于免疫蛋白含量的测定。而双向集中多用于定性试验。由于方法

8、简便易行，常用于测定分析和鉴定简单的抗原成分。、补体结合反应补体结合反应(Complement fixation reaction)是在补体参加下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体第 3 页 共 4 页无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。假如补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会消失溶血现象，假如与细菌及相应抗体复合物结合，就会消失溶菌现象。因此，整个试验需要有补体、待检系统（已知抗体或抗原、未知抗原或抗体）及指示系统（绵羊细胞和溶血素）五种成份参与。其试验原理是补体不单独和抗原或抗体结合。假如消失溶菌，是补体与待检系统结合的结果，说明抗原抗体是相对应的，假如消失溶血，说明抗原抗体不相对应。此反应操作简单，敏感性高，特异性强，能测出少量抗原和抗体，所以应用范围较广。第 4 页 共 4 页