推荐分析化学实验荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量.pdf

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1、实验分子荧光法测定硫酸奎宁的含量一、实验目的一、实验目的1了解仪器的性能与结构；熟悉仪器的操作步骤；2学会绘制激发光谱和荧光谱图：（即确定最大的激发E 某和发射 Em）3定量测定硫酸奎宁的含量（标准曲线法）二、实验原理二、实验原理硫酸奎宁，是喹啉类衍生物，能与疟原虫的 DNA 结合，形成复合物抑制 DNA 的复制和 RNA 的转录，从而抑制原虫的蛋白合成。适用于氯喹和耐多种药物虫株所致的恶性疟。硫酸奎宁分子量：782.96。分子式：(C20H24N2O2)2H2SO42H2O它是强荧光物质，有两个激发波长 250nm 和 350nm，荧光发射峰在450nm。在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度

2、呈正比：If=kC三、实验内容 1.仪器与试剂仪器：三、实验内容 1.仪器与试剂仪器：日本日立公司 F-4600 荧光分光光度计。试剂：（1）10gmL-1 硫酸奎宁标准储备液：准确称取 0.1000g 硫酸奎宁，用 0.05molL-1H2SO4 溶液溶解，全部转移至 l00ml 容量瓶中，用0.05molL-1H2SO4 溶液稀释至刻度，摇匀。取此溶液 1.0mL 于 100mL 容量瓶中，用 0.05molL-1H2SO4 溶液稀释至刻度，摇匀。（2）0.05molL-1H2SO4 溶液 1000mL：取浓 H2SO42.717mL 用纯净水定容于 1000mL 容量瓶中,即得。(浓硫酸

3、溶质质量分数为百分之 98,密度=1.84g/cm3)四、实验步骤四、实验步骤1系列标准溶液的配制取 5 只 25mL 的容量瓶，分别加入 10.0gmL-1 硫酸奎宁标准溶液0.00，-1-11.00、2.00、3.00、4.00mL，用 0.05molLH2SO4 溶液稀释至刻度，摇匀。分别为标 0，标 1，标 2，标 3，标 4，标 0 做空白试剂。2仪器操作步骤（1）检查仪器所有电源开关处于关闭状态，然后通电；（2）打开主机开关，电脑开关等；（3）通过电脑进入分析程序3.绘制激发光谱和荧光发射光谱：（以 1.2g/mL 的标样找最大Em 和 E 某）（1)仪器正常后设定试验参数，更改实

4、验名称等；（2）进行预扫后，开始对所有标液及样品扫描；画出标准曲线A)将 E 某固定在 350nm,选择合适的实验条件,在 400600nm 范围内扫描即得荧光发射光谱(可排除 E 某的干扰)，从谱图找出最大 Em 值；B)将 EM 固定在 450nm,选择合适的实验条件,在 200400nm 范围内扫描即得荧光激发光谱(可排除 EM 的干扰)，从谱图找出最大 E 某值.C)绘制标准曲线将激发波长 E 某固定在 350nm（或 250nm）左右处，荧光发射波长EM 固定在 450nm 左右处，在选定条件下，测量系列标准溶液的荧光强度。D）未知试样的测定取 1 只 25mL 的容量瓶，加入 10

5、.0gmL-1 硫酸奎宁标准溶液2.5mL,用 0.05molL-1H2SO4 溶液稀释至刻度，摇匀。在标准系列溶液同样条件下，测量试样的荧光发射强度。E)绘制荧光强度 If 对硫酸奎宁溶液浓度 C 的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度 Conc(g/mL)。4.扫描完数据存盘后上传至网盘；5.退出分析程序，关机，关电源，取出比色皿，洗净保存所有玻璃器皿，实验结束。硫酸奎宁溶液必须当天配制、避光保存。六、思考题1能用 0.05molL-1HCl 来代替 0.05molL-1H2SO4 稀释溶液吗？为什么要同时测定硫酸的空白溶液？2哪些因素可能会对硫酸奎宁荧光产生影响？3.荧光分光光度计为什么要设两个单色器？4.荧光分光光度计和紫外分光光度计有哪些不同点？