微生物接种技术.pptx

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1、微生物接种技术导学1 234概念一览 操作原理技术要求及注意事项接种前准备微生物接种技术概念一览1一、什么是无菌操作技术？概念：按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程。操作要求：操作前将操作空间中的细菌和病毒等微生物杀灭；操作过程中保证操作空间与外界隔离，避免微生物的侵入。二、什么是接种技术？概念:接种技术是指按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程。注：接种技术是一个笼统的概念，因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌的接种室或接种箱或超净工作台内完成。操作原理2接种原理在无菌条件下，

2、用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上扩大培养。要想得到大量的菌种，适应生产、科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌的接种室或接种箱或超净工作台内完成。接种工具1接种针 2.接种环 3.接种钩 45.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀接种前准备3一、达到无菌环境的要求并保持1、无菌室的消毒和防污染u无菌室内空气测试应基本达到无菌。u每日（使用前）紫外线照射（12小时）.u每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）

3、.u每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。u定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖动态。一、达到无菌环境的要求并保持2、超净工作台一、达到无菌环境的要求并保持3、无菌材料准备 灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台等二、进入无菌室的准备工作（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定；（2）用紫外线灭菌处理3060min；（3）检查无菌器材是否完备；（4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75酒精棉球将手擦干净。（5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、鞋。三、无菌操作的要求（1）在操作中不应有大幅度或

4、快速的动作；（2）使用玻璃器皿应轻取轻放。（3）在火焰上方操作；（4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；（5）在接种培养物时，协作应轻、准。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒内消毒。技术要求及注意事项4倒平板的方法p倒平板的操作及注意事项：（1）将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞（2）右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。（3）用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10到20ml）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。p注：要先将培养基煮好，待冷却至5560

5、时，再倒平板。斜面接种l 适用范围:从已长好微生物移接到另一斜面管的方法，用于好气性微生物的接种。l 操作要点：左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。平板接种将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的是观察菌落形态、分离纯化菌种，活菌计数以及在平板上进行各种试验时采用的一种接种方法，可分为下面几种：(1)斜面接平板（2）平板接斜面（3）平板涂布法样品接种涂布法具体操作是：先倒培养基，制成平板；凝固后，另取一支吸管

6、吸取相应的菌液0.2mL放至平板上；用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀；倒置于37条件下培养12d，观察菌落形态及计数菌落。样品接种倾注法操作步骤：(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处；（2）将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；(3)取少量菌液滴加到培养基表面；（4）将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810s；（5）用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀；（6）将接种好的平板在皿底做好标记；（7）涂布分离的平板全班一起放入保鲜袋中，37度培养箱中倒置培养24h；（8）一星期后观察分离效果，拍照，分析结果。感谢大家的聆听！？