1-2基因工程的基本操作程序(新)XXXX(2)bww.pptx

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1、1、结合图，判断下列有关基因工程的工具酶功能的叙、结合图，判断下列有关基因工程的工具酶功能的叙述，正确的是述，正确的是 ()。A切断切断a处的酶为限制性核酸内切酶处的酶为限制性核酸内切酶B连接连接a处的酶为处的酶为DNA聚合酶聚合酶C切断切断b处的酶为限制性核酸内切酶处的酶为限制性核酸内切酶D切断切断c处的为限制性核酸内切酶处的为限制性核酸内切酶cADNADNA连接酶连接酶解旋酶解旋酶DNADNA水解酶水解酶1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序一、目的基因的一、目的基因的获取获取二、基因表达二、基因表达载体的构建载体的构建三、将目的基因三、将目的基因导入

2、导入受体细胞受体细胞四、目的基因的四、目的基因的检测检测与与鉴定鉴定一、目的基因的获取一、目的基因的获取主要是编码蛋白质的主要是编码蛋白质的结构基因结构基因2 2、获取方法：、获取方法：1 1、目的基因、目的基因:1）从基因文库中获取目的基因）从基因文库中获取目的基因1 1）从基因文库中获取目的基因：）从基因文库中获取目的基因：基因文库基因文库:将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNADNA片段片段,导入导入受体受体菌菌的群体中储存的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因基因,称为基因文库称为基因文库(gene library

3、)(gene library)分类：分类：基因组文库基因组文库:包含了一种生物包含了一种生物所有所有的基因的基因文库的基因的基因文库。构建方法：构建方法：限制酶切法限制酶切法部分基因文库（如部分基因文库（如cDNAcDNA文库文库):):包含了一种生物的包含了一种生物的一部一部分分基因的基因文库。基因的基因文库。构建方法：构建方法：逆转录法逆转录法限制酶切法（限制酶切法（鸟枪法鸟枪法或或散弹射击法散弹射击法）用限制酶切断用限制酶切断成许多片段成许多片段某生物体内某生物体内全部全部DNADNA 许多许多DNADNA片段片段受体菌群体受体菌群体1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因

4、限制酶限制酶与运载体连接与运载体连接 导入导入基因组文库基因组文库某种生物某个时期的某种生物某个时期的mRNAmRNAcDNAcDNA反转录反转录受体菌群体受体菌群体与运载体连接与运载体连接 导入导入部分基因文库部分基因文库（cDNA文库）文库）外显子内含子与RNA聚合酶结合位点编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点编码区原核生物基因原核生物基因真核生物基因真核生物基因RNARNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶AGGTCACGTCGAGGTCACGTCGTCCAGTGCAGCTCCAGTGCAGCAGGUCACGUCGAGGUCACGUCG一个典型的原核细胞基因结构示意图一个典

5、型的原核细胞基因结构示意图非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区编码区TCCAGTTCCAGTAGGTCAAGGTCAAGAAGATCTTCTmRNA多多多多 肽肽肽肽 链链链链与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点外显子外显子内含子内含子12345编码区下游编码区下游编码区下游编码区下游非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区转录转录mRNAmRNA前体前体加工加工成熟成熟mRNAmRNA翻译翻译肽链肽链一个典型的真核细胞基因结构示意图一个典型的真核细胞基因结构示意图一、目的基因的获取一、目的基因的获取主要是编码蛋白质的主要是编码蛋白质的

6、结构基因结构基因2 2、获取方法：、获取方法：1 1、目的基因、目的基因:1）从基因文库中获取目的基因）从基因文库中获取目的基因2 2）利用）利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因2、利用利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：聚合酶链式反应聚合酶链式反应，在生物体外复制特，在生物体外复制特定定DNADNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。的基因。条件：条件：_、_ _、_(_(做启动子做启动子)、_ _ _._.原理：原理：_DNADNA复制复制模板模板DNADNA四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物热稳定热稳定

7、DNADNA聚合酶聚合酶利用利用PCRPCR技术扩增技术扩增循环循环变性变性退火退火延伸延伸方式：方式：以以_方式扩增，即方式扩增，即_（n n为扩增循为扩增循 环的次数）环的次数）指数指数2 2n n利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因过程：过程：使使目的基因目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增的片段在短时间内成百万倍地扩增结果：结果：加热至：加热至9095，使，使DNA解旋；解旋；：冷却到：冷却到5560，2个引物分别与个引物分别与DNA单链结合；单链结合；：加热至：加热至7075，热稳定，热稳定DNA聚合酶开始互补链聚合酶开始互补链的合成。的合成。氢氢键断裂键断裂与体内

8、与体内DNA复制的区别：复制的区别：不需要解旋酶；：不需要解旋酶；：需加入引物：需加入引物 （前提：已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物）（前提：已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物）：需热稳定：需热稳定DNA聚合酶聚合酶(Taq酶酶)；与体内与体内DNA复制的相同点：复制的相同点：(1)模板：均需要脱氧核苷酸双链作为模板模板：均需要脱氧核苷酸双链作为模板(2)原料：均为四种脱氧核苷酸原料：均为四种脱氧核苷酸(3)酶：均需酶：均需DNA聚合酶聚合酶(4)引物：都需要引物，引物：都需要引物，使使DNA聚合酶从引物的聚合酶从引物的3端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸一、目的基因的获取一、

9、目的基因的获取主要是编码蛋白质的主要是编码蛋白质的结构基因结构基因2 2、获取方法：、获取方法：1 1、目的基因、目的基因:3 3）化学方法人工合成）化学方法人工合成DNADNA合成仪合成仪1）从基因文库中获取目的基因）从基因文库中获取目的基因2 2）利用）利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3、人工合成法 在基因较小，核苷酸序列已知的在基因较小，核苷酸序列已知的前提前提下下，可，可以利用以利用DNADNA合成仪人工合成合成仪人工合成蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因化学合成化学合成推测推测推

10、测推测思考：思考：化学法合化学法合成的目的基因含成的目的基因含内含内含子、启动子和终止子子、启动子和终止子吗？吗？二二.基因表达载体的构建基因表达载体的构建1、载体载体构建目的：构建目的：2 2、基因表达载体的组成、基因表达载体的组成启动子启动子+目的基因目的基因+终止子终止子+标记基因标记基因-核心核心（P11）同时使目的基因能够同时使目的基因能够表达和表达和发挥作用。发挥作用。使目的基因在受体细胞内使目的基因在受体细胞内稳定存稳定存在在，并且，并且可以遗传可以遗传给下一代，给下一代，表达载体启动子：启动子：终止子：终止子：位置位置:首端首端本质本质:DNA功能功能:有与有与RNA聚合聚合酶

11、结合的位点，酶结合的位点，能驱动转录能驱动转录位置位置:尾端尾端本质本质:能终止转录能终止转录3、基因表达载体的构建过程特别提醒特别提醒该过程把三种工具该过程把三种工具(两种工具酶、一种载两种工具酶、一种载体体)全用上了，是全用上了，是最核心、最关键最核心、最关键的一步，在体外进行。的一步，在体外进行。思考：思考：如果用同一种限制性内切酶，如果用同一种限制性内切酶，处理质粒和目的基因，并将产物处理质粒和目的基因，并将产物放在一起用连接酶连接它们，最放在一起用连接酶连接它们，最后可以产生多少种环状的后可以产生多少种环状的DNA分分子？子？你认为它们是怎么组成的？你认为它们是怎么组成的？三、将目的

12、基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞2、将目的基因导入受体细胞的原理：、将目的基因导入受体细胞的原理：借鉴借鉴细菌或病毒侵染细胞细菌或病毒侵染细胞的途径的途径。1、常用的受体细胞：、常用的受体细胞：动物、植物、微生物。动物、植物、微生物。（1 1）.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞1）农杆菌转化法）农杆菌转化法三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞最常用最常用方法、经济有效方法、经济有效3、转化、转化的概念：的概念：目的基因目的基因进入进入受体细胞内并在受体细胞受体细胞内并在受体细胞中中维持稳定和表达维持稳定和

13、表达的过程。的过程。4、转化的方法：、转化的方法：1 1）农杆菌转化法）农杆菌转化法 适用范围：适用范围：双子叶双子叶植物和植物和裸子裸子植物；植物；(2)(2)原理：原理：TiTi质粒质粒上的上的T-DNAT-DNA可以可以转移到受体细胞，并整合到受体转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的细胞染色体的DNADNA上。上。三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞构建基因表达载体构建基因表达载体转入转入农杆菌农杆菌植物细胞植物细胞导入导入稳定维持和表达稳定维持和表达过程：过程：（1 1）.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞1）农杆菌转化法）农杆菌转化法2）基因枪法）基因枪法3

14、）花粉管通道法）花粉管通道法三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞最常用最常用方法、经济有效方法、经济有效单子叶植物常用、准确但单子叶植物常用、准确但成本高成本高我国独创、我国独创、简便经济简便经济3、转化、转化的概念：的概念：目的基因目的基因进入进入受体细胞内并在受体细胞受体细胞内并在受体细胞中中维持稳定和表达维持稳定和表达的过程。的过程。4、转化的方法：、转化的方法：（2 2）.将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞-显微注射技显微注射技术术2 2）将目的基因导入动物细胞）将目的基因导入动物细胞1.1.方法：方法：显微

15、注射技术显微注射技术2.2.受体细胞：受体细胞：受精卵受精卵 3.3.程序程序:目的基因表达载体提纯目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵）取卵（受精卵）显微注射显微注射 受精卵受精卵 新性状动物新性状动物（1 1）.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞1）农杆菌转化法）农杆菌转化法2）基因枪法）基因枪法3）花粉管通道法）花粉管通道法三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞（2 2）.将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞（3 3）.将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞-Ca2+处处理理-显微注射技显微注射技

16、术术最常用最常用方法、经济有效方法、经济有效单子叶植物常用、准确但单子叶植物常用、准确但成本高成本高我国独创、我国独创、简便经济简便经济3、转化、转化的概念：的概念：目的基因目的基因进入进入受体细胞内并在受体细胞受体细胞内并在受体细胞中中维持稳定和表达维持稳定和表达的过程。的过程。4、转化的方法：、转化的方法：3)将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少常用菌：常用菌：大肠杆菌大肠杆菌常用法：常用法：CaCa2+2+处理获得感受态细胞处理获得感受态细胞过程：过程：CaCaCa

17、Ca2+2+2+2+处理处理处理处理大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌感受态感受态感受态感受态 细胞细胞细胞细胞感受态细胞感受态细胞感受态细胞感受态细胞 吸收吸收吸收吸收DNADNA表达载体表达载体表达载体表达载体与感受态与感受态与感受态与感受态细胞混合细胞混合细胞混合细胞混合 方方 法法 受体受体 细细胞胞 其他其他处处理理 或特点或特点植物植物细细胞胞农农杆菌杆菌转转化化法法基因基因枪枪法法花粉管花粉管通道通道法法体体细细胞、胞、受精卵受精卵植物植物组织组织培养培养（脱分化和再分化）（脱分化和再分化）动动物物细细胞胞显显微注射法微注射法受精卵受精卵动动物物细细胞培养胞培养早期胚胎培养早期胚胎

18、培养胚胎移植或胚胎分割胚胎移植或胚胎分割移植移植微生物微生物细细胞胞Ca2+Ca2+处处理法理法（感受（感受态细态细胞）胞）原核原核细细胞胞繁殖快，多繁殖快，多为单细为单细胞，胞，遗传遗传物物质质少少（农杆菌（农杆菌Ti质粒的质粒的T-DNA的特点：即能进入受体细胞，的特点：即能进入受体细胞，又能与受体细胞的染色体又能与受体细胞的染色体DNA整合）整合）双子叶、双子叶、裸子裸子 四、目的基因的检测与鉴定导入过程完成后，全部受体细胞都能摄导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组入重组DNADNA分子吗？分子吗？1真正能摄入重组真正能摄入重组真正能摄入重组真正能摄入重组DNADNADNADNA分

19、子的受体细胞很少。分子的受体细胞很少。分子的受体细胞很少。分子的受体细胞很少。2目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？维持和表达？不一定，需要检测不一定，需要检测不一定，需要检测不一定，需要检测四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定1 1、分子水平、分子水平 检测检测2 2、个体水、个体水平鉴定平鉴定检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活

20、性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等DNADNA分子杂交分子杂交DNA-RNADNA-RNA分子杂交分子杂交抗原抗原抗体杂交抗体杂交转基因生转基因生物的物的DNA含目的基含目的基因的因的DNA单链为单链为探探针针15N N15N N14N N14N N基因探针：基因探针：放射性同位素等标记的放射性同位素等标记的DNA分子分子方法方法 DNA分子杂交技术分子杂交技术变性变性变性变性变性变性变性变性DNA分子杂交示意图分子杂交示意图用用DNA分子杂交技术可鉴定两个物种之间的分子杂交技术可鉴定两个物种之间的亲缘关系的远近。亲缘关系的远近。将两种生物的将两种生物的DNA分子的分子的单链放在一起，如果

21、这两个单链具有互补的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。序列的部位，仍然是两条游离的单链。如果如果杂合部位多，则亲缘关系近，反之则远。杂合部位多，则亲缘关系近，反之则远。1、鉴定分子水平的鉴定变性变性变性变性方法方法 分子杂交技术分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了）检测目的基因是否转录出了mRNA探针探针15N N15N N转基因生物转基因生物的的mRNA14N N14N N1、鉴定分子水平的鉴定提取

22、提取（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质）检测目的基因是否翻译成蛋白质方法方法抗原抗原-抗体杂交抗体杂交苏云金杆菌苏云金杆菌Bt毒素蛋白毒素蛋白将将Bt毒蛋白注毒蛋白注射小鼠体内射小鼠体内从小鼠血管抽出从小鼠血管抽出血液分离出抗血液分离出抗Bt毒素的抗体毒素的抗体抗体抗体蛋白质蛋白质 出现出现杂交带杂交带脱分化脱分化组织培养组织培养2、鉴定个体水平的鉴定抗虫、抗病接种实验，活性比较实验抗虫、抗病接种实验，活性比较实验例：用棉铃饲喂棉例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中因未表达。

23、如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。抗虫基因并得到表达。四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定1 1、分子水平、分子水平 检测检测2 2、个体水、个体水平鉴定平鉴定检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等DNADNA分子杂交分子杂交DNA-RNADNA-RNA分子杂交分子杂交抗原抗原抗体杂交抗体杂交考法考法方法方法

24、过过程程导导入入检测检测外源基因是外源基因是否与受体否与受体细细胞的染色体胞的染色体整合整合DNADNA分分子子杂杂交交用放射性同位素或用放射性同位素或荧荧光分子光分子标记标记的目的基因的目的基因的的单链单链做探做探针针，与，与转转基因生物的基因基因生物的基因组组DNADNA杂杂交，交，观观察是否出察是否出现杂现杂交交带带。表达表达检测检测是否是否转录转录分子分子杂杂交交用放射性同位素或用放射性同位素或荧荧光分子光分子标记标记的目的基因的目的基因的的单链单链做探做探针针，与，与转转基因生物基因生物细细胞中的胞中的mRNAmRNA杂杂交，交，观观察是否出察是否出现杂现杂交交带带。表达表达检测检测

25、是否翻是否翻译译抗原抗原-抗抗体体杂杂交交从从转转基因生物中提取蛋白基因生物中提取蛋白质质，用相，用相应应的抗体的抗体进进行抗原抗体行抗原抗体杂杂交，交，观观察是否出察是否出现现反反应应。个体个体水平水平检测检测比比较简单较简单的的方法方法抗虫或抗抗虫或抗病病实验实验如，如，转转基因抗虫植物是否出基因抗虫植物是否出现现抗虫性状，抗虫性状，让让害虫食用害虫食用转转基因植物的叶片，基因植物的叶片，观观察其是否死察其是否死亡。亡。基基因因工工程程的的基基本本操操作作程程序序目的基因的获取目的基因的获取基因表达载体的构建基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定

26、目的基因的检测与鉴定1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3、化学方法人工合成、化学方法人工合成目的基因目的基因+启动子启动子+终止子终止子+标记基因标记基因农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、显微注射法、CaCa2+2+处理法处理法DNADNA分子杂交技术分子杂交技术DNA-RNADNA-RNA分子杂交技术分子杂交技术抗原抗原抗体杂交技术抗体杂交技术个体水平鉴定个体水平鉴定分子检测分子检测巩固练习巩固练习:1.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因人们常选用的细

27、菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因,该该抗性基因的主要作用是抗性基因的主要作用是 ()A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性提高受体细胞在自然环境中的耐药性B.有利于对目的基因是否导入进行检测有利于对目的基因是否导入进行检测C.增加质粒分子的分子量增加质粒分子的分子量D.便于与外源基因连接便于与外源基因连接2.在遗传工程技术中在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于限制性内切酶主要用于 ()A.目的基因的提取和导入目的基因的提取和导入B.目的基因的提取和检测目的基因的提取和检测C.目的基因与载体的结合和导入目的基因与载体的结合和导入D.目的基因的提取与载体结合目的基因的提取与载体结合BD3.在遗

28、传工程技术中在遗传工程技术中,下列何种目的基因一般以直接分下列何种目的基因一般以直接分离的方法获得离的方法获得 ()A.人的胰岛素基因人的胰岛素基因 B.蚕的蚕丝蛋白基因蚕的蚕丝蛋白基因C.芽孢杆菌的抗虫基因芽孢杆菌的抗虫基因 D.菜豆储藏蛋白基因菜豆储藏蛋白基因4.1976年年,美国的科学家首次将人的生长抑制素释放美国的科学家首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌因子的基因转移到大肠杆菌,并获得了表达并获得了表达,此文中的此文中的表达是指该基因在大肠杆菌表达是指该基因在大肠杆菌 ()A.能进行能进行DNA复制复制B.能传递给细菌后代能传递给细菌后代C.能合成生长抑制素释放因子能合成

29、生长抑制素释放因子D.能合成人的生长素能合成人的生长素CC5.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的,在基因操作的基本步骤中,不进行减基互补配对的步骤是 ()A.人工合成目的基因B.目的基因与载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测和表达C原核生物基因表达的调原核生物基因表达的调 控控 lacZ lacY lacA 调节基调节基 因因启动启动 子子 操纵基操纵基 因因结构基结构基 因因RNA聚合酶聚合酶信使信使 RNA转转 录录翻翻 译译阻抑阻抑 物物乳糖乳糖 转转 录录半乳糖苷酶半乳糖苷酶 酶酶酶酶1、下列四条、下列四条DNA分子，彼此间具有分子，彼此间具有粘性末端的一组是粘

30、性末端的一组是()ABCDD练习练习3、已知限制酶已知限制酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是GGATCC，限制酶，限制酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是GATC。根据。根据图示判断下列操作正确的是（图示判断下列操作正确的是（）A目的基因和目的基因和质质粒均用限制粒均用限制酶酶切割切割B目的基因和目的基因和质质粒均用限制粒均用限制酶酶切割切割C质质粒用限制粒用限制酶酶切割，目的基因用限制切割，目的基因用限制酶酶切割切割D质质粒用限制粒用限制酶酶切割，目的基因用限制切割，目的基因用限制酶酶切割切割C实验现实验现象象实验实验推推论论在含青霉素培养在含青霉素培养基上生基上生长长情况情况在含四在

31、含四环环素培养基素培养基上生上生长长情况情况导入质粒情况，及目的基因导入质粒情况，及目的基因插入位置插入位置目的基因插入位置目的基因插入位置ABCD未未导入质粒的导入质粒的普通的普通的大肠杆菌大肠杆菌不能生长不能生长不能生长不能生长导入外源基因的重组质粒的导入外源基因的重组质粒的大肠杆菌，且位点在大肠杆菌，且位点在a a 能生长能生长不能生长不能生长导入外源基因的重组质粒的导入外源基因的重组质粒的大肠杆菌，且位点在大肠杆菌，且位点在c c不能生长不能生长能生长能生长导入外源基因的重组质粒的导入外源基因的重组质粒的大肠杆菌，且位点在大肠杆菌，且位点在b b或导入质或导入质粒的大肠杆菌粒的大肠杆菌能生长能生长能生长能生长练一练练一练演讲完毕，谢谢观看！