月季组织培养学习教案.pptx

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1、会计学1月季月季(yuj)组织培养组织培养第一页，共15页。目录目录(ml)（一）：培养意义（一）：培养意义（二）：实验原理（二）：实验原理(yunl(yunl)（三）（三）:实验步骤实验步骤 1 1：初代培养：初代培养 2 2：继代培养：继代培养（四）（四）:问题与讨论问题与讨论 第1页/共15页第二页，共15页。一、培养一、培养(piyng)意义意义n n月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物，每年多次开花，而且香味怡人，在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广，适应性强，栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉，古今中外文人墨客咏叹月季的佳作，不胜枚举。但品种比较单一，更新换代缓慢。随着组

2、织培养技术(jsh)的应用成功培育了大量优质月季组培苗，填补了市场空白，对加速新老品种更新换代，迅速普及名优新品种起到了重要作用。第2页/共15页第三页，共15页。二、实验二、实验(shyn)原理原理n n细胞的全能性：细胞具有全套遗传物质。能够发育成完整植株的能力。n n激素调控理论：当细胞分裂素和生长素的比值(bzh)大时，诱导芽的产生；当比值(bzh)小时，诱导根的产生；一样时，诱导愈伤组织的形成。第3页/共15页第四页，共15页。三、实验三、实验(shyn)步骤步骤（一）无菌培养的建立（1）选材 选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段(zhn dun)芽最

3、好，因为接种后，中段(zhn dun)芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。（2）培养基的配制 整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.31.Omg。第4页/共15页第五页，共15页。n n（3 3）清洗外植体采回的枝条切去叶，）清洗外植体采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干后，放置在小木板上，用刀切成巾擦干后，放置在小木板上，用刀切成2 23 3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒厘米一段，每段至

4、少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上。过的培养皿，放在超净工作台上。n n（4 4）消毒与接种在超净工作台上，用）消毒与接种在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌饱和漂白粉上清液作表面灭菌25253030分钟，分钟，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求接种，从芽萌发表水分，按无菌操作要求接种，从芽萌发(mngf)(mngf)到芽长到到芽长到1 1厘米左右需要厘米左右需要2 23 3周。周。第5页/共15页第六页，共15页。（5）培养培养温度21最好，最高不超过(chogu)25，有昼夜温差，光照1012小时/天，光强8

5、001200LX。第6页/共15页第七页，共15页。（二）继代增殖（1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接(zhun ji)到MS+BA1-2mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.01-0.1mg/l的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克（2）5周后，所培育的月季成倍的增加。（3）每56周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成12节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。第7页/共15页第八页，共15页。n n（4）壮苗培养对增殖

6、倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。培养条件。光照1012小时(xiosh)/天，光强8001800LX，温度2023，最高2426。第8页/共15页第九页，共15页。n n（5）生根与移栽月季嫩芽生长到一定长度时，就应切割下来(xi li)，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以23厘米为宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快

7、，成活率高。n n（a）以MS培养基为基础，配方为MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎，经2周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。第9页/共15页第十页，共15页。n n（b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植(zhngzh)到粗沙+园田土（1：3）介质中，总的原则是疏松透气，有一定的保水、保肥能力。种植(zhngzh)密度23厘米46厘米/株，移栽完毕浇透水，并用0.1的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗，能显著提高成活率。n n（c）移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85以上，在温室、拱棚中移栽，覆好遮荫网，一般成活率都

8、比较高，并注意通风和温度管理。46周后，须做好第二次移植，通常植入5厘米9厘米的塑料杯中，每杯种1苗，再经46周，地上、地下部分都充分生长，有些植株还能开花。第10页/共15页第十一页，共15页。n n（d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，视苗大小，浓度逐渐由0.1提高到0.3左右，施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾，MS培养液等，通常每710天喷一次杀菌剂，如百菌清等保苗，也可结合喷药施肥，以减少管理用工。试管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，须注意除草(ch co)、施肥、防治病虫害，及时掐去顶芽，尤其是花蕾，以促进侧芽的生长，促使早日壮大。第11页/共15页第十二页，共15

9、页。（四）问题（四）问题(wnt)与与讨论讨论n n初代培养外植体的褐变：褐变是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活而使细胞的代谢(dixi)发生变化。在褐变过程中产生醌类物质，他们多呈褐色，当扩散到培养基后，就会抑制其他酶的活性，从而影响从接种的外植体的一种现象。n n减轻褐变现象发生的方法：n n（1）合适的培养基。降低无机盐浓度和细胞分裂素浓度，但蔗糖浓度不能降低。n n（2）使用抗氧化剂PVP半光氨酸n n（3）使用吸附剂活性炭，0.1%0.5%n n（4）连续转移第12页/共15页第十三页，共15页。n n继代培养的材料的玻璃化n n玻璃化现象：当植物不断(bdun)进行离体培养繁殖时，培养物会呈半透明水壮的现象。n n产生的原因：湿度太大，光照水平太低；培养细胞细胞分裂素水平较高。n n解决方法：n n（1）增加光照；降低培养温度；增加通风CO2浓度。n n（2）降低培养基中细胞分裂素含量。第13页/共15页第十四页，共15页。第14页/共15页第十五页，共15页。