大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型制备与指标设计与分析.ppt

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1、大鼠心肌缺血再灌注损伤模型制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型制备以及以及血流动力学等血流动力学等指标指标的的设计与分析设计与分析心肌缺血的概念 冠心病基本的生理过程是心肌缺血，故又称为缺血性心脏病。缺血是指单位时间内的冠脉血流量减少，供给组织的氧量也减少，缺血必定存在缺氧，表明缺血缺氧两者在概念上并不完全等同，在后果上也有一定的区别。心肌缺血比单纯性心肌缺氧（无血流障碍）要严重，因为前者除了缺氧的影响之外，缺血组织也不能获得足够的营养物质，又不能及时清除各种代谢各种代谢产物带来的有害影响。缺血对心肌的影响v1.心肌收缩能力的降低 CO v2.心肌舒张功能降低 LVEDP 易衰竭v3.血流动力学的改

2、变 冠脉狭窄处血流阻力增大，狭窄远端血管的压力下降，有效灌注压下降，发生湍流。产生远端心肌缺血缺氧v4.心肌电生理的变化 v5.血小板功能和血液流变学的变化 v6.缺血对心肌代谢的影响 心肌缺血后导致心肌内氧张力下降，使脂肪酸、葡萄糖、丙酮酸、乳酸的氧化代谢严重受阻。缺血心肌的损伤机制v1.能量缺乏 v2.钙超载 v3.自由基生成增多 v4.酸中毒引起的心肌损害v5.细胞膜通透性增加常见心肌缺血模型 v药物引起的心肌缺血：1.垂体后叶素引起的急性心肌缺血2.异丙肾上腺素引起的急性心肌缺血v手术冠脉结扎引起的：1.人工进行冠脉结扎引起的心肌缺血v血栓引起的：1.电刺激冠脉引起的冠脉血栓基本原理

3、结扎大鼠、兔、猫、狗、猪、猴等动物的左冠状动脉前降支均可引起心肌梗死。在结扎冠脉后血流动力学和心肌代谢的改变与冠心病人严重心肌缺血及心肌梗死时有某些相似之处。而且梗死发生快、缺血缺血范围大致固定，并可进行动力学、心电图ST段标测、组织染色检查和血清酶学等综合指标测定，确定心肌缺血/梗死范围和损伤程度。因此，结扎冠脉引起的急性或亚急性心急梗死病理模型可供基础科研、药物研究等用。实验材料v大鼠手术器械1套；气管套管，大鼠心室导管、微动脉夹、3-5个零缝合针线，细软管一根等。麻醉药：乌拉坦或戊巴比妥钠。vBL-420E+生物信号采集与分析装置，四川泰盟科技公司生产。动物人工呼吸机，DH150，浙江大

4、学医学仪器厂生产等。v红四氮唑（TTC）：进口。实验方法 一、麻醉固定：选用200300g的雄性大鼠（SD/WISTAR），乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉（或戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射）,背位固定于手术板上。二、右侧颈总动脉插导管至左心室与BL-420E型生物机能实验系统相连检测血压和心室内压。接导联心电连接线记录心电图。插气管接人工呼吸机（或用面罩），进行人工呼吸(呼吸频率60-80次，潮气量8-12ml，呼吸比1：1)。实验方法 三、胸部去毛消毒，沿着锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，在第三或第四肋间钝性分离肌层，打开胸腔，剪开心包，轻压右侧胸廓，挤出心脏。在肺动脉圆锥与左心耳下缘之间

5、冠状动脉处以5-0针线结扎左冠状动脉前降支后（需进行再灌注则将一软管一起结扎，到指定时间取出软管实行再灌），把心脏放回胸腔，迅速缝合胸腔，停止人工呼吸。该实验在大鼠开胸之前先描记一段时间的正常导联心电图，再结扎冠脉前降支，一心电图ST段抬高判断结扎是否成功。如急性实验，即可给药观察。如进行亚急性实验，需术后几天每天注射青霉素和链霉素防止感染。心脏表面血管示意图 心肌缺血示意图Establishment结扎左侧冠状动脉Suitable Animal大鼠、猪、狗、家兔 分组及剂量v正常对照组（NS）v模型对照组（NS）v肠炎合剂低剂量组（1.5g生药/kg）v肠炎合剂中剂量组（3g生药/kg）v肠

6、炎合剂高剂量组（6g生药/kg）v复方黄连素组（0.14g/kg）治疗TNBS 所致大鼠UC 的实验 实验方法：v1.禁食24 h，灌胃管插入肠内8 cm，正常对照组注NS，其余各组注50乙醇与TNBS混合液0.5 ml/只（100 mg/kg），倒置鼠30 sv2.造模第2天开始给药，连续给药14天v3.造模第14天，以3%戊巴比妥钠麻醉，抽腹腔静脉血，取血清、结肠组织等检测指标设计1v1、血流动力学指标：收缩压（SAP）、舒张压(DAP)、平均动脉血压(MAP)、心率(HR)、左室内压峰值(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压上升最大变化速率(+dp/dtmax)、左室内压下

7、降最大变化速率(-dp/dtmax)。v2、心电图指标：结扎前与结扎后不同时间点的心率、ST段位移（mv）及T波幅值（mv）、心律失常发生率。指标设计2v3、血清酶测定：于缺血再灌注一定时间后，从腹腔静脉取血，分离血清，检测血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶（CK）或CK-MB。v4、病理组织学分析 取代表性心肌用10甲醛磷酸盐缓冲液保存超过48。每个组织块均酒精梯度脱水，石蜡包埋，切片厚约4，进行苏木素一伊红(Haematoxylin-Eosin，HE)染色。光镜下观察脑组织病理学变化。指标设计3v5、心肌梗死面积：缺血再灌注一定时间后处死大鼠，摘取心脏，放20 冰箱中冷冻20分钟，横向切成

8、5片、放红四氮唑（TTC）液中37 水浴保温1020分钟，将各片心肌非红染区（梗塞区）切下，称湿重，计算与总心脏重之比为心肌梗塞范围（梗死区/心脏重100），或用图像分析系统分析梗死面积。原理：正常心肌细胞有脱氢酶，在NADP存在的条件下，能将无色的氧化型燃料红四氮唑（TTC）还原成还原型的红色的TTC，使活体心肌染色心肌梗死一定时间后，细胞中脱氢酶因细胞膜损伤而释放丢失，不能使TTC还原染色，故心肌不被染色。指标设计4v6、细胞调亡情况、差异蛋白检测等v7、其它指标血流动力学图（超声）血流动力学图（导管）心电图病理学检查心肌梗死图（TTC法）注意事项v1.麻醉：戊巴比妥钠、乙醚、水合氯醛、氯胺酮v2.开胸暴露心脏：3-4肋间v3.冠脉结扎的部位：关键 左心耳下缘1-2mm处进针。由于大鼠心脏表面见到的是静脉，静脉下面见不到的才是动脉，故结扎时应稍扎深一点，把动脉静脉都扎在一起。结扎后如未出现明显的心肌梗死心电图波形，应弃之不用。v4.控制好呼吸机 呼吸要保持好，因为气胸不能自主呼吸而死亡。欢迎交流指正