免疫学实验3淋巴细胞转化试验课件.ppt

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1、实验三内 容示教：淋转、E 花环、免疫荧光操作：ELISA（请A、B、C 液帽子不要盖错）；录像：免疫学标记技术淋巴细胞转化试验转化百分率正常值为70%左右分裂相：即染色体型母细胞：大4-5 倍；核质疏松，有1-3 个核仁；核周透明区；胞浆有空泡过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少示教片E 玫瑰花环试验T 细 胞 表 面 有 绵 羊 红 细 胞 受 体，可 在 自 然 情 况下 与 绵 羊 红 细 胞 结 合，形 成E 玫 瑰 花 环，由 此可区分T 淋巴细胞与B 淋巴细胞。示教片 酶联免疫吸附试验（ELISA）（Enzyme linked lmmunosor

2、bent Aassay）【原理】把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。【方法】主要有间接法和双抗体夹心法ELISA：双抗体夹心法-用于测定抗原 免疫荧光技术（荧光抗体技术）【原理】是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特

3、性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。【方法】主要有直接法和间接法。抗核抗体在多种疾病中出现 SLE：50%-100%RA：10%-20%硬皮病：85%-90%狼疮性肝炎：95%-100%原发性胆汁性肝硬化：95%-100%皮质激素治疗后阳性率下降荧光显微镜 操作步骤 抗原片的制备1.小鼠断椎处死，取肝脏2.清洗，锋利剪刀取直径1cm 左右的肝组织3.印片4.晾干5.丙酮固定10-15min 荧光染色1.在印片上加待检血清2.湿盒中37 孵育30min3.PBS 洗涤4.晾干后加荧光标记的抗体5.湿盒中37 孵育30min6.PBS 洗涤7.晾干后甘油封片 荧光显微镜镜检免疫荧光 C301 室作 业1.画图：淋巴细胞转化 E 花环形成2.记录ELISA 检测结果