生化试验实验1-改良Lowry氏法测蛋白含量课件.ppt

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1、生物化学实验实验室规则按规章操作，保障实验安全；进入实验室要着白大衣；禁止大声喧哗，保持实验环境的安静；维持实验室的整洁。实验课的考试 实验分组 实验室卫生 实验报告的书写实验名称姓名：班级：学号：实验原理：实验目的：实验步骤：文字简洁，尽可能采用图表实验结果：原始数据、计算过程、结论实验讨论：结果分析、实验注意事项实验日期：同组人员：实验报告的书写分光光度计分光光度计的原理分光光度计的操作 T=I/I0，A=-lg T 1、A1/A2=c1/c22、标准曲线法Lambert-Beer 定律光源I0I单色器 样品池 狭缝A=KcL分光光度计的原理和构造检测系统分光光度计的使用1.打开电源，调节

2、旋钮至需要的波长，预热2030min2.1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100”3.拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00”4.切换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度5.使用完毕后，置于休息档（1.5档）拉杆，1-4档样品池读数波长1、分清光面、毛面 手只可接触毛面，光线须从光面通过2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面4、从低到高依次测量，不需清洗比色杯5、蒸馏水冲洗3-5次，擦干，倒扣放置比色皿的使用毛面光面改良Lowry氏法测定蛋白质含量 实 验 1实验原理 凯氏定氮法 16%紫外吸收 280nm呈色反应费时

3、较长，而且要精确控制操作时间。显色程度与时间有关。专一性较差，干扰物质较多。灵敏度高双缩脲法的检出限为 0.21.7 mg/ml，而本法的检出限为0.0150.110 mg/ml。优 点缺 点实 验 步 骤 试剂（ml）蛋白标准品 样品测定管0 1 2 3 4 5Pr标准液 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 待测血清 1.0生理盐水1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0试剂A 0.9ml,混匀后，37水浴10min试剂B 0.1ml,混匀后，室温放置10min试剂C 3ml,立即混匀，37水浴10min2、浓度换算样品体积实测蛋白质量待测蛋白浓度（g/L）=实测蛋白浓度

4、稀释倍数待测蛋白浓度（g/L）=稀释倍数注意1 终体积相同的前提下，可以用质量代表浓度 例如：1号管中，蛋白质量为0.02mg，而其终浓度为0.004mg/ml2 注意溶液的稀释倍数 例如：若以浓度为横坐标，根据吸光度得到实测蛋白浓度为0.02mg/ml,则待测蛋白浓度=0.02mg/ml x 5 x 1000=100mg/ml 若以质量为横坐标，根据吸光度得到实测蛋白质量为0.1mg,则待测蛋白浓度=(0.1mg/1ml)x 1000=100mg/ml 未知浓度蛋白溶液实测蛋白溶液 1ml终体积 5ml测吸光度1:1000稀释加入A、B、C试剂计算出终浓度 c实测蛋白浓度为 cx5未知蛋白浓度为 cx5x1000浓度换算过程解析未知浓度蛋白溶液的处理过程浓度的换算过程计算出质量 m实测蛋白浓度为 m/1ml未知蛋白浓度为(m/1ml)x1000注 意 事 项1、测定管蛋白浓度应在0.015-0.110 mg/ml；2、各管加试剂C必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊；3、精确控制操作时间。