水生实验动物质量监测学习教案.pptx
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1、会计学1水生实验动物质量水生实验动物质量(zhling)监测监测第一页,共72页。第2页/共72页第二页,共72页。与实验与实验(shyn)动物相关标准动物相关标准实验动物遗传(3)实验动物哺乳类实验动物的遗传(ychun)质量控制 GB14923 实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测(jin c)方法 GB/T14927.1实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法 GB/T14927.2 第3页/共72页第三页,共72页。近交系、封闭群、杂交群 近交系:至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成,品系内所有个体都可以追溯到起源20代或以后代数的一对祖先。近交系数应大于99%。封闭群:以非近亲交配方式进
2、行繁殖生产的一个(y)实验动物种群,在不从外界引入新个体的条件下,至少连续繁殖4代以上。杂交群:由不同品系或种群之间杂交产生的后代。第4页/共72页第四页,共72页。n n遗传监测(jin c)重要性n n 保障品系的遗传特性n n 防止发生遗传突变和遗传污染第5页/共72页第五页,共72页。实验动物寄生虫学等级(dngj)及检测 GB14922.1实验动物(dngw)寄生虫学检测方法GB/T18448.1-18448.10实验(shyn)动物微生物学等级及检测 GB14922.2实验动物微生物学检测方法(1)GB/T14926.42-14926.43 实验动物微生物学检测方法(2)GB/T1
3、4926.1-14926.6;GB/T14926.8-14926.17;GB/T14926.41;GB/T14926.44-14926.49实验动物微生物学检测方法(3)GB/T14926.50-14926.55 实验动物质量(8)实验动物检测方法(4)GB/T14926.18-14926.32 GB/T14926.56-14926.64 SPF鸡微生物学监测总则 GB/T17998 第6页/共72页第六页,共72页。普通级动物(dngw)(Conventional Animal,CV)(基础级动物(dngw))清洁(qngji)级动物(Clean Animal,CL)无特定(tdng)病原体
4、级动物(Specific Pathogen Free Animal,SPF)无菌级动物(Germ Free Animal,GF)GB14922.1GB14922.2实验动物第7页/共72页第七页,共72页。类别病原菌病毒寄生虫动物种类小鼠、大鼠豚鼠、兔犬、猴小鼠、大鼠豚鼠、兔犬、猴小鼠、大鼠豚鼠、兔犬、猴项目沙门菌、支原体、泰泽病原体等沙门菌、多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌等志贺菌、结核杆菌等鼠痘病毒、汉坦病毒、仙台病毒和小鼠肝炎病毒等兔瘟、仙台病毒等B病毒、逆转录病毒等体外寄生虫、弓形体等弓形体、兔脑原虫、球虫等弓形体、溶组织阿米巴等数量(项)161491489765SPF级动物(dngw)监
5、测项目我国实验动物质量要求的最低标准,其它行业、地方(dfng)标准不能低于国家标准要求。第8页/共72页第八页,共72页。保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。确保(qubo)实验数据的准确性和可重复性。质量监测(jinc)意义实验动物的微生物学、寄生虫学质量(zhling)监测第9页/共72页第九页,共72页。实验动物环境设施(2)实验(shyn)动物环境与设施 GB14925实验(shyn)动物设施建筑技术规范 GB50447第10页/共72页第十页,共72页。n n日常性监督指标n n 温度、日温差、相对湿度、压差(y ch);n n监督性检测指标n n 沉降菌、氨气浓度、噪声、
6、照度;n n必要时检测指标n n 空气洁净度、换气次数、气流速度、昼夜明暗交替时间。第11页/共72页第十一页,共72页。实验动物营养和饲料(12)实验动物配合(pih)饲料通用质量标准 GB14924.1 实验动物配合(pih)饲料卫生标准 GB14924.2实验动物小鼠、大鼠配合(pih)饲料 GB14924.3 实验动物兔配合(pih)饲料 GB14924.4实验动物豚鼠配合(pih)饲料 GB14924.5 实验动物地鼠配合(pih)饲料 GB14924.6实验动物犬配合(pih)饲料 GB14924.7实验动物猴配合(pih)饲料 GB14924.8实验(shyn)动物配合饲料常规营
7、养成分的测定GB/T14924.9 实验(shyn)动物配合饲料氨基酸的测定GB/T14924.10 实验(shyn)动物配合饲料矿物质和微量元素的测定GB/T 14924.12 实验(shyn)动物配合饲料维生素的测定 GB/T 14924.11 第12页/共72页第十二页,共72页。笼具(地方(dfng)标准)塑料笼箱;隔离器;代谢笼;笼架;层流(cn li)架;饮水瓶;IVC第13页/共72页第十三页,共72页。动物动物(d(dnngwgw)编号编号(b(biin n hho)o)外观外观(wigu(wigun)n)检检查查麻麻醉醉皮肤取样皮肤取样取血取血无菌解剖无菌解剖检测检测检测报告
8、检测报告真菌检查真菌检查 分离血清,分离血清,检查病毒检查病毒抗体或其抗体或其他病原抗他病原抗体体 气管分泌物、气管分泌物、肠内容物、脏肠内容物、脏器分离细菌器分离细菌采用抽样检测。检测程序包括监测项目的选定、采样、检测。第14页/共72页第十四页,共72页。采样(ci yn)要求(yoqi)方法(fngf)成年动物 哨兵动物法(CD1小鼠)群体大小(只)取样数量1)100 不少于5只100-500 不少于10只 500 不少于20只1)每个隔离器检测2只。繁殖单元随机抽样法(例如四角和中央)第15页/共72页第十五页,共72页。检测(jin c)频率普通级动物:每三个月至少(zhsho)检测
9、 动物一次。清洁级动物:每三个月至少(zhsho)检测动物一次。无特定病原体动物:每三个月至少检测动物一次。无菌动物:每年检测动物一次。每2-4周检查一次动物的生活环境标本和粪便标本。第16页/共72页第十六页,共72页。监测(jinc)方法细菌检测病毒检测寄生虫检测病原检测(细菌、真菌)检测抗体方法病原检测分离培养血清学检测(ELISA、IEA、IFA、HI)镜检(直接涂片法、饱和盐水漂浮法或沉淀法、透明胶纸肛门周围粘取法、组织或器官剖面压印法、病变组织切片或压片法、尿液的离心法)GB/T14926.1-14926.64GB/T18448.1-18448.10第17页/共72页第十七页,共7
10、2页。水生实验动物的质量水生实验动物的质量(zhling)控制控制n n水生生物终生生活在水中,绝大部分体外受精、体外发育,在许多领域得到广泛应用,是毒性试验、环境监测(jin c)、发育生物学、生理学、生态学、遗传学等研究常用的实验材料。n n目前还没有质量监测(jin c)标准,来保障实验用水生生物的质量。第18页/共72页第十八页,共72页。n n国际斑马鱼研究中心提供974种斑马鱼,主要包括(boku)野生型和转基因和基因突变动物。第19页/共72页第十九页,共72页。检测检测(jin c)类别类别n n水体质量问题水体质量问题 n n一般检查和剖检一般检查和剖检 n n细菌细菌(xj
11、n)(xjn)疾病疾病 n n寄生虫疾病(原生虫疾病、多寄生虫疾病(原生虫疾病、多细胞寄生虫)细胞寄生虫)n n非感染性和先天性疾病非感染性和先天性疾病 n n肿瘤疾病肿瘤疾病 第20页/共72页第二十页,共72页。国内外斑马鱼环境控制(kngzh)指标一览表监测指标国内国外水温20-30,28.5 最佳27-29pH6.5-86.3-7.3硬度6-8dGH无要求光照300-500lx无要求光/暗12h/12h无要求氧含量无要求5.5mg/l氨含量无要求0ppm氯含量无要求0ppm盐度无要求0.003电导率无要求93 ms/m;500微米/s亚硝酸盐无要求0.1mg/L以下水置换率/流速无要求
12、10%/天 0.1m/s铜无要求无统一值气体饱和度无要求无统一值第21页/共72页第二十一页,共72页。水体质量水体质量水体质量水体质量(zhling)(zhling)问题(问题(问题(问题(Water Quality ProblemsWater Quality Problems)n n铜毒性铜毒性(d xn)(d xn)n n氯毒性氯毒性(d xn)(d xn)n n氨毒性氨毒性(d xn)(d xn)n n亚硝酸盐毒性亚硝酸盐毒性(d xn)(d xn)n n气泡病(气泡病(Gas Bubble Gas Bubble DiseaseDisease)第22页/共72页第二十二页,共72页。n
13、 n铜毒性铜毒性n n 表现:咳嗽反射、换气次数和氧消耗增加、部分鱼嗜睡或不协调;表现:咳嗽反射、换气次数和氧消耗增加、部分鱼嗜睡或不协调;发育迟缓发育迟缓(chhun)(chhun)、畸胎。、畸胎。n n 显微观察:鳃和侧线损伤,肝细胞可能出现空泡。显微观察:鳃和侧线损伤,肝细胞可能出现空泡。n n氯毒性氯毒性n n 鱼对氯很敏感,引起急慢性死亡。鱼对氯很敏感,引起急慢性死亡。n n 表现:鱼鳃严重急性坏死,呼吸困难,头周围出现斑点。表现:鱼鳃严重急性坏死,呼吸困难,头周围出现斑点。n n 显微观察:鱼鳃严重坏死。显微观察:鱼鳃严重坏死。第23页/共72页第二十三页,共72页。n n氨毒性n
14、 n 表现:行为异常(ychng)(兴奋过度、厌食、生长迟缓,对病原敏感),换气减少。n n 显微观察:鱼鳃上皮增生。n n亚硝酸盐毒性n n 表现:组织缺氧。第24页/共72页第二十四页,共72页。n n气泡病n n 气体饱和度超过当时温度、盐度和压力条件下的最大值。n n 表现:皮肤、鱼鳍或鳃出现肉眼(ruyn)可见泡沫,眼球后组织也可见明显泡沫,眼球突出。n n 显微观察:组织切片可见泡沫。第25页/共72页第二十五页,共72页。一般一般一般一般(ybn)(ybn)检查和剖检(检查和剖检(检查和剖检(检查和剖检(General General Diagnostics and Necrop
15、sy Protocols Diagnostics and Necropsy Protocols)n n行为行为(xngwi)(xngwi)n n体表检查体表检查 n n鱼腮鱼腮 n n剖检剖检 n n触片(触片(imprintsimprints)n n组织学组织学 第26页/共72页第二十六页,共72页。行为(xngwi)摩擦(mc)寄生虫反常的呼吸(hx)模式腮损伤旋转或盘旋游泳神经损伤另一些疾病迹象(绝食、精神萎靡、待在不正常部位)第27页/共72页第二十七页,共72页。n n体表检查体表检查 :立体解剖显微镜:立体解剖显微镜n n 异常:鱼鳍磨损、眼球混浊、异常:鱼鳍磨损、眼球混浊、溃疡
16、、褪色、体表寄生虫和肿溃疡、褪色、体表寄生虫和肿瘤瘤(zhngli)(zhngli)等等 n n 制作湿片(制作湿片(Prepare wet Prepare wet mounts mounts):观察寄生虫和其:观察寄生虫和其它病原体它病原体第28页/共72页第二十八页,共72页。鱼腮鱼腮颜色颜色解剖镜下检查解剖镜下检查 :寄生虫、囊肿、:寄生虫、囊肿、粘液过多和出血等粘液过多和出血等 制作湿片:寄生虫、真菌制作湿片:寄生虫、真菌(zhnjn)(zhnjn)和细菌和细菌 第29页/共72页第二十九页,共72页。n n剖检:n n 体腔:腹水、出血或其它异常 n n 肾脏:肿大、褪色 n n 心
17、脏:是否正常 n n 内脏器官:白色的囊肿可能感染分支杆菌 n n 组织压片:寄生虫、真菌或肉芽肿n n触片:常用Giemsa或Diff-Quik染色n n 对肾脏或其它感染脏器检查(jinch)原虫和细菌 第30页/共72页第三十页,共72页。n n组织诊断n n 鱼的整体(通常纵切)或有代表性的脏器(zn q)进行固定,固定液Dietrichs或Davidson,进行切片,染色镜检。第31页/共72页第三十一页,共72页。细菌细菌细菌细菌(xjn)(xjn)疾病(疾病(疾病(疾病(Bacterial DiseasesBacterial Diseases)n n分支杆菌病(分支杆菌病(Myc
18、obacteriosis)n n滑动细菌滑动细菌(xjn)(Gliding Bacteria)n n 细菌细菌(xjn)性喉囊炎性喉囊炎(Bacterial aerocystitis)鱼鳔鱼鳔细菌细菌(xjn)感染感染 第32页/共72页第三十二页,共72页。1.1.分支杆菌病2.2.病原:海分支杆菌、脓肿分支杆菌、龟分支杆菌、偶发分支杆菌、草分支杆菌和嗜血分支杆菌等。3.3.临床症状和病变:溃疡、出血、头部周围充血、鱼鳞凸起、鱼鳍磨损、皮肤或鳃苍白等。内脏器官白色结节。4.4.显微观察:肉芽肿5.5.诊断:抗酸染色(rns)、PCR确诊。第33页/共72页第三十三页,共72页。2.2.滑动细
19、菌(细菌性鳃病、环境性鳃病)3.3.病原:黄杆菌属、屈桡杆菌等菌属;淡水鱼主要感染柱状黄杆菌和嗜鳃黄杆菌。4.4.临床症状和病变:呼吸困难,鱼鳍和鱼尾表现特征性鱼鳍腐蚀,白色。5.5.显微观察:上皮增生,次级鳃瓣融合,有的坏色,病变部位可见大量(dling)细菌。6.6.诊断:观察到细菌。第34页/共72页第三十四页,共72页。3.3.细菌性喉囊炎4.4.病原:不能确定具体的细菌类型,免疫抑制鱼内脏细菌移植到鱼漂引起疾病。5.5.临床症状和病变:嗜睡,聚集鱼池底部。鱼鳍基部出现红斑。6.6.显微观察:鱼漂出现大范围损伤和严重慢性炎症。组织切片可见明显坏死(hui s),革兰氏染色可见大量细菌群
20、落。7.7.诊断:组织切片观察到特征性损伤,多种染色证实细菌的存在。第35页/共72页第三十五页,共72页。寄生虫病寄生虫病n n天鹅绒疾病天鹅绒疾病(jbng)(Velvet Disease)n n微孢子虫病微孢子虫病(Microsporidiosis)n nIch(白点病)(白点病)原生动物原生动物(yunshng-dngw)(yunshng-dngw)疾病(疾病(Protozoan DiseasesProtozoan Diseases)第36页/共72页第三十六页,共72页。原生动物原生动物(yunshng-dngw)疾病疾病 1.1.1.1.天鹅绒疾病天鹅绒疾病天鹅绒疾病天鹅绒疾病 2
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