阿莫西林的含量测定方案.pdf

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1、阿莫西林的含量测定方案 一一、设计背景设计背景 阿莫西林（结构式见图 1）又名安莫西林或安默西林，是 20 世纪 70 年代开发的半合成青霉素类广谱-内酰胺类抗生素，原料药为一种白色粉末。本品在酸性环境下稳定，在胃肠道中的吸收率高达百分之九十。阿莫西林有极强的杀菌效果，且可穿透细胞，具有较强的杀灭溶血链球菌、肠球菌、肺炎球菌、沙门菌属、幽门螺旋杆菌等的作用，常用于治疗上、下呼吸道感染、皮肤软组织感染、急性单纯性淋病、泌尿生殖道感染等；还可用于治疗伤寒、伤寒带菌者及钩端螺旋体病；阿莫西林亦可与克拉霉素、兰索拉唑三联用药根除胃、十二指肠幽门螺杆菌，降低消化道溃疡复发率。由于阿莫西林具有杀菌力强、口

2、服吸收快,、毒副作用低等特点，已经迅速发展成为最常用的口服抗生素之一，在半合成青霉素类抗生素中占据主导地位。阿莫西林在 1995 年被中华医学会推荐为抗感染首选药物，目前也是世界卫生组织推荐的首选-内酰胺类口服抗生素之一。现在一般将阿莫西林制作为胶囊、颗粒、片剂、分散片等应用于临床，常与克拉维酸合用制成分散片使用。制剂产品的高质量离不开优质的原料药，故本方案拟对阿莫西林原料药的含量测定方法进行设计，旨在为阿莫西林质量标准的提高提供一定法参考依据。图 1 阿莫西林 二二、设计依据设计依据 阿莫西林为-内酰胺类抗生素，临床疗效好，且口服不易过敏。经查阅相关期刊文献及中国药典（2020 版），了解到

3、阿莫西林的质量标准已收录到中国药典（2020版），且目前有关阿莫西林的含量测定方法主要是高效液相色谱法。考虑到高效液相色谱法具有专属性好、准确度高、精密度高、样品分析速度快等优点，且常用的高效液相色谱仪配备的检测器一般为紫外检测器，阿莫西林具有紫外吸收，故本方案主要参考中国药典(2020 版）第二部阿莫西林项下含量测定的方法和相关参考文献资料进行设计，制定阿莫西林的含量测定方案，旨在为阿莫西林的质量标准提高提供一定的参考依据。三三、设计方案设计方案 1.材料和仪器 （1）仪器 十万分之一电子天平（型号：ESJ100-4B，厂家：沈阳神宇龙腾天平有限公司），高效液相色谱仪（紫外检测器）（型号：安

4、捷伦 1260，厂家：美国安捷伦科技有限公司）（见图 2）。图 2 高效液相色谱仪（2）材料 阿莫西林对照品（中国食品药品检定研究院，纯度：86.9%），阿莫西林原料药（武汉英和制药有限公司），甲醇（色谱纯，上海迈瑞尔化学技术有限公司），乙腈（色谱纯，天津益仁达化工有限公司），磷酸二氢钾、氢氧化钾均为分析纯，购于国药集团，水为纯化水。2.色谱条件（1）色谱柱：C18柱（长 250mm，内径 4.6mm，填料粒径 5m）。（2）流动相：以 0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液（用 2mol/l 氢氧化钾溶液调节 pH 至 5.0）-乙腈（97.5%2.5%）为流动相，可根据试验结果适当调整乙腈的比

5、例。（3）流速：1.0ml/min。（4）柱温：30。（5）检测波长：254nm(阿莫西林的最大吸收波长处）。（6）进样室温度：室温。（7）进样体积：20l。3.溶液的配制（1）供试品溶液的制备 取本品适量（约相当于阿莫西林 25mg，按 N16H19N3O5S 计），精密称定，置于 50ml 的容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度线，摇匀，作为供试品溶液，备用。（2）对照品溶液的制备 取阿莫西林对照品适量（约相当于阿莫西林 25mg，按 N16H19N3O5S 计），精密称定，加流动相溶解并定量稀释至刻度线，制成每 1ml 中约含阿莫西林（按 N16H19N3O5S 计）0.5mg/ml的对照

6、品溶液，备用。4.测定方法 （1）仪器操作步骤 开机 按要求装好流动相，设置流动体积，检查溶剂托盘上的溶剂是否足量，按上述色谱条件的要求设置流动相比例，逐渐将流速增大至 1.0ml/min，设置色谱柱温为 30、进样体积 20l。平衡色谱柱约 30min 左右，监视基线，待压力线和信号线平整，准备实验。将配制好的供试品溶液、对照品溶液依序放置于样品架上；新建分析序列，选择其对应的采集方法和图谱处理法，编辑样品信息并复核；样品信息包括进样顺序、样品名、样品架位置、采集方法名、图谱处理方法名、进样量等，打开氚灯并设置检测波长为 254nm，等待系统基线走稳。所有样品分析结束后，关闭检测器；更换流动

7、相为甲醇：水（1090）冲洗 30min，再用纯甲醇冲洗 60min；关机。（2）外标法计算公式如下 注：CR：对照品溶液的浓度；AR：对照品峰面积；A X：供试品峰面积；V：初配体积（50ml）；D：稀释倍数（1）。5.方法学考察（1）专属性试验 取上述制备的阿莫西林对照品溶液、供试品溶液及流动相溶液（作为空白溶液），按色谱条件的方法分别进样分析，记录的色谱图。供试品溶液图谱中应有阿莫西林色谱峰，且分离度应符合要求，阿莫西林的理论塔板数应不低于 2000，空白溶液色谱图中应无阿莫西林检出，则表明该方法专属性良好。（2）线性关系考察 取阿莫西林对照品约 50mg（按 N16H19N3O5S 计

8、），精密称定，置 10ml 的容量瓶中，加流动相溶解并定量稀释至刻度，摇匀，作为阿莫西林对照品储备液。分别精密吸取制备的对照品储备液 2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml 置于 50ml 容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度线，摇匀，即得系列浓度的阿莫西林对照品溶液。按色谱条件项下的要求依次进样测定，记录各浓度下的阿莫西林色谱峰面积，以阿莫西林的浓度（C）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标作图，经线性回归得到回归方程，其线性相关系数应大于 0.999，则表明此方法线性关系良好。（3）精密度试验 取上述标准曲线中间浓度的阿莫西林对照品溶液，按色谱条件的方法连续进样 6 次，记录峰

9、面积，峰面积的相对标准偏差（RSD）应小于或等于 2.0%。（4）回收率试验 取阿莫西林对照品适量(约相当于阿莫西林 20mg、25mg、30 mg)各 3 份，置于 50ml容量瓶中，分别按上述“3.溶液的配制”项下供试品溶液的制备方法制备溶液，配成高、中、低三种浓度的溶液，按照色谱条件的方法依次进样分析，得到色谱图，计算阿莫西林的回收率。回收率应在 98.0%-102.0%，RSD 值不大于 2.0%。（5）稳定性试验 取阿莫西林供试品，按 3 溶液的配制项下供试品溶液的制备方法配制供试品溶液，分别于配制好后室温放置的 0、1、2、3、4、6、8 小时按色谱条件的方法进样分析，记录色谱图，

10、阿莫西林供试品的峰面积的 RSD 值均应小于或等于 2.0%，则表明供试品溶液在室温条件下 8 小时内稳定。（6）重复性试验 取阿莫西林供试品，按“3.溶液的配制”项下供试品溶液的制备方法配制供试品溶液，按色谱条件的方法依次进样 6 次，记录峰面积，峰面积的 RSD 值应不大于 2.0%。（7）耐用性考察 分别考察流动相比例的变化、流动相 pH 值的变化、柱温的变化、检测波长的变化、流速变化以及采用 2 根不同批号的色谱柱进行测定，每个条件下测定 2 次，可接受的标准为：主成分峰与可能含有的杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量结果的相对标准偏差应不大于 2.0%。6样品测定 取阿莫西林供试品

11、三批，按“3.溶液的配制”项下供试品溶液的制备方法，每批样品平行制备两份溶液，按上述色谱条件的方法进样分析，计算每批次样品中阿莫西林的含量，按无水物计算，含阿莫西林（N16H19N3O5S）应不少于 95.0%。四四、预期效果预期效果 可按照以上方案配置溶液、设定色谱条件、进行测定（若不符合要求可更换色谱柱或优化流动相），最终求得阿莫西林的含量。需要注意的是：若杂质分离效果不佳，可考虑调整柱温、更换厂家色谱柱或调整流动相，分析过程中阿莫西林的保留时间，色谱柱压力波动应该在允许的范围内。五五、参考资料参考资料 1冉兵.西药阿莫西林的药理作用机制以及临床应用J.长寿,2020(01):121-122.2彭秀丽,胡光华,张竹,孙丽艳.阿莫西林药理机制及临床应用探讨J.世界最新医学信息文摘,2018,18(96):299+302.3 孟 蕾.HPLC 法 测 定 阿 莫 西 林 胶 囊 中 阿 莫 西 林 的 含 量 J.科 技 致 富 向导,2014(35):137.4国家药典委员会.中华人民共和国药典(第二部)M.北京:中国医药科技出版社,2020.699.5欧阳卉,唐倩，药物分析(第三版)M.北京:中国医药科技出版社,2017.