呼吸道病毒标本采集运输、保存与实验室结果判读-PPT.ppt
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1、呼吸道病毒标本采集运输、保存呼吸道病毒标本采集运输、保存与实验室结果判读与实验室结果判读相关呼吸道病毒概况相关呼吸道病毒概况呼吸道病毒呼吸道病毒 呼呼吸吸道道病病毒毒是是指指一一大大类类能能侵侵犯犯呼呼吸吸道道引引起起呼呼吸吸道道局局部部病病变变,或或仅仅以以呼呼吸吸道道为为入入侵侵门门户户,主主要要引引起起呼呼吸吸道道外外组组织织器器官官病病变变的的病病毒毒。拒拒统统计计,90%90%以上的急性上呼吸道感染由病毒引起。以上的急性上呼吸道感染由病毒引起。呼吸道病毒的分类呼吸道病毒的分类l正粘病毒科正粘病毒科 流感病毒(流感病毒(A、B、C)l副粘病毒科副粘病毒科 副流感病毒(副流感病毒(I-I
2、V)、呼吸道合胞病毒、)、呼吸道合胞病毒、偏肺炎病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒偏肺炎病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒 l小小RNA病毒科病毒科 肠道病毒(脊髓灰质炎病毒、肠道病毒(脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒埃可病毒)、鼻病毒、心病毒)、鼻病毒、心病毒l腺病毒科腺病毒科 腺病毒腺病毒l冠状病毒科冠状病毒科 SARS-CoV,229E,OC43,NL63,HKU1l细小病毒细小病毒 博卡病毒(博卡病毒(1-4)l呼肠孤病毒科呼肠孤病毒科 正呼肠孤病毒属正呼肠孤病毒属l疱疹病毒科疱疹病毒科 单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒病毒 水痘带状疱疹病毒、水痘带状疱疹病
3、毒、l披膜病毒科披膜病毒科 风疹病毒风疹病毒l多瘤病毒多瘤病毒 WU、KI呼吸道病毒感染的特点呼吸道病毒感染的特点l病毒的多样性和变异性;病毒的多样性和变异性;l在在引引起起成成人人感感冒冒的的病病毒毒群群中中:鼻鼻病病毒毒占占30%-35%,冠冠状状病病毒毒占占20%-30%,其他病毒占,其他病毒占10%-15%。l大大部部分分情情况况下下,病病毒毒入入侵侵部部位位、入入侵侵后后繁繁殖殖部部位位、由由此此引引发发的的组组织织和和免免疫疫病病理理改改变变以以及及表表现现出出的的临临床床症症状状和和体体征征的的部部位位基基本本在在呼呼吸吸道道,表表现的病情较轻;现的病情较轻;l一般无病毒血症;一
4、般无病毒血症;l有些病毒还可引起肠道感染;有些病毒还可引起肠道感染;l免疫力不持久;免疫力不持久;正粘病毒的基本特征正粘病毒的基本特征流行性感冒病毒(简称流感病毒):流行性感冒病毒(简称流感病毒):是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒,在分类学上,流感病毒属于正黏液病毒科理化特性:理化特性:对热敏感,5630min可灭活;最适pH为7.08.0,3.0和10.0感染力很快被破坏;对紫外线敏感;对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感。流行性感冒概述流行性感冒概述流行性感冒(简称流感)流行性感冒(简称流感):是由甲(是由甲(A A)、乙()、乙(B B)、丙()、丙(C C)三型流感病毒分别)
5、三型流感病毒分别 引起的急性呼吸道传染病。引起的急性呼吸道传染病。临床表现:临床表现:起病急、高热(起病急、高热(38384040)、肌痛、头痛伴有严重不)、肌痛、头痛伴有严重不适、干咳、咽喉痛或鼻炎,多数患者可在一到两周内恢适、干咳、咽喉痛或鼻炎,多数患者可在一到两周内恢复。复。潜伏期短(潜伏期短(1-1-3 3天)、经呼吸道飞沫传播,传播迅天)、经呼吸道飞沫传播,传播迅速,抗原易变异,人群对变异株普遍易感,控制难度大,速,抗原易变异,人群对变异株普遍易感,控制难度大,流感流行呈一定季节性。流感流行呈一定季节性。流感病毒概述流感病毒概述分型与命名分型与命名 根据流感病毒感染的对象,可以将病毒
6、分为人类流感病根据流感病毒感染的对象,可以将病毒分为人类流感病毒、猪流感病毒、马流感病毒以及禽流感病毒等类群。毒、猪流感病毒、马流感病毒以及禽流感病毒等类群。根据病毒粒核蛋白(根据病毒粒核蛋白(NPNP)和膜蛋白()和膜蛋白(MP)MP)抗原特性及其抗原特性及其基因特性的不同,可以将病毒分为甲(基因特性的不同,可以将病毒分为甲(A A)、乙()、乙(B B)、丙)、丙(C C)三型。)三型。甲型流感病毒根据其表面结构(甲型流感病毒根据其表面结构(H H和和N N)及其基因特性的)及其基因特性的不同可分为多种亚型。不同可分为多种亚型。目前已从甲型流感病毒的天然宿主水禽中分离到16种HA与9种NA
7、亚型的甲型流感病毒。禽流感病毒禽流感病毒H5N1H5N1、H9N2H9N2、H7N7H7N7以及以及H10N7H10N7等均有感染人的等均有感染人的报道。报道。血清学的证据表明血清学的证据表明H4H4、H6H6以及以及H11H11亚型亚型 AIVsAIVs也可能感染也可能感染过人。过人。根据禽流感病毒对鸡致病性的不同,根据禽流感病毒对鸡致病性的不同,AIVsAIVs可以分为低致病可以分为低致病性禽流感病毒(性禽流感病毒(LPAIVLPAIV)和高致病性禽流感病毒()和高致病性禽流感病毒(HPAIVHPAIV)。)。近几十年,不断有近几十年,不断有HPAIVHPAIV和和LPAIVLPAIV感染
8、人的报道,均是由禽感染人的报道,均是由禽直接传给了人,并没有病毒能在人群中有效传播的证据。直接传给了人,并没有病毒能在人群中有效传播的证据。H7H7亚型亚型AIVsAIVs也可按照地域不同分为两个基因谱系:北美谱也可按照地域不同分为两个基因谱系:北美谱系和欧亚谱系,且均有感染人的报道系和欧亚谱系,且均有感染人的报道副粘病毒的基本特征副粘病毒的基本特征l副粘病毒科副粘病毒科(Paramyxoviridae)拥有拥有2个病毒亚科个病毒亚科6个属。个属。l副副粘粘病病毒毒的的基基因因组组为为单单股股负负链链RNA,不不分分节节段段。基基因因组组约约1520kb,编码的蛋白,编码的蛋白811个或更多。
9、个或更多。l副副粘粘病病毒毒毒毒粒粒直直径径约约150350nm,含含有有螺螺旋旋状状核核壳壳。病病毒毒颗颗粒粒呈呈多多形形性性,但但通通常常为为圆圆形形,均均有有包包膜膜。即即使使在在同同一一种种病毒,毒粒的大小也不相同。细胞浆内复制。病毒,毒粒的大小也不相同。细胞浆内复制。小小RNA病毒的基本特征病毒的基本特征l小小RNA病病毒毒(Picornavirus)小小RNA病病毒毒有有9个个属属,其其中中已已知知5个个含含有有人人类类病病原原。小小RNA病病毒毒颗颗粒粒每每个个含含有有4种种蛋蛋白白(VP1-VP4),各各有有60个个拷拷贝贝,呈呈二二十十面面体体对对称称结结构构,直直径大约径大
10、约30nm,无包膜。,无包膜。l小小RNA病病毒毒基基因因组组为为单单股股正正链链RNA分分子子,大大小小约约8kb,能能够够在在细细胞胞浆浆内内翻翻译译出出病病毒毒复复制制所所需需的的所所有有病病毒毒蛋蛋白白,因因此此具有感染性。具有感染性。Cox肠道病毒肠道病毒感染特点感染特点感染特点感染特点l非非脊脊髓髓灰灰质质炎炎肠肠道道病病毒毒(NPEV),主主要要包包括括Cox、ECHO和一些新型肠道病毒;和一些新型肠道病毒;l感感染染广广泛泛,仅仅在在美美国国每每年年症症状状性性感感染染达达500万万1000万万。感感染染主主要要发发生生在在夏夏秋秋季季节节,发发病病率率和和严严重重程程度度与与
11、年年龄龄成成反反比,幼儿是主要受害者;比,幼儿是主要受害者;l可可引引起起普普通通感感冒冒、心心肌肌炎炎、无无菌菌性性脑脑膜膜炎炎、脑脑炎炎等等多多种种疾疾病。绝大部分感染是无症状性的,很难与鼻病毒感染区分。病。绝大部分感染是无症状性的,很难与鼻病毒感染区分。l在液体中稳定;在液体中稳定;l脑脑脊脊液液、血血清清、全全血血、尿尿可可以以放放在在原原始始采采集集管管中中送送交交实验室;直肠或咽拭子、鼻洗液等放入实验室;直肠或咽拭子、鼻洗液等放入VTM;样本采集样本采集样本采集样本采集肠道病毒肠道病毒鼻病毒鼻病毒l病病毒毒复复制制及及症症状状特特征征主主要要在在鼻鼻部部,人人普普通通感感冒冒有有1
12、/31/2由由鼻鼻病病毒毒引引起;起;l1960年年代代分分离离成成功功,至至1987年年已已经经鉴鉴别别了了100血血清清型型;根根据据基基因因特特征征可将这些血清型分为可将这些血清型分为A、B两属;两属;2007年发现年发现C属,目前不能培养属,目前不能培养l温温带带地地区区感感染染高高峰峰为为每每年年9月月,春春天天有有第第二二次次感感人人那那高高峰峰,夏夏天天可可持持续发生;续发生;l无组特异性抗原,型见可有交叉,血清型变化频繁;无组特异性抗原,型见可有交叉,血清型变化频繁;l病毒经呼吸道分泌物从人传播到人;病毒经呼吸道分泌物从人传播到人;l潜潜伏伏期期23d,病病毒毒排排出出高高峰峰
13、期期与与急急性性鼻鼻炎炎一一致致;45d时时检检测测不不到到病病毒或维持低滴度达毒或维持低滴度达2周,症状一般维持周,症状一般维持7d;l下下呼呼吸吸道道感感染染也也常常发发生生。尤尤其其是是对对于于婴婴幼幼儿儿、老老年年人人、慢慢性性病病患患者者或或原有肺病患者,常与原有肺病患者,常与RSV感染不易区分;感染不易区分;l没有胞膜,对有机溶剂有抵抗力。没有胞膜,对有机溶剂有抵抗力。感染特点感染特点感染特点感染特点l症状出现后症状出现后16d均可分离到病毒,病毒排泌均可分离到病毒,病毒排泌13 d明显;明显;l标本应在鼻部采集而不是咽部采集;标本应在鼻部采集而不是咽部采集;l鼻洗液是鼻病毒分离最
14、好的标本;样本鼻洗液是鼻病毒分离最好的标本;样本4可保存可保存2448h。鼻病毒鼻病毒样本采集样本采集样本采集样本采集l线型双链线型双链DNA,不分节段,基因组长不分节段,基因组长3000042000bp,编码约编码约30种蛋白;种蛋白;l病毒无包膜,二十面立体对称,直径约病毒无包膜,二十面立体对称,直径约7090nm,具,具12个顶角和纤维刺突。个顶角和纤维刺突。腺病毒腺病毒l潜伏期潜伏期58d;l通常为局部感染;通常为局部感染;l约约5%的的儿儿童童急急性性呼呼吸吸道道疾疾病病及及约约10%的的婴婴幼幼儿儿腹腹泻泻由由腺腺病病毒毒引起;引起;l咽咽炎炎,急急性性呼呼吸吸系系统统疾疾病病(3
15、,4,7,21,1,2,5,6),滤滤泡泡性性结结膜膜炎炎,流流行行性性角角膜膜结结膜膜炎炎,咽咽结结膜膜热热,尿尿路路感感染染(子子宫颈炎、尿道炎、出血性膀胱炎)以及无症状持续感染;宫颈炎、尿道炎、出血性膀胱炎)以及无症状持续感染;l脑膜脑炎可为腺病毒呼吸道感染的并发症。脑膜脑炎可为腺病毒呼吸道感染的并发症。腺病毒腺病毒感染特点感染特点感染特点感染特点l鼻鼻咽咽拭拭子子或或抽抽出出物物、鼻鼻拭拭子子或或抽抽出出物物、眼眼分分泌泌物物拭拭子子、粪粪便便或或直直肠肠拭拭子子、尿尿、尿尿道道或或宫宫颈颈拭拭子子以以及及活活检检或或尸尸检检组组织织都是可根据病人症状获得的合适标本。都是可根据病人症状
16、获得的合适标本。l疾疾病病早早期期正正确确收收集集样样品品并并立立即即冷冷冻冻送送往往实实验验室室可可大大大大提提高高病毒检出率。病毒检出率。l用用血血清清学学方方法法建建立立或或证证实实诊诊断断需需要要配配对对的的血血样样。第第一一份份样样品品在在症症状状出出现现后后应应立立即即尽尽快快收收集集,第第二二份份应应在在2-4周周后后收收集集。样本采集样本采集样本采集样本采集腺病毒腺病毒冠状病毒冠状病毒l单股正链单股正链RNA,27-31KD,5端甲基化端甲基化“帽子帽子”,3端端polyA尾。尾。l 根据基因序列和血清学,分成三组,感染人类的分属于根据基因序列和血清学,分成三组,感染人类的分属
17、于I和和II组,包括组,包括229E、NL63、OC43、HKU1和和SARS-CoV。Woo,etal.ExpBiolMed.2009,234:11171127l可引起呼吸道、肠道感染,也可能引起神经症状。可引起呼吸道、肠道感染,也可能引起神经症状。l非非SARS-CoV病病毒毒,通通过过呼呼吸吸道道飞飞沫沫传传播播,尚尚无无动动物物模模型型,多数感染较轻,为自限性,可加重慢阻肺等疾病。多数感染较轻,为自限性,可加重慢阻肺等疾病。l分分布布广广泛泛,主主要要发发生生在在冬冬季季和和早早春春,美美国国数数据据表表明明,占占成成人上呼吸道感染的人上呼吸道感染的1024%。l病毒分离可用人胚肾细胞
18、或器官培养。病毒分离可用人胚肾细胞或器官培养。冠状病毒冠状病毒感染特点感染特点感染特点感染特点呼吸道病毒标本采集、运输、保存呼吸道病毒标本采集、运输、保存流感样病例定义流感样病例定义是指发热(体温大于等于38),伴咳嗽或咽痛之一者。不明原因肺炎病例定义不明原因肺炎病例定义同时具备以下4条,不能明确诊断为其它疾病的肺炎病例:(1)发热(腋下体温38);(2)具有肺炎的影像学特征;(3)发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少;(4)经规范抗菌药物治疗3-5天,病情无明显改善或呈进行性加重。呼吸道症候群病例定义呼吸道症候群病例定义(一)急性感染表现(至少符合下列的一项):(一)急性感染
19、表现(至少符合下列的一项):发热(从发病开始有报告和记录)发热(从发病开始有报告和记录),WBC升高或降低,或升高或降低,或WBC分布异分布异常常,寒战寒战,体温降低(考虑年龄)体温降低(考虑年龄)(二)呼吸道临床表现(至少符合下列的一项):(二)呼吸道临床表现(至少符合下列的一项):咽部不适、咽干或咽痛咽部不适、咽干或咽痛,鼻塞、流涕鼻塞、流涕,鼻鼻/咽咽/喉明显充血、水肿喉明显充血、水肿,咳咳嗽(新发或咳嗽加重)嗽(新发或咳嗽加重),咳痰咳痰,气短气短,听诊呼吸音异常(湿啰音,干听诊呼吸音异常(湿啰音,干啰音,哮鸣音,浊音)啰音,哮鸣音,浊音),胸痛胸痛其中肺炎病例其中肺炎病例具有上述具有
20、上述(一一)和和(二二),并具备并具备-(三)肺炎症状:(三)肺炎症状:胸部胸部X线片提示肺部炎性改变线片提示肺部炎性改变注注:从肺炎病例采集的标本数比例不少于所承担发热呼吸道症候群总从肺炎病例采集的标本数比例不少于所承担发热呼吸道症候群总任务量的任务量的20%。针对各种标本的病毒与细菌检测项目的流程图如下针对各种标本的病毒与细菌检测项目的流程图如下:病病例例标标本本采采集集全血全血鼻鼻/咽拭子咽拭子尿液尿液鼻咽抽吸物鼻咽抽吸物支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液细菌培养和鉴定细菌培养和鉴定急性期急性期/恢复期血清恢复期血清可可疑疑病病毒毒抗抗体体检检测测(备备选选项项)、肺肺炎炎支支原体和肺炎衣
21、原体抗体检测(备选项)原体和肺炎衣原体抗体检测(备选项)病病毒毒核核酸酸检检测测(阳阳性性者者部部分分继继续续进进行行病病毒毒分分离离)、肺肺炎炎支支原原体体和和肺肺炎炎衣衣原原体体DNADNA检测检测嗜肺军团菌、肺炎链球菌快速抗原检测嗜肺军团菌、肺炎链球菌快速抗原检测痰液痰液肺肺炎炎支支原原体体及及肺肺炎炎衣衣原原体体DNADNA检检测测;细细菌菌培培养养和和鉴鉴定定(鼻鼻咽咽抽抽吸吸物物和和支支气气管管肺肺泡泡灌灌洗洗液液阴阴性性者者进进行行细细菌菌DNADNA检检测测);病病毒毒核核酸酸检检测测(阳阳性性者者部部分分继继续续进进行行病毒分离)病毒分离)胸腔穿刺液胸腔穿刺液相关法律法规相关
22、法律法规依据中华人民共和国传染病防治法开展标本的采集和检测。标本的采集和检测应严格遵守病原微生物实验室生物安全管理条例(国务院424号令2004年11月12日起实施),并严格做好个人防护标本的保存与运输严格遵守可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定(卫生部45号令2006年2月1日起施行)具体依据人间传染的病原微生物名录(卫科教发200615号2006年1月11日发布)病原微生物标本的采集条件病原微生物标本的采集条件具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全
23、防护水平相适应的设备,包括个人防护用品防护水平相适应的设备,包括个人防护用品防护水平相适应的设备,包括个人防护用品防护水平相适应的设备,包括个人防护用品(隔离衣、帽、口罩、鞋套、手套、防护眼镜(隔离衣、帽、口罩、鞋套、手套、防护眼镜(隔离衣、帽、口罩、鞋套、手套、防护眼镜(隔离衣、帽、口罩、鞋套、手套、防护眼镜等)、防护材料、器材和防护设施等等)、防护材料、器材和防护设施等等)、防护材料、器材和防护设施等等)、防护材料、器材和防护设施等具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员
24、具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段段段段 采集过程中应对标本的来源、采集过程和方法采集过程中应对标本的来源、采集过程和方法采集过程中应对标本的来源、采集过程和方法采集过程中应对标本的来源、采集过程和方法等作详细记录。等作详细记录。等作详细记录。等作详细记录。病原微生物标本采集原则病原微生物标本采集原则早、快、近
25、(病变部位)、多、净早、快、近(病变部位)、多、净应根据病例的临床表现采集不同时期、应根据病例的临床表现采集不同时期、不同种类的标本不同种类的标本 死亡病例最好采集尸检标本,并尽可能死亡病例最好采集尸检标本,并尽可能地收集医院已检的临床标本地收集医院已检的临床标本 没有条件进行尸体解剖的,可根据检测没有条件进行尸体解剖的,可根据检测目的采集呼吸道灌洗液、肛拭子或经皮目的采集呼吸道灌洗液、肛拭子或经皮穿刺采集胸水、腹水、肺组织标本等穿刺采集胸水、腹水、肺组织标本等病原微生物标本的种类病原微生物标本的种类 呼吸道样品:呼吸道样品:呼吸道样品:呼吸道样品:上呼吸道样品:咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻洗
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