专题3：动物细胞培养课件.ppt

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1、专题3：动物细胞工程动物细胞培养植物细胞工程植物细胞工程植物细胞工程技术植物细胞工程技术植物细胞工程应用植物细胞工程应用植植物物组组织织培培养养植植物物体体细细胞胞杂杂交交植植植植物物物物繁繁繁繁殖殖殖殖的的的的新新新新途途途途径径径径作作作作物物物物新新新新品品品品种种种种的的的的培培培培育育育育细细细细胞胞胞胞产产产产物物物物的的的的工工工工厂厂厂厂化化化化生生生生产产产产最基础的是最基础的是 动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞工程常用的技术：动物细胞工程常用的技术：l动物细胞培养动物细胞培养l动物细胞核移植动物细胞核移植l动物细胞融合动物细胞融合l生产单克隆抗体等生产单克隆抗体等一

2、、动物细胞培养一、动物细胞培养1、概念：、概念：从动物机体中取出从动物机体中取出相关组织相关组织，将它，将它们分散成们分散成单个细胞单个细胞，然后放在适宜的培养基，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞中，让这些细胞生长生长和和增殖增殖。2、原理：、原理：细胞增殖细胞增殖如何进行动物细胞培养如何进行动物细胞培养?动动物物细细胞胞培培养养过过程程定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。胰蛋白酶处理取出组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎单个细胞细胞悬液转入培养瓶内培养（贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。原代培养3、过程原代培养增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养去掉组织间蛋白加培

3、养液 动物细胞生长特性动物细胞生长特性:(1)(1)细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁 上，称为细胞贴壁。上，称为细胞贴壁。要求：要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。易于贴附。(2)(2)细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触表面相互接触时，时，细胞就会细胞就会停止分裂增殖停止分裂增殖，这种现象称为细胞，这种现象称为细胞 的接触抑制。的接触抑制。细胞贴壁过程细胞贴壁过程 定义：定义：当原代培养的细胞处于当原代培养的细胞处于接触抑制后接触抑制后,用用胰蛋

4、白酶胰蛋白酶处理处理,使细胞从瓶壁上使细胞从瓶壁上脱离脱离下下来来,然后加入新的培养液然后加入新的培养液,将将细胞分离稀释细胞分离稀释,并并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这这个过程称个过程称传代培养传代培养.（分瓶培养的过程分瓶培养的过程）传代培养遗传物质未改变 原代细胞1050代细胞(细胞株)遗传物质己改变无限传代（细胞系）分瓶传代培养胰蛋白酶原代培养细胞贴壁接触抑制传代培养1、如何界定原代培养和传代培养？、如何界定原代培养和传代培养？2、如何界定细胞株和细胞系？、如何界定细胞株和细胞系？细胞株细胞株细胞系细胞系2023/5/293 3、过程：、过程：动物动物

5、胚胎胚胎或或幼龄幼龄的组织、器官的组织、器官单个细胞单个细胞细胞悬浮液细胞悬浮液一般一般1010代细胞代细胞少数少数40-5040-50代细胞代细胞细细 胞胞 系（不死细胞）系（不死细胞）（剪碎（剪碎 +胰蛋白酶胰蛋白酶）（+细胞培养液细胞培养液）（在（在CO2CO2培养箱，培养箱，贴壁培养贴壁培养）（分瓶再培养）（分瓶再培养）（细胞（细胞遗传物质发生改变遗传物质发生改变）蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂;能能注意注意时间时间的控制的控制不能，因为两者的不能，因为两者的最适最适PHPH不同不同，而正常组织，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PHPH较接近。较接近。1

6、.1.细胞膜的主要成分是什么？胰蛋白酶能将细胞膜的主要成分是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？细胞消化掉吗？2.2.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？4.4.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件:1 1）无菌无毒）无菌无毒 的环境：的环境：适宜的温度：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适人和哺乳动物细胞最适温度为温度为36.50.5。适宜的酸碱度：适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4 葡萄糖葡萄糖、无机盐、有机物（、无

7、机盐、有机物（氨基酸、氨基酸、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶等）激维生素、核酸、嘌呤、嘧啶等）激素（素（胰岛素胰岛素）、生长因子、）、生长因子、动物血动物血清清等。等。4 4）气体环境：）气体环境：2 2）营养：）营养：3 3）温度和）温度和pHpH：“95空气空气+5CO2”的混合气体培养的混合气体培养箱。箱。氧氧气是细胞代谢必须的；气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的维持培养液的PH。（添加一定量的（添加一定量的抗生素抗生素，定期更换培，定期更换培养液）养液）生物制品的生产生物制品的生产 用于基因工程用于基因工程 用于检测有毒物质用于检测有毒物质 细胞的生理、病理、药理研究细胞的生理、病理、药

8、理研究 5、动物细胞培养技术的应用、动物细胞培养技术的应用2023/5/29二、动物细胞工程二、动物细胞工程（一）动物细胞培养（一）动物细胞培养1 1、实质：从动物体中取出组织，、实质：从动物体中取出组织，分散分散成单个细胞后在适宜的培成单个细胞后在适宜的培养基中养基中生长和增殖生长和增殖。2 2、过程：、过程：3 3、原理：、原理：细胞增殖细胞增殖。4 4、动物细胞生长特点：、动物细胞生长特点：（1 1）贴壁生长。贴壁生长。（2 2）接触抑制接触抑制。5 5、培养条件：、培养条件：（1 1）培养基：水、）培养基：水、无机盐、无机盐、葡萄糖葡萄糖、氨基酸等、氨基酸等、动物血清动物血清。（加入少量的（加入少量的抗生素抗生素，胰岛素），胰岛素）（2 2）无菌无菌，无毒。，无毒。（3 3）适宜的温度、）适宜的温度、PHPH，5%5%CO2CO2培养箱。培养箱。单个细胞单个细胞动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液1010代细胞代细胞40-5040-50代细胞代细胞细细 胞胞 系系（剪碎（剪碎 +胰蛋白酶胰蛋白酶）（+细胞培养液细胞培养液）（在（在CO2CO2培养箱培养箱，贴壁贴壁培养培养）（分瓶再培养）（分瓶再培养）（细胞（细胞遗传物质遗传物质发生改变发生改变）