elisa原理及应用课件.ppt
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1、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)1内容内容一.Elisa的发展二.ELISA的定义三.ELISA的原理四.ELISA的基本方法五.ELISA的应用六.ELISA类别七.ELISA的特点八.ELISA实验中使用的仪器2一一.Elisa的发展的发展二二.ELISA的定义的定义 是一类常用的免疫酶技术,将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,用酶标记抗原或抗体,使抗原抗体反应在固相表面进行,检测液体中未知抗体或抗原的方法。4三三.ELISA的原理的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体
2、表面的抗原或抗体仍保持其免疫活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。5在ELISA方法中有三个必要的试剂:固相的抗原或抗体,即“免疫吸附剂”(immunosorbent)酶标记的抗原或抗体,称为“结合物”(co
3、njugate)酶反应的底物(显色剂)6酶 底底 物物显色反色反应 测定波定波长 辣根辣根过氧化物氧化物酶 邻邻苯二胺苯二胺四甲替四甲替联联苯胺苯胺氨基水氨基水杨杨酸酸邻联邻联苯甲胺苯甲胺2,2-连连胺基胺基-2(3-乙基乙基-并并噻唑噻唑啉磺酸啉磺酸-6)铵盐铵盐 橘橘红色色黄色黄色棕色棕色兰色色蓝绿色色492460449425642碱性磷酸碱性磷酸酯酶 4-硝基酚磷酸硝基酚磷酸盐盐(PNP)萘萘酚酚-AS-Mx磷酸磷酸盐盐+重氮重氮盐盐 黄色黄色红色色 400500 葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖+甲硫酚甲硫酚嗪嗪+噻唑兰噻唑兰 黄色黄色深深蓝色色 40
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