《逆转录病毒》课件.ppt

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1、BBMC20世纪80年代，一种新的传染病的阴影开始在出现，很快波及全球。BBMCn 初期的开始症状像伤风、流感、全身疲劳无力、食欲减退、发热、体重减少。n 后期机会性感染和恶性肿瘤频发。n 12月1日作为该病的全球防治日。BBMCBBMCBBMCn RNA肿瘤病毒亚科(HTLV)n 慢病毒亚科（HIV）n 泡沫病毒亚科是一大组含有反转录酶的RNA病毒BBMC定义:一大类含有逆转录酶的RNA病毒。三个独有特性：n 逆转录:逆转录酶(reverse transcriptase)使病毒RNA合成DNA；n 细胞转化:病毒可激活前癌基因(proto-oncogenes)成为癌基因(oncogenes)

2、，使细胞恶变；n 细胞破坏:某些逆转录病毒具有细胞毒性，如HIV可破坏T淋巴细胞。逆转录病毒BBMC共同特点：n 病毒为球形80-120nmn 有两条相同+ssRNAn 含有依赖RNA的DNA多聚酶n 病毒复制通过DNA中间体n 病毒核酸能整合于宿主染色体上BBMC病 例 田XX，中年男性，1989年，因“肺炎”入院治疗，经对症处理好转出院。一个月后，又因“感冒引起肺炎”而入院。查体：体温3839间，已持续1周，无明显诱因，乏力，伴有腹泻，后转入传染科治疗。转科不久，全身淋巴结肿大，背部出现皮肤卡波济肉瘤，视力下降，后左眼失明，体重减轻。实验室检查：CD4+细胞（400ul），CD4CD8为0

3、.5（正常范围为1.21.8）。6个月后患者死亡。病史记载患者生前于1984年被派往非洲工作，有不 良性行为史，无输血或静脉吸毒史。BBMCn HIV是获得性免疫缺陷综合症（acquired immunodeficiency syndrome,AIDS 艾滋病)的病原体，艾滋病具有高度致死性与惊人的蔓延速度！可以称之为“超级癌症”，“世纪杀手”BBMC世界艾滋病发展史BBMCn 从去年秋天起，我们就开始接诊发热伴有体重减轻的患者。到这个春天，他们都患上了一种在正常人群中非常罕见的肺炎。他们都是男性同性恋者。我打电话给一位同事，我们一起给的发病率与病死率每周报告（）写了一篇文章。这篇文章发表以后

4、，我们的电话就响个不停。全国各地的医师都打电话来说，他们有同样的病例。”年月5日BBMC世界第一例：n 1981年6月5日美国乔治亚州亚特兰大市，由美国联邦政府卫生统计机构疾病控制中心出版的患病率和死亡率周报，第一次报道了一种“可能是细胞免疫功能紊乱”的疾病。报道列举了几个月后被称为艾滋病的最初五个病例：“在1980年10月至1981年5月间，5个同性恋年轻男子在加利福尼亚州洛杉矶市三所医院里接受经活体检验被确定为卡氏肺囊虫肺炎的治疗。2名病人死亡。对5名病人的观察表明，他们似乎细胞免疫功能缺损，一般的接触便可使他们受到感染，例如肺囊虫肺炎和念珠菌等。”BBMCn 年一名刚果籍男子死于一种不明

5、原因的疾病。多年之后，对该男性的血液标本分析使其成为第一例确证的感染者。n 年美国加利福利亚州和纽约的医师报告，卡氏肺孢子虫肺炎（）和一种罕见的肿瘤卡波济肉瘤（）在男性同性恋人群中暴发。美国疾病控制与预防中心（）报道了相关消息。这是医务界对广泛关注的开始。该综合征当时被命名为男性同性恋相关性免疫缺陷症（）。BBMC卡波氏肉瘤简介:是一种恶性肿瘤，特征是：多种梭形细胞形成血管窦，见核分裂，可以看到玻璃小体，艾滋病病人常并发此病。BBMCn 年这种综合征被发现与血液相关。不止在男性同性恋人群中，在女性、男性异性恋、吸毒者、血友病患者、接受输血者和婴儿，也发现了这种综合征的病例。这种综合征被重新命名

6、为免疫系统缺陷综合征（）。美国疾病控制与预防中心将其定义为一种流行病。另外个国家报告发现了病例。n 年法国巴斯德研究所的研究人员在医师的领导下分离出了一种逆转录病毒，他们称它为淋巴腺病相关性病毒（）。后来，这种病毒被认为是的致病因子。发现病例的国家已达个。BBMCn 年美国政府宣布，美国国立癌症研究所的医师分离出了一种引起的、被称为的病毒。（年之后，和被认定为同一种病毒。一个国际委员会将其命名为人类免疫缺陷病毒，）。美国卫生和人类服务部预计疫苗将在年内进行人体试验。被美国研究人员称为“号患者”的 死去。这名加拿大籍空中服务生曾与数十名在美国最早被确定患有的男性同性恋者发生过性行为。n 年美国食

7、品与药物管理局批准了由的实验室研发并由美国卫生部申请专利的诊断试剂盒。法国巴斯德研究学院就试剂盒专利权问题对美国卫生部提起诉讼。最终，法美两家机构同意分享试剂盒的专利使用费。男影星 成了第一个死于的公众人物。，一名岁的患的美国血友病患者被拒绝在他所在的公立学校继续读书。BBMCn 年 世界卫生组织（）颁布了全球战略。n 年批准成为第一个抗药物。英国的戴安娜王妃在英格兰开设了一所专为患者服务的医院。她与患者握手的照片改变了以往人们对患者和感染者的态度。美国总统里根，在其任职年后，首次在公众场合提到这一名词。美国开始了第一个教育项目。n 年 总干事长宣布每年月日为世界艾滋病日。BBMCn 世界艾滋

8、病日的历史：1988年，世界卫生组织规定，每年的12月1日为世界艾滋病日，1996年以后更名为世界艾滋病宣传运动。每年12月1日前后，全世界各地围绕艾滋病的预防与控制和统一的宣传主题，开展形式多样的宣传活动。BBMCBBMCOver 16000 new HIV infections a dayn More than 95%are in developing countriesn 1600 are in children under 15 years of agen About 14000 are in persons aged 15 to 49 years,of whom:n over 40%

9、are womenn over 50%are 15-24 year oldsBBMC p自首例艾滋病患者以来，HIV在全球的传播速度惊人。根据联合国艾滋病规划署和世界卫生组织2008年11月21日共同发布的艾滋病病毒感染者总数已达3950万。p2010联合国艾滋病规划署于11月23日在日内瓦发布了2010年全球艾滋病疫情报告。该报告指出，艾滋病扩散的势头已经得到遏制并开始扭转，2009年的HIV感染总人数为3330万。BBMCBBMCBBMC2008年全球新增HIV感染者430万，HIV感染者总数达3950万。BBMC2008 年根据最新评估结果，中国现有HIV 感染者约70 万，其中艾滋病病

10、人约7.5 万。BBMCBBMC艾滋病的影响BBMC（一）对经济发展的影响1、国家为防治艾滋病拨巨款 据估计，我国一个艾滋病病人的医疗费用和间接损失大约6.4万-8.6万，是人均国民生产总值的倍。据专家估计，世界每年将为艾滋病付出5000亿美元的代价，这使发达国家损失生产总值为1%，发展中国家损失生产总值3%。2、严重影响国民经济发展 18-45岁年龄的人是易感艾滋病的高发人群，这些人社会最强壮的劳动力，随着艾滋病病毒感染者发病数及艾滋病病人的死亡数急剧增加，讲导致劳动力大量丧失，直接影响经济发展。3、给家庭、社会增加负担 据专家估计，一个艾滋病病人的医疗费用相当于我国家庭年收入的1.1倍，对

11、家庭和个人来说都无法承受。另外，青壮年大多数承担抚养孩子和赡养老人的义务，一旦早逝，严重影响家庭和下一代的生活。且艾滋病病毒潜伏期长，可能给艾滋病感染者和病人周围的人带来恐惧，使人们无法安心工作。BBMC（二）对社会稳定的影响 1、因病致贫 艾滋病人不仅失去了生活来源，还要担负治疗费用，加重了负担，导致很多艾滋病病人及其家庭因病致贫。他们为了治病可能卖血卖身，反复使用治疗仪器，进一步导致艾滋病的传播。因为艾滋病病毒感染而贫困的现象，加大了部分地区的贫富差距，严重影响当地的社会稳定。2、加深艾滋病感染者对社会的仇视 艾滋病的流行会给人们造成一定的恐惧，加剧了人们对艾滋病病人和感染者的偏见和歧视，

12、人们更加排斥感染者和患者，是的艾滋病病人和感染者缠身对社会的仇视，从而采取报复的手段，危害社会的安定。同时，由于人们 歧视，一些感染者不敢公开自己的身份，原来家人和朋友，转入地下，成为隐性的传染源。3、损害国家的声誉 在全球一体化的大形势下，艾滋病防治工作如果开展不好，会影响国家在国际上的声誉。如1992年泰国发生的政治动乱、法国内阁政府危机等。BBMC（三）对国家进步的影响1、劳动力的缺乏 感染艾滋病的多数是青壮年，他们是一个国家的主要劳动力，他们过早死亡，使得国家损失了一批创造财富的人。这样会导致国家在将来的某些年份主要劳动力不足，在小国甚至会发生无青壮年可用，严重阻碍社会的进步。2、社会

13、负担加重 艾滋病给个人、家庭和社会的影响颇为巨大。在心理上由于人们对艾滋病的其实和恐惧，是一些人丧失了对生活的勇气。在生活上，其感染者和家属一般都会失去工作，并且要担负昂贵的医疗费用，造成生活困难。如果父母死亡，留下受感染的艾滋病孤儿和老人，必然会加重社会的负担。3、对教育的影响在性教育方面：艾滋病的流行使得各国政府加强对国民的性教育，但由于人们的思想惯性尤其是生物本能，使得性教育面临困难，会造成教育资源的浪费。BBMC入学率方面：艾滋病的肆虐，儿童成为最无辜的牺牲品。有的儿童因此退学，加之艾滋病导致一些地区出生率下降，使入学率下降。知识就是力量，入学率的减少会影响一个国家的发展。4、法律法规

14、的修改 随着艾滋病的流行，各国都制定了与其相关的法律法规，这在某种程度上是个进步，可以保证控制艾滋病有关措施的执行，但是它又带来了新的社会问题，使立法变得更加复杂，在保护艾滋病病人和保护公众权益之间发生了矛盾。世界卫生组织曾说过，其影响程度大大超过了艾滋病本身，他会深刻影响到公共卫生法律的应用和作用。BBMC（四）对军队的影响1、影响兵源 艾滋病病毒感染者一旦进入部队，会引起一系列的心理和思想不良影响。2、影响血源 特别是战时血源，前线部队的血源大多来自部队内部成员，在士兵中若被传染，会通过数学传染艾滋病。3、造成重大经济损失 在现代化军队，由于武器装备精良而复杂，培训费用昂贵，发现艾滋病病毒

15、感染者势必提前退伍，这对部队是一大损失，同时治疗费用昂贵。BBMC2011政治宣言n 承诺各国加大行动力度，于2015年制止并开始扭转艾滋病病毒的蔓延趋势。n 宣言呼吁各国联合起来，力争到2015年普及对艾滋病的预防、治疗和关爱服务，阻止并扭转艾滋病病毒的蔓延，缓解其造成的影响。n 宣言为抗击艾滋病制定了具体的目标，包括争取到2015年将艾滋病病毒的性传播率减少50，在使用注射药物人群中的传播率减少50，消除母婴传播，大幅减少因艾滋病而死亡的孕产妇人数，并让1500万名艾滋病病毒感染者接受抗逆转录病毒治疗等。n 宣言特别承诺消除性别不平等和基于性别的虐待和暴力，增强女性保护自己不受艾滋病感染的

16、能力，并呼吁各国建立相关法律及政策框架，消除与艾滋病病毒有关的轻蔑、歧视和暴力。BBMCn 传染源：HIV的感染者和AIDS患者n 传播途径：性行为 血行传播：带HIV的血制品、器官移植、人工受精、污染注射器 母婴垂直传播BBMCBBMCBBMCBBMCp 吸毒、性传播和采供血途径传播并存p 经性传播途径呈上升趋势 p 自高危人群向普通人群扩散 BBMCAIDS 流行的一般规律由高危人群开始一般人群同性恋IDU妓女嫖客家庭妇女儿童BBMCn 易感者新生婴儿：感染妇女所生婴儿1/3为HIV携带者妇女：生理特点和社会地位青年人：HIV感染者一半以上的是1524岁BBMC感染过程BBMCn 感染过程

17、急性感染期HIV HIV 在 在T T细胞和单核 细胞和单核-巨噬细胞中大量增殖和扩散 巨噬细胞中大量增殖和扩散初次感染人体的几周内，初次感染人体的几周内，发热，咽炎，淋巴结肿大，发热，咽炎，淋巴结肿大，皮肤斑丘疹和粘膜溃疡 皮肤斑丘疹和粘膜溃疡病人有自限性症状 病人有自限性症状BBMC血清转换（窗口期）n 从艾滋病病毒感染到血清艾滋病病毒抗体转阳，这一段时间称为窗口期n 输血传播时抗体转阳时间较短，2-8周，性传播时稍长，2-3个月n 第三代试剂，3周后阳转,30d达90%n 95%的感染者在5.8个月之内发生阳转BBMC临床潜伏期：3-5年或更长，体内有HIV增殖，但不表现临床症状AIDS

18、相关综合征期：HIV病毒大量复制，免疫系统损伤，临床症状开始出现免疫缺损期：典型AIDS期，严重免疫缺陷，合并各种并发症及机会感染和恶性肿瘤n 感染过程BBMCHIV感染的三种转归n 典型病程(5-10年)70-80%n 快速进展病例(2-3年)10-15%n 长期无进展病例 小于5%HIV感染超过十年，在未经抗病毒治疗的前提下，CD4+细胞500mm3,病毒载量1000拷贝mlBBMCHIV相关口腔损害n 念珠菌病n 牙周，牙龈病变n AIDS牙龈炎n 毛状白斑n 单纯疱疹病毒，溃疡BBMCHIV相关的皮肤损害n 药物过敏（好发于HIV感染的中、早期）n 以下损害出现的几率和严重程度与AID

19、S病期正相关：n 脂溢性皮炎n 毛囊炎n 皮肤霉菌感染n 传染性软疣BBMCHIV相关的肺部感染n 可在任何CD4水平的情况下出现n CD4200/ml时,多为常见细菌感染n 如链球菌、嗜血流感杆菌等n CD4200/ml时，可能出现机会性感染n 如CMV、PCP、曲霉菌等n 结核：CD4较高时多表现为典型结核 低时则变的不典型BBMCHIV相关的胃肠道感染n 食道感染：多发于CD4200时n 念珠菌感染n CMV感染（溃疡）多发于CD450时n 胃部感染：多为CMVn 肠道感染：沙门氏菌、志贺杆菌、空肠弯曲菌、孢子虫、组织胞浆菌n CD450时，可出现鸟分支杆菌、CMVBBMC常见的机会性感

20、染n 病毒感染：巨细胞病毒；单纯疱疹病毒n 细菌感染：结核；鸟分枝杆菌；流感嗜血杆菌；链球菌；沙门氏菌n 真菌感染：念珠菌病；隐球菌病；曲霉菌病n 原虫感染：卡氏肺囊虫肺炎；弓形体病；隐孢子虫病BBMC卡氏肺囊虫肺炎（PCP）n 临床特点：发热、干咳、盗汗、进行性 呼吸急促、紫绀、听诊正常或细湿罗音n X-线：间质性肺炎改变，上中肺野明显n 血气：低氧血症n 确诊：染色或单克隆抗体间接免疫荧光n 实验检测原虫BBMCCMV感染n CMV视网膜炎：漂浮物感，视力模糊，视野丧失。眼底：非特异性视网膜炎n 多发性神经根炎：小腿登高不对称，无力，麻木，疼痛、进行性肌肉弛缓，下肢轻瘫，反射消失n CMV

21、脑炎：发热，头痛，惊厥n 脑脊液：多核白细胞增多n 抗-CMV抗体阳性BBMC单纯疱疹病毒（HSV）感染n 口唇感染：疼痛性溃疡n 食管炎：疼痛、吞咽困难，影响进食n 脑炎：不常见。但一旦发生危及生命。生殖系感染：丘疹，疱疹，溃疡n 肛门直肠感染：严重的肛门直肠疼痛n 肛门四周溃疡、便秘BBMC隐球菌脑膜炎n 临床特点：发热、头痛、呕吐、精神或/和性格的改变；脑膜刺激征不明显n 脑脊液：蛋白，糖正常或轻度异常；淋巴细胞增多n 确诊：脑脊液墨汁染色查找新型隐球菌BBMC念珠菌感染n 口腔：鹅口疮、口角炎n 食管炎：溃疡、糜烂，吞咽痛、吞咽困难n 阴道炎：白色凝乳状分泌物，外阴瘙痒、烧灼样痛BBM

22、C弓形体感染n 弓形体脑炎：发热，头痛，意识模糊，惊厥癫痫发作，共济失调，颅神经麻痹n 视网膜脉络膜炎：难与CMV引起的鉴别 n 弓形体肺炎：与PCP难鉴别。n CT和MRI：多环状强化性损害n 抗-弓形体抗体阳性BBMC分支杆菌感染n 结核杆菌感染：肺部的原发灶，淋巴管炎及肺门淋巴结核。晚期病例不典型n 胸片表现为多发性或间质性变化n 鸟分支杆菌感染：n 胃肠道感染：腹泻、腹痛、消化不良厌食、体重下降和肝脾肿大n 肺部感染：胸片表现为局灶性，进一步发展可形成空洞。BBMC艾滋病病人与卡波氏肉瘤艾滋病病人与卡波氏肉瘤上上腭腭下下腭腭BBMC皮肤病变皮肤病变鹅口疮鹅口疮BBMCn“艾滋病恐惧症”

23、是一种与艾滋病有关的神经症。艾滋病恐惧症症状者往往具有过度执拗、要求过度精确及过分坚持的人格特性。他们常常错误地把心理恐惧所引起的一些自主神经症状，认定为艾滋病的症状，每次看医生后，在阴性检查结果和医生细致解释后，心理负担可得到暂时的解脱。但没过多久，新的疑虑会再次产生，使其不得不再次到医院要求检查。BBMC免疫性n 宿主对HIV免疫应答包括体液和细胞。n 体液免疫产生多种抗体，可降低急性期病毒抗原量，但不能清除病毒，检测抗体可用于诊断。n 细胞免疫，包括ADCC(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity)、CTL(cytotoxic T ce

24、ll)和NK细胞。CTL对HIV感染细胞的杀伤以及阻止病毒扩散起重要作用，但不能清除有HIV潜伏的感染细胞。n 宿主的免疫力不足是HIV一经感染就终身携带的原因。BBMC 与逃避宿主免疫系统的防御作用有关：HIV 直接损伤CD4T 细胞；病毒基因组与细胞染色体整合，细胞不表达或 仅表达少量病毒结构蛋白，形成“无抗原”状态；病毒包膜糖蛋白基因的高度变异性导致不断出 现新抗原；受感染的单核-巨噬细胞是病毒长期的储存细胞。HIV为什么能引起潜伏感染？BBMCBBMCBBMC 正常CD4+T细胞数1000个/uln在HIV感染个体，CD4+T细胞数每年以每微升60个的速度降低，大约感染后10年左右数目

25、降至 0；n感染后约 7 年CD4+T细胞数降至400200：全身系统症状，皮肤的感染，细菌感染最常见；n感染后约 8 年CD4+T细胞降至200以下：免疫系统衰竭，发生严重的机会感染，如卡氏肺囊虫肺炎，荚膜组织胞浆菌病和弓行体病；n感染后约10 年CD4+T细胞降至50或以下：免疫功能完全丧失。鸟型结核分支杆菌引起广泛性的感染，CMV感染也常见。BBMC HIV对CD4+T细胞损害的机制1）病毒感染对细胞的直接杀伤作用病毒包膜糖蛋白插入细胞膜或病毒的出芽释放，增加了细胞膜的通透性；HIV增殖时可产生大量未整合的病毒cDNA,干扰细胞的正常生物合成；导致CD4+T细胞融合，形成多核巨细胞，丧失

26、正常分裂能力，导致细胞溶解。BBMCHIV对CD4+T细胞损害的机制2)免疫病理所引起的细胞损伤：n受染细胞膜上表达病毒的包膜糖蛋白，可激活特异性CTL的识别，或特异性抗体介导的ADCC作用而破坏细胞；nHIV诱导自身免疫，激活大量CD4+T细胞，造成细胞免疫缺损。3)HIV感染诱导T细胞凋亡：n病毒激活T细胞凋亡基因，表达FAS受体。BBMC BBMC靶细胞被破坏的临床意义是什么?n T细胞死亡：HIV诱导血中T细胞以每年每微升60个的速率下降，而T辅助细胞在细胞免疫、激活和诱导巨噬细胞、嗜中性粒细胞、B淋巴细胞等中起重要作用，因此CD4+T细胞的破坏将导致免疫缺陷的发生。n 多核巨细胞形成

27、：HIV感染的重要生物学特征 HIV不需接触血液，可在细胞和细胞间扩散，逃避血液循环中抗体的中和。BBMC靶细胞被破坏的临床意义是什么？n B淋巴细胞：HIV并不感染B淋巴细胞，但可激活B细胞产生大量无功能的免疫球蛋白，不能清除病毒,可导致高球蛋白血症。n 单核细胞和巨噬细胞：临床意义有两方面：1）单核-巨噬细胞作为HIV复制增殖的“避难所”，逃避免疫系统的清除；2）单核-巨噬细胞可以通过BBB，因此HIV得以进入中枢神经系统引起脑部疾病。BBMCHIV分类(逆转录病毒科慢病毒属灵长类免疫缺陷病毒亚属）n HIV-1:全球流行；毒株各主要基因间的变异率小；实验室的临床研究主要以HIV-1为主。

28、n HIV-2:西非流行；与HIV-1间各基因的变异率可达 60%，而与SIV mac基因间变异率只有30%；毒力较弱，引起的病程较长，症状较轻。n SIV:猴免疫缺陷病毒，感染猕猴，引起与人艾滋病 相似的疾病。从进化上HIV-2与SIV的关系比与HIV-1的关系更近。在疫苗研究中，SIV感染模型对HIV-2参考价值大于对HIV-1。BBMCn 球形，直径100120nmBBMC 生物学特性 核酸：两条相同单正链RNA与核衣壳 蛋白(P7)结合，形成双体结构 衣壳：双层 内层为衣壳蛋白（P24)外层为内膜蛋白（P17)包 膜:脂质双层刺 突:gp120,gp41 形态与结构核衣壳BBMC脂双层

29、膜脂双层膜gp120gp120gp41gp41包膜糖蛋白包膜糖蛋白p24p24衣壳蛋白衣壳蛋白p17p17内膜蛋白内膜蛋白p7p7核衣壳蛋白核衣壳蛋白逆转录酶逆转录酶蛋白酶蛋白酶整合酶整合酶BBMC生物学特性n由2条相同正链RNA在5端通过氢键连接成二聚体 n基因组全长约9700碱基；n结构基因:gag、pol、envn调节基因:tat、rev、nef、vif、vpr、vpu/vpxn两端的长末端重复序列(LTRs)，含有启动子、增强子、TATA序列等多个特定调控区，对病毒基因组转录的调控起关键作用。基因组BBMCHIVGenomeBBMC 结构基因n gag 编码主要结构蛋白：核衣壳蛋白（p

30、7)、衣 壳蛋白(p24)、内膜蛋白(p17)，具有抗原性。n pol 编码蛋白水解酶、整合酶和逆转录酶。n env 编码包膜刺突：糖蛋白gp120和gp41。gp120有中和抗体和CD4分子结合位点(高变区V1-V5)，gp41介导病毒包膜与宿主细胞膜融合。BBMC 调节基因n tat 编码反式激活转录因子。n rev 调节mRNA的剪接和促进mRNA转运至细胞质。n nef 提高HIV的复制能力和感染性。最近实验表明感染nef 缺陷HIV-1的机体没有患艾滋病，也无T细胞的破坏，提示nef 可作为疫苗的靶点。BBMCHIV基因组的变异性n HIV基因组的易变性是发展HIV疫苗的障碍：env

31、 基因：编码gp120糖蛋白区域为高变区；可将 HIV-1分为AF、H、O 8个亚型。pol 基因：编码逆转录酶的区域突变率高。nef 基因：nef 缺失个体不发病，可作为疫苗的靶点。n HIV基因组的易变性使病毒逃脱宿主免疫系统以及疫苗诱生的抗体。BBMCHIV的复制 吸附、穿入细胞:刺突(gp120)细胞受体(CD4)和共受 体(CXCR4、CCR5)，膜融合(gp41);脱壳:胞浆内,释放RNA;逆转录:胞浆内,逆转录酶,RNA酶H;RNA()cDNA(-)RNA:DNA杂交体dsDNA细胞核 整合至宿主细胞染色体:细胞核内,整合酶,形成前病毒；前病毒活化:LTR(启动子,增强子),RN

32、A多聚酶;DNARNA非结构蛋白结构蛋白拼接成mRNA加帽加尾成子代RNA核衣壳出芽释放BBMCssRNAssRNA provirusdsDNA RNA:DNABBMCHIV吸附靶细胞受体分子模式图CCR5：单核-巨噬细胞（早期）CXCR4：T淋巴细胞（晚期）辅助受体BBMC脱壳潜伏感染装配与释放BBMC 在HIV的复制过程中，逆转录酶、整合酶和蛋白水解酶起关键性作用，可作为筛选抗HIV药物的重要靶位。BBMC生物学特性 n 培养特性:敏感细胞为带CD4受体的细胞;敏感动物为恒河猴,黑猩猩,但感染过程和症状与人不同。n 抵抗力:较弱;对热(56、30min可灭活）、脂溶剂、氧化剂敏感（0.2%

33、次氯酸钠、0.3%H2O2和50%乙醇处理5min可灭活),但在室温(2022)活性可保存7天。对紫外线、X 射线和r射线不敏感BBMCn 抵抗力弱，5630min灭活，室温可保存7天n WHO建议：0.5%次氯酸钠0.1%漂白粉5%福尔马林 10-30min70%乙醇2戊二醛煮沸 20min高压灭菌 20minBBMC实验室检查n 血常规：WBC减少、RBC、HB减少n 免疫学：CD4计数下降、CD4/CD8倒置n 病原学：抗-HIV、P24、病毒载量BBMC实验室检查n 在血清阳转前可以存在HIV抗原血症和病毒血症。出现高滴度的P24抗原血症（持续2-4周），1200-4200pg/ml；

34、在外周血中也很容易分离到病毒n 窗口期时：HIV抗体阴性，诊断主要依靠P24抗原（特异性100%，敏感性80%，）或病毒载量（特异性90%，敏感性100%）BBMC病毒载量(Viralload)n 过去用CD4数确定HIV感染的严重性，机会感染的机率，对抗病毒治疗的反应。n 病毒载量:即用PCR检测血浆中HIV RNA含量表示，与机会感染的机率、AIDS预后和死亡的机率呈正相关。n 病毒载量已成为比CD4数更好的指标，用于预测AIDS发展和对治疗的反应。BBMC病毒载量与5年内进入AIDS阶段的关系血浆HIV病毒载量 5年内发展为AIDS的百分比Copies/ml36270 62BBMCBBM

35、C实验室诊断处理原则n 所有HIV检测应该在受检者知情同意下进行n 可疑病例首先行初筛实验n 初筛实验室HIV抗体阳性标本应尽快送确认实验室确认，确认之前不得通知受检者n 经确认的阳性结果原则上只通知受检者本人或亲属，不得泄露n 提供HIV检测前后咨询，提供预防HIV传播的信息n 为检测结果阳性者提供必要的支持和帮助BBMCn 直接检测病毒或其组成部分(P24或核酸）n 检测人体HIV免疫反应HIV特异性抗体 从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为1-3个月，有一小部分HIV感染者出现延迟反应BBMCP24抗原测定适用范围：n n HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断n n HIV-1阳性

36、母亲所生婴儿的鉴别诊断n n 第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的诊断n n 监测病程进展和抗病毒治疗效果BBMCP24抗原测定结果报告和解释n HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认n HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊n HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染BBMCHIV核酸检测n n 窗口期辅助诊断n n 病程监控n n 指导治疗方案及疗效评价n n 预测疾病进程BBMCHIV核酸检测定性检测n 用于HIV感染的辅助诊断。通常使用PCR或RT-PCR技术，

37、使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量涵盖所有的或常见的毒株，也可使用复合引物。n 通常根据扩增产物的电泳图像判定结果，阳性结果还要进行核酸序列测定来确定。n HIV核酸检测阴性,只可报告本次实验结果阴性，不可排除HIV感染。n HIV核酸检测阳性,可作为诊断HIV感染的辅助指标，不单独用于HIV感染的诊断。n 报告核酸定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。BBMCHIV核酸检测定量检测n 常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。目前常用的方法有逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）等，

38、这几种进口试剂盒的最低检测限为20-50拷贝/毫升n 按照仪器读数报告结果，应注明使用的试验方法、样品种类和样品量n 测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。注意低于最低检测限的结果不能排除HIV感染。n 应附上仪器打印的数据BBMCHIV核酸检测样品的采集和处理n 用于HIV核酸检测的样品有全血、血浆、组织和其他分泌物，有时还包括生物制品n 采集样品应避免微生物和核酸污染。避免RNA酶造成的降解，采样后4-8小时内处理。处理后的样品应分装、标记，冻存于-20以下，RNA类样品冻存于-80n 应在2-8条件下运送。特殊情况下，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛样品的试管包扎好，保证不会

39、破碎和溢漏BBMCHIV核酸检测定量检测方法的选择n 目前用于统一不同定量方法检测值的标准品尚未问世n 不同定量方法结果之间还无法直接进行比较n 建议同一患者治疗前后用同一方法进行HIV定量检测BBMC病毒分离培养n 可用于HIV-1感染的辅助诊断及HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断n 培养及分离HIV需要在特定的P3实验室进行，且HIV的分离率在30%-60%，这项试验仅用于HIV株的保存和科学研究 BBMCHIV抗体诊断目前临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体，包括初筛和确认实验。BBMCn 抗体检测：筛选试验：ELISA IFA RIA 确证试验：免疫印迹试验（weste

40、rn blot)BBMCBBMC免疫印迹试验的原理BBMC HIV抗体诊断检测试剂 l 筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。l 目前常用的筛查试剂有酶联免疫(ELISA)、颗粒凝集和其他快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用酶联免疫试剂。l 自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。BBMCHIV抗体诊断ELISA方法n 目前最常用的初筛实验n 1985年第一代检测HIV-1抗体的试剂盒问市（全病毒抗原间接法）n 目前采用

41、第四代检测HIV-1抗体的试剂盒（以重组的多肽抗原和抗P24抗体包被的双抗原夹心法）n 窗口期缩短了2-3周BBMCHIV抗体诊断四代试剂比较solidphasespecificdetection ofconjugate第一代病毒裂解液HIV-1IgG 抗体HIV-1-IgG抗体第二代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2IgG 抗体HIV-1/-2 IgG抗体第三代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-OIgM/IgG 抗体HIV-1/-2/-O病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-O第四代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24 AbIgM/IgG 抗体

42、HIV-1/-2/-Op24 抗原病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24 抗体BBMCHIV抗体诊断结果报告和处理n n 阴性反应出具HIV抗体阴性报告n n 如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，可以进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测，或23个月以后再做抗体检测n n 筛查实验呈阳性发现反应，可出具“HIV抗体待复查”的报告，不能出阳性报告BBMC样本 样本初筛检测 初筛检测一阴一阳 一阴一阳 均阳性反应 均阳性反应阴性报告 阴性报告 送确认 送确认重复检测 重复检测 阴性报告 阴性报告均阴性反应 均阴性反应

43、阳性反应 阳性反应原有试剂另一 原有试剂另一种原理初筛试剂 种原理初筛试剂选用初筛试剂 选用初筛试剂阴性反应 阴性反应HIV抗体初筛检测流程图BBMCHIV抗体诊断快速诊断试剂n 采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理n 快速、不需特殊仪器n 敏感度、特异度低于ELISA，且价格贵n 适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊手术前检查n 快速诊断阳性结果还需经ELISA方法验证BBMC阳性结果 阴性结果HIV抗体诊断快速诊断试剂阳性结果可出现患者带和质控带两条带，阴性结果只出现质控带一条带 阳性结果可出现患者带和质控带两条带，阴性结果只出现质控带一条带BBMC初筛检测阳性标本两种初筛试剂

44、阴性报告阴性报告阴性反应 一阴一阳 阳性反应免疫印迹法WB-1/2混合型复核报告HIV-2血清学阳性反应,必要时测核酸阴性反应 可疑反应HIV-2 阳性反应免疫印迹法WB-2 阴性报告出现gp36 阴性反应 可疑反应HIV-1 阳性报告HIV-1 阳性反应每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体确认实验流程图BBMCCD4+T细胞绝对数量有 有效 效治疗 治疗8 8周后 周后CD4 CD4+T T淋巴 淋巴细胞数量增加 细胞数量增加50/ul 50/ulHAART无效 无效CD4 CD4+T T细胞数量下降 细胞数量下降CD4+T淋巴细胞介导的免疫功能逐渐丧失CTL丧失必要的体内

45、环境，功能下降HIV HIV感染 感染CD4 CD4+T T淋巴细胞小于 淋巴细胞小于350/ul 350/ul（结合病毒载量，确定治疗时机）（结合病毒载量，确定治疗时机）BBMCHIV/AIDS的诊断n HIV感染者：高危行为 初筛实验：抗-HIV（+）确认实验：蛋白印记（+）n AIDS：上述条件+n 消耗综合征n 机会性感染、肿瘤n CD4计数200/ul、CD4/CD81 BBMC治疗原则（目前的治疗目标）n 病毒学目标：最大程度地减少病毒载量；将其维持在不可检测水平的时间越长越好n 免疫学目标：获得免疫功能重建和/或维持免疫功能n 最高目标：延长生命并提高生活质量BBMCBBMCn

46、预防目前唯一可取的方法十二月一日世界艾滋病日BBMCBBMC1.HIV感染的预防n加强宣传教育，普及预防知识。建立HIV监测系统，掌握AIDS流行动态。n对高危行为的教育：避免共用注射器，过滥和无保护的性行为等。n严格筛选血制品：ELISA初筛，WB确认去除污染制品。BBMC2.疫苗的研制与应用 为什么真正成功的疫苗仍是一个遥远的现实?n HIV变异：包膜糖蛋白（gp120 V3环）和逆转录酶易 变异，即使在同一个体都存在不同的准种（quasi-species）。需寻找保守区（CD4结合亚单位）疫苗。n HIV可从细胞-细胞间传播：多核巨细胞的形成使HIV 得以逃避循环抗体。故一个成功的疫苗也

47、应能激发 免疫应答的另一个环节 细胞免疫。n无理想动物模型：应具备容易获得、廉价，当感染 HIV时能够产生AIDS样疾病。BBMC3.抑制感染细胞中HIV复制 n核苷类逆转录酶抑制剂：ZDV(过去称AZT，叠氮胸苷）；双脱氧胸苷（ddC）、双脱氧肌苷（ddI），拉米夫定（3TC）n非核苷类逆转录酶抑制剂：德拉维拉丁(Delaviradine)和耐维拉平(Nevirapine)等，国内多用施多宁n蛋白水解酶抑制剂：佳息患、赛科纳瓦(sapuinavir)、瑞托纳瓦(ritonavir)、英迪纳瓦(indinavir)BBMC 核苷类逆转录酶抑制剂（AZT）作用原理图 齐多夫定或叠氮胸苷（zido

48、vudine，ZDV，原名AZT）是最早用于临床和目前最常用的药物。AZT竞争性抑制HIV逆转录酶，阻止其DNA链的延伸。BBMCHAART鸡尾酒疗法的发明“鸡尾酒疗法”：是目前公认的最有效抗HIV疗法，是由何大一教授首创，现称为“高效抗逆转录病毒疗法”，即三种药物联用，其中包括 2 种逆转录酶抑制剂和 1 种蛋白酶抑制剂。1995年，何大一在麻省理工学院毕业典礼上发表演说，克林顿为他热烈鼓掌。1995年，何大一在麻省理工学院毕业典礼上发表演说，克林顿为他热烈鼓掌。BBMCHAART鸡尾酒疗法（联合疗法）n 优点：能迅速降低病人血浆中HIV-RNA载量至极低水平，推迟HIV病情发展，并延长病人

49、的寿命。n 缺点：但无法清除整合在细胞染色体上的前病毒，因此仍不能从体内彻底清除HIV。BBMC耐药性问题药物的过敏及毒副作用治疗费用昂贵单纯抗病毒疗法不可能治愈艾滋病 鸡尾酒疗法的 不足之处 BBMC4.治疗机会感染n 这是目前最成功的领域。n 可对不同的病原给予适当的治疗，改善生活质量，延长生存时间。n 人类对于AIDS仍然是面临的问题远远大于得到的答案。BBMC“四免一关怀”政策对农村居民和城镇未参加基本医疗保险等医疗保障制度的经济困难人员中的艾滋病病人n 免费提供抗病毒治疗药物n 实施免费自愿咨询检测n 对艾滋病患者的孤儿实行免费上学n 对艾滋病综合防治示范区的孕妇实施免费艾滋病咨询、筛查和抗病毒药物治疗，减少母婴传播n 将生活困难的艾滋病患者纳入政府救助范围，按国家有关规定给予必要的生活救济，并积极扶持有生产能力的艾滋病患者参加生产活动BBMCn HIV 的形态结构n HIV传播途径n HIV复制过程n HIV免疫损伤机制n HIV临床分期及主要特点BBMC专业英语Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS艾滋病Human Immunodeficiency Virus,HIV人类免疫缺陷病毒