基因治疗GeneTherapy.ppt

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1、第第 11 11章章 基因治疗基因治疗Gene TherapyGene Therapy p498本章内容提示 基因治疗基因治疗(genetherapy)体细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗体细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗 基因转移方法基因转移方法 靶细胞特点、靶细胞种类靶细胞特点、靶细胞种类 反义寡核苷酸技术反义寡核苷酸技术 自杀基因与旁观者效应自杀基因与旁观者效应基因治疗（基因治疗（Genetherapy）基因治疗（基因治疗（Genetherapy）：指应用：指应用DNA重组技术，将重组技术，将外源正常基因外源正常基因导入导入靶细靶细胞胞，以，以纠正纠正或或补偿补偿因基因缺陷和异常引起因基因缺陷

2、和异常引起的疾病的疾病,以达到治疗的目的。以达到治疗的目的。为达到这一目的，实施相应的策略。为达到这一目的，实施相应的策略。为达到这一目的，实施相应的策略。为达到这一目的，实施相应的策略。一、基因治疗策略一、基因治疗策略策略：直接基因治疗和间接基因治疗策略：直接基因治疗和间接基因治疗1、直接基因治疗：、直接基因治疗：纠正纠正突变基因突变基因 在在原位原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。修复缺陷的基因，以达到治疗目的。为较为较理想理想的基因治疗策略，由于存在某些问的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现）题，目前正在努力之中。（未实现）2 2、间接疗法：、间接疗法：以正常的基

3、因以正常的基因替代替代致病基因致病基因。导入外源正常基因，导入外源正常基因，代替代替有缺陷的基因。而有缺陷的基因。而 对靶细胞而言，对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的基因没有去除或修复有缺陷的基因。用用DNADNA重组技术重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。目的。途途径径:就基因转移的就基因转移的受体细胞受体细胞不同，不同，基因治疗有两种途径：基因治疗有两种途径：1、生殖细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗2、体细胞基因治疗、体细胞基因治疗 1、生殖细胞基因治疗l l将正常基因转移到患

4、者生殖细胞（精细胞，将正常基因转移到患者生殖细胞（精细胞，卵细胞，早期胚胎）使其发育成正常个体。卵细胞，早期胚胎）使其发育成正常个体。为为理想理想的治疗方法，从的治疗方法，从根本根本上治疗遗传病，上治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中散播。使其有害基因不能在人群中散播。但还存在某些问题：但还存在某些问题：1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展；靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展；2）基因转移效率不高，只能用）基因转移效率不高，只能用显微注射显微注射方法；方法；3）只适用于排卵周期）只适用于排卵周期短而次数多短而次数多的动物，很难适的动物，很难适用于人类。用于人类。（但目前辅助生殖技术的发展较为

5、有效的解决了（但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个，多个，多者十几个。）者十几个。）2体细胞基因治疗somatic cell gene therapy 将正常基因转移到将正常基因转移到体细胞体细胞，使之表达基，使之表达基因产物，以达到治疗的目的。但有害基因能因产物，以达到治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。遗传给后代。措 施：（1 1 1 1）正常基因转移至体外培养的体细胞，有效）正常基因转移至体外培养的体细胞，有效）正常基因转移至体外培养的体细胞，有效）正常基因转移至体外培养的体细胞，有效 表达后，再回输到体内。表达

6、后，再回输到体内。表达后，再回输到体内。表达后，再回输到体内。（2 2 2 2）正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体）正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体）正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体）正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体 上，准确的替换异常基因，是上，准确的替换异常基因，是上，准确的替换异常基因，是上，准确的替换异常基因，是理想理想理想理想的措施。的措施。的措施。的措施。（3 3 3 3）随机整合，非特定座位，只要有效的表达）随机整合，非特定座位，只要有效的表达）随机整合，非特定座位，只要有效的表达）随机整合，非特定座位，只要有效的表达 即可达到治疗的目的。即可达到治疗的目的。即可达

7、到治疗的目的。即可达到治疗的目的。（4 4 4 4）体细胞基因治疗理论上不必矫正所有的体）体细胞基因治疗理论上不必矫正所有的体）体细胞基因治疗理论上不必矫正所有的体）体细胞基因治疗理论上不必矫正所有的体 细胞。细胞。细胞。细胞。存在的问题 l l对特定座位基因转移，目前还存在较大对特定座位基因转移，目前还存在较大困难；困难；l l随机插入可能引起后代的基因突变。随机插入可能引起后代的基因突变。二二、基因治疗的方法、基因治疗的方法基因治疗的关键性步骤基因治疗的关键性步骤-目的基因的目的基因的获得与转移获得与转移基因治疗首先获得目的基因通常从基因治疗首先获得目的基因通常从基因治疗首先获得目的基因通

8、常从基因治疗首先获得目的基因通常从基因组基因组基因组基因组中分离中分离中分离中分离 基因克隆基因克隆基因克隆基因克隆 定定定定 位位位位 表表表表 达达达达 评价表达情况评价表达情况评价表达情况评价表达情况一）目的基因的获得一）目的基因的获得 正常基因的分离与克隆正常基因的分离与克隆二）外源基因的转移l l通过不同方法，将目的基因转移至受体通过不同方法，将目的基因转移至受体细胞。细胞。1）物理方法（1 1）电穿孔法电穿孔法电穿孔法电穿孔法（electroporotionelectroporotion）将细胞置于高将细胞置于高将细胞置于高将细胞置于高压脉冲电场中，通过电压使细胞产生可逆性的穿压脉

9、冲电场中，通过电压使细胞产生可逆性的穿压脉冲电场中，通过电压使细胞产生可逆性的穿压脉冲电场中，通过电压使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中的孔。周围基质中的孔。周围基质中的孔。周围基质中的DNADNA可渗进细胞，进而表达。可渗进细胞，进而表达。可渗进细胞，进而表达。可渗进细胞，进而表达。瞬间瞬间瞬间瞬间细胞细胞细胞细胞细胞膜核膜通透性增加细胞膜核膜通透性增加细胞膜核膜通透性增加细胞膜核膜通透性增加高压脉冲高压脉冲高压脉冲高压脉冲 DNADNA渗入细胞渗入细胞渗入细胞渗入细胞（2 2）显微注射法）显微注射法（microinjection microinjection）利用显微操作把目的基因直接注入

10、靶细胞或细胞核利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或细胞核利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或细胞核利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或细胞核 例：转基因动物的制备重组基因重组基因重组基因重组基因DNADNA 微注射微注射微注射微注射（体外）（体外）（体外）（体外）小鼠受精卵小鼠受精卵小鼠受精卵小鼠受精卵回植回植回植回植假妊娠假妊娠假妊娠假妊娠 仔仔仔仔 鼠鼠鼠鼠动物模型：转基因鼠动物模型：转基因鼠动物模型：转基因鼠动物模型：转基因鼠(每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传每个鼠细胞中都含有外源基

11、因，按孟德尔方式遗传)clonesheepDollyclonesheepDolly体细胞体细胞体细胞体细胞 提取提取提取提取 核核核核重组细胞重组细胞重组细胞重组细胞回植回植回植回植DollyDolly卵细胞卵细胞卵细胞卵细胞 去核去核去核去核细胞细胞细胞细胞（3）微粒子轰击法l l利用亚微粒的利用亚微粒的钨钨和和金金能吸附能吸附DNA，并将其包，并将其包裹起来形成微粒，通过物理途径获得高速度，裹起来形成微粒，通过物理途径获得高速度，微粒瞬间既可进入靶细胞，达到转移目的基因微粒瞬间既可进入靶细胞，达到转移目的基因的目的，而不损伤靶细胞。的目的，而不损伤靶细胞。l l该方法可使目的基因在皮肤、肝

12、、胰、胃及该方法可使目的基因在皮肤、肝、胰、胃及乳腺等细胞中表达。乳腺等细胞中表达。2）化学法磷酸钙沉淀法：磷酸钙沉淀法：磷酸钙沉淀法：磷酸钙沉淀法：目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的DNADNADNADNA微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。体细胞基因组中，在适当

13、条件下得以表达。体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。磷酸钙磷酸钙+DNA 混合微细颗粒混合微细颗粒 沉淀反应沉淀反应2030min 细胞在沉淀物中暴露细胞在沉淀物中暴露 524h 方法方法简单简单，但转化，但转化效率低效率低。3 3）脂质体法（）脂质体法（liposomeliposome）l l应用人工制备的类似细胞膜的膜性结构应用人工制备的类似细胞膜的膜性结构脂质体，包装外源基因，再与靶细胞融合，脂质体，包装外源基因，再与靶细胞融合，外源外源DNA导入靶细胞，使其表达。导入靶细胞，使其表达。DNA 细胞融合细胞融合细胞融合细胞融合转化细胞转化细胞转化细胞转化细胞 PEGPEG 仙苔病毒仙苔

14、病毒仙苔病毒仙苔病毒DNA脂膜脂膜4 4）同源重组法）同源重组法 同源重组（同源重组（homologusrecombination）:外源基因和染色体上的外源基因和染色体上的基因在基因在同源序列同源序列间发生重组而插入染色体。间发生重组而插入染色体。是将外源基因是将外源基因定位定位导入细胞的染色体上。导入细胞的染色体上。单交换单交换 双交换双交换 通过同源重组定点插入珠蛋白基因Xba IBstXIXba IneoXbaIBstXIneo正常基因座位正常基因座位带有珠蛋白基带有珠蛋白基因的质粒因的质粒 C重重组组后，插入外源基因片段后，插入外源基因片段带带有有neo基因（新霉素抗性基因），基因（

15、新霉素抗性基因），重重组组后的后的细细胞在含有胞在含有neo 的培养基中生的培养基中生长长，没有插入新基因的，没有插入新基因的细细胞死亡，将有重胞死亡，将有重组组的的细细胞胞筛选筛选出来。出来。5 5）病毒介导基因内转移（）病毒介导基因内转移（Viral mediated Viral mediated transfertransfer）l l是通过病毒为载体（是通过病毒为载体（是通过病毒为载体（是通过病毒为载体（vectorvectorvectorvector），将外源基因通过），将外源基因通过），将外源基因通过），将外源基因通过重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞重组技术与病毒重组，然后去

16、感染受体细胞重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞感染细胞重组病毒 逆转录病毒逆转录病毒逆转录病毒逆转录病毒(RNA)(RNA)(RNA)(RNA)常用的病毒载体常用的病毒载体常用的病毒载体常用的病毒载体 DNA DNA DNA DNA病毒病毒病毒病毒 1)1)1)1)逆转录病毒（逆转录病毒（逆转录病毒（逆转录病毒（retrovirusretrovirusretrovirusretrovirus）目前应用最多、最成功目前应用最多、最成功目前应用最多、最成功目前应用最多、最成功.病毒感染细胞后，病毒感染细胞后，病毒感染细胞后，病毒感染细胞后，其基因组其基因组

17、其基因组其基因组RNA RNA RNA RNA 经逆转录产生双链经逆转录产生双链经逆转录产生双链经逆转录产生双链DNADNADNADNA拷贝，插入宿拷贝，插入宿拷贝，插入宿拷贝，插入宿主染色体形成前病毒（主染色体形成前病毒（主染色体形成前病毒（主染色体形成前病毒（provirusprovirusprovirusprovirus），前病毒转录），前病毒转录），前病毒转录），前病毒转录产生的正链既是病毒产生的正链既是病毒产生的正链既是病毒产生的正链既是病毒RNARNARNARNA，再与前病毒编码的外壳，再与前病毒编码的外壳，再与前病毒编码的外壳，再与前病毒编码的外壳蛋白包装成新的病毒颗粒。蛋白包装

18、成新的病毒颗粒。蛋白包装成新的病毒颗粒。蛋白包装成新的病毒颗粒。例如：小鼠白血病病毒（例如：小鼠白血病病毒（Mo-MLVMo-MLV）基因）基因组结构：组结构：LTR LTR LTR LTR gag pol env gag pol envU3 R U5 U3 R U5U3 R U5 U3 R U5 U3=U3=增强子，增强子，增强子，增强子，R=R=启动子，启动子，启动子，启动子，U5=U5=转录起始位点。转录起始位点。转录起始位点。转录起始位点。=病毒包装信号，病毒包装信号，病毒包装信号，病毒包装信号，gag=gag=核心抗原，核心抗原，核心抗原，核心抗原，pol=pol=逆转逆转逆转逆转录

19、酶，录酶，录酶，录酶，env=env=外壳蛋白。外壳蛋白。外壳蛋白。外壳蛋白。逆转录病毒载体优点：高效感染宿主细胞，转染率可达高效感染宿主细胞，转染率可达100%病毒基因和所载的外源基因都可能表达病毒基因和所载的外源基因都可能表达宿主范围广，可同时感染大量细胞并长期存留宿主范围广，可同时感染大量细胞并长期存留缺 点 病毒基因容量有限，一般只能插入病毒基因容量有限，一般只能插入病毒基因容量有限，一般只能插入病毒基因容量有限，一般只能插入7kb7kb左右片左右片左右片左右片段；段；段；段；病毒随机插入靶细胞基因组中，因病毒具有强病毒随机插入靶细胞基因组中，因病毒具有强病毒随机插入靶细胞基因组中，因

20、病毒具有强病毒随机插入靶细胞基因组中，因病毒具有强大的启动子和增强子，能使插入点附近的基因大的启动子和增强子，能使插入点附近的基因大的启动子和增强子，能使插入点附近的基因大的启动子和增强子，能使插入点附近的基因过度表达或失活，插入的过度表达或失活，插入的过度表达或失活，插入的过度表达或失活，插入的 外源基因可能不适当外源基因可能不适当外源基因可能不适当外源基因可能不适当的表达；的表达；的表达；的表达；逆转录病毒有致癌作用，可能使受体细逆转录病毒有致癌作用，可能使受体细胞癌变。胞癌变。根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地将其改造，保留其优点，除去癌基因和将其改造，

21、保留其优点，除去癌基因和病毒基因，保留病毒基因，保留LTR和和包装信号。包装信号。6）受体载体转移法l l将含有目的基因的重组质粒和某些细胞表将含有目的基因的重组质粒和某些细胞表面受体能识别的特异性多肽（配体）形成面受体能识别的特异性多肽（配体）形成复合物，通过细胞内吞途径达到转移基因复合物，通过细胞内吞途径达到转移基因的目的。的目的。重组质粒重组质粒重组质粒重组质粒配体配体配体配体细胞膜细胞膜复合物复合物复合物复合物三）靶细胞的选择三）靶细胞的选择l l靶细胞靶细胞是指接受外源是指接受外源GeneGene的的体体细胞细胞选择靶细胞的选择靶细胞的原则原则是：是：1 1）必须较坚固，便于体外培养

22、和进行遗传技术）必须较坚固，便于体外培养和进行遗传技术 操作；操作；2 2）易于由人体分离又便于输回体内）易于由人体分离又便于输回体内3 3）具有增殖优势，生命周期长（能存活几月至）具有增殖优势，生命周期长（能存活几月至 几年，或整个生命周期）几年，或整个生命周期）4 4）易于受外源遗传物质转化。）易于受外源遗传物质转化。常见的靶细胞常见的靶细胞l l外周血外周血外周血外周血T T T T淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞l l上皮细胞上皮细胞上皮细胞上皮细胞l l内皮内皮内皮内皮l l皮肤成纤维细胞皮肤成纤维细胞皮肤成纤维细胞皮肤成纤维细胞l l造血干细胞造血干细胞造血干细胞造血干细胞地中海贫

23、血、严重地中海贫血、严重地中海贫血、严重地中海贫血、严重 复合免疫缺陷病等基因治疗复合免疫缺陷病等基因治疗复合免疫缺陷病等基因治疗复合免疫缺陷病等基因治疗l l肝肝肝肝C C C C家族性高胆固醇血症、低密度家族性高胆固醇血症、低密度家族性高胆固醇血症、低密度家族性高胆固醇血症、低密度 脂蛋白病的基因治疗脂蛋白病的基因治疗脂蛋白病的基因治疗脂蛋白病的基因治疗l l肌细胞肌细胞肌细胞肌细胞三、三、GeneGene治疗的现状与前景治疗的现状与前景l l体细胞体细胞Gene治疗临床实验已经开始，生治疗临床实验已经开始，生殖细胞殖细胞Gene治疗正在完善。进行基因治治疗正在完善。进行基因治疗必须具备下

24、列条件疗必须具备下列条件：具备下列条件l l选择适当的疾病，清楚疾病的发病机理，选择适当的疾病，清楚疾病的发病机理，Gene的结构和功能。的结构和功能。l l被纠正的基因已克隆，并清楚被纠正的基因已克隆，并清楚Gene表达与调表达与调控机制与条件。控机制与条件。l l选择适当的受体细胞并在体外有效表达。选择适当的受体细胞并在体外有效表达。l l安全有效的基因转移方法，以及供利用的动物安全有效的基因转移方法，以及供利用的动物模型。模型。基因治疗实例1、复合免疫缺陷综合征的基因治疗复合免疫缺陷综合征的基因治疗（人类（人类Gene治疗成功例子）治疗成功例子）l lADA缺乏症缺乏症-致死性疾病，患者

25、由于致死性疾病，患者由于腺腺苷酸脱氨酶（苷酸脱氨酶（ADA）缺乏。缺乏。ADA-Gene+vectorADA-Gene+vector（逆转录病毒）（逆转录病毒）（逆转录病毒）（逆转录病毒）重组分子重组分子重组分子重组分子患者患者患者患者TLyCIL-2TLyCIL-2刺激刺激刺激刺激C C分裂分裂分裂分裂导入导入导入导入 细胞生长分裂细胞生长分裂细胞生长分裂细胞生长分裂1010天天天天GeneGene表达表达表达表达 回输患儿体内回输患儿体内回输患儿体内回输患儿体内1212月治疗一次月治疗一次月治疗一次月治疗一次,10,10个月个月个月个月患儿体内患儿体内患儿体内患儿体内ADAADA水平达正常

26、人的水平达正常人的水平达正常人的水平达正常人的25%25%2、乙型血友病、乙型血友病l lXR，患者凝血因子，患者凝血因子缺乏，缺乏，因子基因定位因子基因定位在在Xq26.3q27.2。临床表现，易出血，凝血临床表现，易出血，凝血时间长，轻伤、小手术后常出血不止。发病时间长，轻伤、小手术后常出血不止。发病率为率为1/30000。l l例如：我国学者薛京伦实施的例如：我国学者薛京伦实施的F的基因治疗。的基因治疗。l l逆转录病毒载体逆转录病毒载体逆转录病毒载体逆转录病毒载体+F+FcDNAcDNA 重组体重组体 5 LTR F 5 LTR F neo SV PSO LTR 3 neo SV PS

27、O LTR 3导入仓鼠细胞（导入仓鼠细胞（导入仓鼠细胞（导入仓鼠细胞（CHOCHO）FF表达；表达；表达；表达；导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）FF表达；表达；表达；表达；9191年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）培养）培养）培养）回植病人皮下回植病人皮下回植病人皮下回植病人皮下FF基因表达，基因表达，基因表达，基

28、因表达，F F基表达基表达基表达基表达水平达正常人的水平达正常人的水平达正常人的水平达正常人的5%5%。是我国基因治疗成功的例子。是我国基因治疗成功的例子。是我国基因治疗成功的例子。是我国基因治疗成功的例子。3、黑色素瘤的基因治疗l l肿瘤肿瘤肿瘤肿瘤GeneGene治疗治疗治疗治疗是人们十分关注的问题，进行了是人们十分关注的问题，进行了是人们十分关注的问题，进行了是人们十分关注的问题，进行了广泛的探索。研究发现广泛的探索。研究发现广泛的探索。研究发现广泛的探索。研究发现，肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞TILTIL，它积聚肿瘤部位，并在该处持续存在而它积聚肿瘤

29、部位，并在该处持续存在而它积聚肿瘤部位，并在该处持续存在而它积聚肿瘤部位，并在该处持续存在而无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗治疗IL-2 GeneIL-2 Gene TNF-GeneTNF-Gene （白介（白介（白介（白介2 2）（肿瘤坏死因子）（肿瘤坏死因子）（肿瘤坏死因子）（肿瘤坏死因子）逆转录病毒载体逆转录病毒载体逆转录病毒载体逆转录病毒载体导入导入导入导入TILTIL（体外培养的自体细胞）（体外培养的自

30、体细胞）（体外培养的自体细胞）（体外培养的自体细胞）回植患者体内回植患者体内回植患者体内回植患者体内TILTIL进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细胞胞胞胞 的作用。的作用。的作用。的作用。4、自杀基因的基因治疗、自杀基因的基因治疗 原理：原理：原理：原理：即用（逆转录）病毒载体将编码某种即用（逆转录）病毒载体将编码某种即用（逆转录）病毒载体将编码某种即用（逆转录）病毒载体将编码某种酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶的基因（

31、自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶可将一种酶可将一种酶可将一种酶可将一种无害无害无害无害的药物前体转变为的药物前体转变为的药物前体转变为的药物前体转变为细胞毒复合细胞毒复合细胞毒复合细胞毒复合物物物物，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而死亡）。这种基因载体只能在死亡）。这种基因载体只能在死亡）。这种基因载体只能在死亡）。这种基因载体只能在特定的组织或肿特定的组织或肿特定的组织或肿特定的组织或肿瘤瘤瘤瘤中表达，而正常细胞中不表达。中表达，而正常

32、细胞中不表达。中表达，而正常细胞中不表达。中表达，而正常细胞中不表达。如如：自杀基因自杀基因+病毒载体病毒载体转染转染重组载体重组载体 药物前体药物前体 无毒无毒Gene酶酶 药物复合物药物复合物 有毒有毒 细胞死亡细胞死亡例如：例如：例如：例如：单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞HSVGene-TKHSVGene-TK（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）GeneTKGeneTKGCVGCV（胸苷类似物）（胸苷类似物）

33、（胸苷类似物）（胸苷类似物）TdRTdRPpPpGCV-pGCV-p抑制抑制抑制抑制DNADNA合成合成合成合成脱氧胸苷酸脱氧胸苷酸脱氧胸苷酸脱氧胸苷酸 肿瘤细胞死亡肿瘤细胞死亡肿瘤细胞死亡肿瘤细胞死亡 邻近细胞死亡邻近细胞死亡邻近细胞死亡邻近细胞死亡/凋亡（旁观者效应）凋亡（旁观者效应）凋亡（旁观者效应）凋亡（旁观者效应）5、反义核酸基因治疗反义技术反义技术：是指利用人工合成的反义是指利用人工合成的反义RNA或或DNA导入靶细胞，阻断导入靶细胞，阻断Gene的转的转录或复制，控制细胞的中间阶段使编码蛋录或复制，控制细胞的中间阶段使编码蛋白的白的Gene不能转录为不能转录为mRNA或阻断翻译或

34、阻断翻译相应蛋白相应蛋白.反义基因治疗 DNA DNA DNA DNA RNA RNA RNA RNA 反义反义RNARNA 阻断表达阻断表达 四、四、基因治疗存在的问题与论理学基因治疗存在的问题与论理学l l基因基因治疗的研究与实践中存在若干重治疗的研究与实践中存在若干重要问题，所以更多的是处于研究阶段，要问题，所以更多的是处于研究阶段，临床应用还有待深入。临床应用还有待深入。一）导入基因的持续性和高效表达一）导入基因的持续性和高效表达如何提高基因的持续高效表达如何提高基因的持续高效表达如何提高基因的持续高效表达如何提高基因的持续高效表达，从下列几方面考虑：，从下列几方面考虑：，从下列几方面

35、考虑：，从下列几方面考虑：1 1 1 1、选择高效的基因转移方法；、选择高效的基因转移方法；、选择高效的基因转移方法；、选择高效的基因转移方法；2 2 2 2、选择适当的受体细胞（生命周期长的细胞）、选择适当的受体细胞（生命周期长的细胞）、选择适当的受体细胞（生命周期长的细胞）、选择适当的受体细胞（生命周期长的细胞）3 3 3 3、选择适当的载体（广泛表达或特异性表达的载体，、选择适当的载体（广泛表达或特异性表达的载体，、选择适当的载体（广泛表达或特异性表达的载体，、选择适当的载体（广泛表达或特异性表达的载体，以使以使以使以使GeneGeneGeneGene高效表达）高效表达）高效表达）高效表

36、达）二）二）GeneGene治疗与社会伦理道德治疗与社会伦理道德l l体细胞体细胞体细胞体细胞GeneGene治疗符合伦理道德，没有争议。治疗符合伦理道德，没有争议。治疗符合伦理道德，没有争议。治疗符合伦理道德，没有争议。l l生殖细胞生殖细胞生殖细胞生殖细胞GeneGene治疗可能改变正常人的遗传特征，治疗可能改变正常人的遗传特征，治疗可能改变正常人的遗传特征，治疗可能改变正常人的遗传特征，存在某些争议。然而生殖细胞的基因治疗又是存在某些争议。然而生殖细胞的基因治疗又是存在某些争议。然而生殖细胞的基因治疗又是存在某些争议。然而生殖细胞的基因治疗又是一个不容回避的课题，因为它比体细胞基因治一个

37、不容回避的课题，因为它比体细胞基因治一个不容回避的课题，因为它比体细胞基因治一个不容回避的课题，因为它比体细胞基因治疗更为彻底。所以，随着分子生物学技术的发疗更为彻底。所以，随着分子生物学技术的发疗更为彻底。所以，随着分子生物学技术的发疗更为彻底。所以，随着分子生物学技术的发展，展，展，展，GenGene e治疗技术的成熟，将回答伦理道德治疗技术的成熟，将回答伦理道德治疗技术的成熟，将回答伦理道德治疗技术的成熟，将回答伦理道德方面的问题，相信生殖细胞的基因治疗将会被方面的问题，相信生殖细胞的基因治疗将会被方面的问题，相信生殖细胞的基因治疗将会被方面的问题，相信生殖细胞的基因治疗将会被人们接受。人们接受。人们接受。人们接受。