微生物的实验室培养--PPT.ppt
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1、到目前为止,到目前为止,几十项几十项Nobel生理学和医学奖,化学奖生理学和医学奖,化学奖 都与微生物学有关都与微生物学有关微生物的类群原生生物原核生物真菌病毒如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻 原核细胞课题1 微生物的实验室培养1.提供营养和条件2.防止污染一一.培养基:培养基:微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.1.基本成分:基本成分:思考:微生物“吃”什么?碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源无机碳源:无机碳源:有机碳源:有机碳源:COCO2 2、COCO3 32 2-、H
2、COHCO3 3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源:无机氮源:有机氮源:有机氮源:NHNH4 4、NONO3 3-(为硝化细菌提供(为硝化细菌提供N N源和能源)源和能源)牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注:含注:含CHONCHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源一一.培养基:培养基:微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.1.基本成分:基本成分:碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐2.2.特殊营养特殊营养:维生素、碱基等(生长因子)维生素
3、、碱基等(生长因子)(牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有)(牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有)3.pH3.pH、氧气的需求:、氧气的需求:4.4.种类种类:固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有无有无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂分离分离 鉴定鉴定工业工业 生产生产化学成分:化学成分:物理性质:物理性质:天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基培养基的种类液体培养基半固体培养基固体培养基据物理性质分天然培养基合成培养基据化学成分分选择培养基鉴别培养基据用途分常用于工业生产常用于观察微生物的运动、鉴定菌种用于微生物的分离、计数常用于工业生产常用于分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生
4、长,促进所需要的微生物的生长。例如,在培养基中加入青霉素,以抑制细菌、放线菌的生长,从而分离到酵母菌和霉菌。又如,在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长,但不影响金黄色葡萄球菌的生长。根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成,用以鉴别不同种类的微生物。例如,在培养基中加入伊红和美蓝,可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌:如果有大肠杆菌,其代谢产物就与伊红和美蓝结合,使菌落呈深紫色,并带有金属光泽。牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml1000ml牛肉膏蛋
5、白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g分析营养构成?分析营养构成?5.5.配制原则配制原则目的明确:目的明确:营养全面、浓度适宜、比例恰当营养全面、浓度适宜、比例恰当适宜的适宜的pHpH值:值:有机碳源有机碳源异养型:异养型:根据微生物的种类、培养目的选择原料根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型:自养型:不加碳源不加碳源加入缓冲剂加入缓冲剂细菌偏碱,真菌偏酸细菌偏碱,真菌偏酸(COCO2 2碳源)碳源)生产生产科研科研耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的 物品,物品,160170 12小
6、时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为温和理化方法,较为温和理化方法,杀死部分有害菌体杀死部分有害菌体(不包括芽孢、孢子)(不包括芽孢、孢子)强烈的理化方法,强烈的理化方法,杀死所有微生物杀死所有微生物(包括芽孢、孢子)(包括芽孢、孢子)煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基,培养基,100KPa、121、1530min二二.无菌技术:无菌技术:防止外来杂
7、菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌:消毒与灭菌:请你判断以下材料或用具是否需要消毒或请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。灭菌。如果需要,请选择合适的方法。(1 1)培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿(2 2)玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管(3 3)实验操作者的双手实验操作者的双手2.2.无菌范围:无菌范围:实验操作空间消毒实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验用具灭菌实验操作过程实验操作过程二二.无菌技术:无菌技术:防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌:消毒与灭菌:酒
8、精灯旁操作酒精灯旁操作超净工作台超净工作台有些细菌在一定的条件下,细胞里面形有些细菌在一定的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的休眠体,叫做芽孢。芽成一个椭圆形的休眠体,叫做芽孢。芽孢的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶孢的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如,有的劣的环境有很强的抵抗力。例如,有的细菌的芽孢,煮沸细菌的芽孢,煮沸3 3小时以后才死亡。小时以后才死亡。芽孢又小又轻,可以随风飘散。当环境芽孢又小又轻,可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候,芽适宜(如温度、水分适宜)的时候,芽孢又可以萌发,形成一个细菌孢又可以萌发,形成一个细菌细菌、原生动物、真菌和植物细
9、菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的生等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。殖细胞。能直接发育成新个体。单个单个或少数菌体或少数菌体2.2.特征:特征:大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。3.3.功能:功能:1.1.定义:定义:菌落菌落鉴定菌种的重要依据鉴定菌种的重要依据固体培养基上固体培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g三三.大肠杆菌的纯化培养大肠杆
10、菌的纯化培养:制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算:计算:培养基用量培养基用量依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.2.称量:称量:3.3.溶化:溶化:牛肉膏黏稠,用称量纸称取牛肉膏黏稠,用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮,要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮,要快、加盖牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解、少量水加热溶解 取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl琼脂琼脂 补水定容补水定容4.4.调调pHpH、分装、封口:、分装、封口:5.5.灭菌:灭菌:6.6.倒平板:倒平板:培养基、培养皿培养基、培养皿分散成单个细胞分散成单个细胞,形成单个菌落形成单
11、个菌落倒平板倒平板约约50防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染灼烧灭菌,灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基 1.1.培养基灭菌后,需要冷却到培养基灭菌后,需要冷却到50 50 左右时,左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?温度?答:答:可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。时,就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?为什么需要使锥形瓶的瓶
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