(9)--6.2液相免疫沉淀试验.ppt

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1、液相免疫沉淀试验液相内免疫沉淀试验液相内免疫沉淀试验絮状免疫沉淀絮状免疫沉淀试验试验免疫免疫比浊试验比浊试验透射免疫比浊透射免疫比浊试验试验散射免疫比浊散射免疫比浊试验试验抗原稀释法抗原稀释法抗体稀释法抗体稀释法方阵滴定法方阵滴定法环状免疫沉淀试验（已不用）环状免疫沉淀试验（已不用）液相内免疫沉淀试验类型液相内免疫沉淀试验类型抗原稀释法抗原稀释法 抗原倍抗原倍比稀释比稀释抗体稀释法抗体稀释法 抗体倍抗体倍比稀释比稀释 抗原倍抗原倍比稀释比稀释抗抗体体倍倍比比稀稀释释方阵滴定法方阵滴定法免疫浊度测定的基本原理免疫浊度测定的基本原理注意事项注意事项l 抗原抗原或抗体量如果大大过剩，可出现可溶性复合

2、物，或抗体量如果大大过剩，可出现可溶性复合物，造成造成假阴性。假阴性。l 应应维持反应管中抗体蛋白始终过剩维持反应管中抗体蛋白始终过剩。l 易易受到脂血的影响。受到脂血的影响。单色器单色器透透射射比比浊浊计计透射比浊透射比浊原理原理示意图示意图透射光透射光（一）透射免疫比浊法（一）透射免疫比浊法透射免疫比浊法的优点：透射免疫比浊法的优点：u操作简便操作简便u结果结果准确性较好准确性较好u灵敏度比单向免疫扩散法高灵敏度比单向免疫扩散法高510倍倍u重复性好重复性好u能自动化能自动化u检测成本低检测成本低u不适合半抗原比如小分子药物的检测。缺点：缺点：单色器单色器透透射射比比浊浊计计散射散射比浊计

3、比浊计散射比浊和透射比浊的区别示意图散射比浊和透射比浊的区别示意图透射光透射光散射光散射光散射光散射光预反应阶段预反应阶段5ul样本样本抗原过剩区抗原过剩区阈值阈值信信号号反反 应应 阶阶 段段45ul样本样本7.5秒秒2分钟分钟终点散射比浊法原理示意图终点散射比浊法原理示意图抗原不过量抗原不过量抗原过量抗原过量反应时间反应时间抗原浓度递增抗原浓度递增散散射射光光峰峰值值峰值信号与抗原抗体反应之间的关系图峰值信号与抗原抗体反应之间的关系图ABCDFGHI速率散射免疫比浊法速率散射免疫比浊法反应最快的速率峰值通常出现在25s时。Ag-AbAg-Ab复合物形成的时间与速率关系复合物形成的时间与速率

4、关系累累计时间(s)形成复合物的量形成复合物的量(g)形成速率形成速率(g/s)58-1015515251220603525150903023080353007040360604541555504504555480306050020Ag-Ab复合物形成的时间与速率关系复合物形成的时间与速率关系光波光波dd 当粒子直径小于入射波长时当粒子直径小于入射波长时呈全透射，透射与散射相当呈全透射，透射与散射相当 当粒子直径大于入射光波的当粒子直径大于入射光波的1/20时，时，形成不对称前向散射，在形成不对称前向散射，在90o以前的以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量散射光的量代表复合物的量 胶乳增强免疫浊度测定胶乳增强免疫浊度测定的的基本原理基本原理思考题本节中哪个试验更适合微量抗原的检测？本节中哪个试验更适合微量抗原的检测？