2023年高中生物选修3《现代生物科技专题》知识梳理.pdf
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1、 选修 3现代生物科技专题知识梳理 专题 1 基因工程 1.1 基因工程的诞生 一、基因工程的诞生 1、20 世纪中叶,基础理论取得了重大突破 DNA 是遗传物质的证明:1944 艾弗里等人 DNA 双螺旋结构和中心法则的确立:1953 年沃森和克里克建立了 DNA 双螺旋结构模型。1958 年,梅塞尔松和斯塔尔用实验证明了 DNA的半保留复制,随后不久确立了中心法则。遗传密码的破译:1963 年,尼伦贝格等破译了遗传密码。2、技术的发明使基因工程的实施成为可能 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA 合成和测序技术的发明 DNA 体外重组的实现 重组 DNA 表达实验的成功:1973 年,
2、博耶和科恩将两种不同来源的 DNA 分子进行体外重组,并首次实现了在大肠杆菌中的表达,至此,基因工程正式问世。第一例转基因动物问世:1980 年,科学家首次通过显微注射法,培育出世界上第一个转基因动物。这一实验被认为是基因工程发展史上的一个里程碑。PCR 技术的发明:1985 年,科学家莫里斯发明。二、基因工程的概念 是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞并使重组基因在受体细胞中表达,产生人类需要的基因产物的技术。又称重组 DNA 技术。思考:(1)基因工程的物质基础是:所有生物的 DNA 均由四种脱氧核苷酸组成。(2)基因工程的结构基础是
3、:所有生物的 DNA 均为双螺旋结构。(3)一种生物的 DNA上的基因之所以能在其他生物体内得以进行相同的表达,是因为它们共用一套遗传密码子。1.2 基因工程的原理及技术 一、基因工程的工具酶与载体 1、分子手术刀:限制性核酸内切酶(简称限制酶)。(1)来源:主要从原核生物中分离和纯化。(2)特点:每种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的位点上切割 DNA 分子。(切割的化学键:磷酸二酯键)(2)切割方式 错位切:产生黏性末端。平切:产生平口末端。2、分子针线:DNA 连接酶。(1)类型:EcoliDNA 连接酶、T4DNA 连接酶等。(2)作用:可以将两个 DNA 片段之间的 2
4、各缺口通过磷酸二酯键同时连接起来。3、运载工具:载体。(1)种类:质粒(常用)、噬菌体、可起载体作用的动植物病毒。(2)质粒:来源:是细菌细胞质中一种很小的环状、双链 DNA 分子。条件:具有一个至多个限制酶切割位点。能在受体细胞中自我复制,或整合到染色体 DNA 上,随染色体 DNA 进行同步复制。具有某些标记基因。(供重组 DNA 的 鉴定和选择)能“友好”地“借居”在受体细胞内;二、基因工程的一般过程与技术 苏教版 人教版 1、获得目的基因 1、目的基因的获取 2、制备重组 DNA 分子 2、基因表达载体的构建 3、转化受体细胞 3、将目的基因导入受体细胞 4、筛选出获得目的基因的受体细
5、胞 4、目的基因的检测与鉴定 5、培养受体细胞并诱导目的基因的表达 1、目的基因的获取(1)目的基因:主要是指编码蛋白质的结构基因。(2)获取方法 从自然界已有物种中分离 人工合成 补充:聚合酶链式反应技术(PCR 技术)(1)PCR:即聚合酶链式反应(2)PCR 技术:在体外通过酶促反应有选择地大量扩增目的基因或序列的技术。(3)方法:2、基因表达载体的构建(核心)(1)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因可以能够表达和发挥作用。(2)组成:目的基因 +启动子 +终止子 +标记基因 (3)构建步骤:用同一种限制酶切割目的基因和载体,从而产生相同的黏性末
6、端,再用 DNA 连接酶连接。(形成的分子称:重组 DNA 分子或重组质粒。)【特别提示】插入的目的基因只是目的基因部分,其表达需要调控序列,因而用作载体的质粒前需有启动子,后需有终止子。3、将目的基因导入受体细胞(转化)(1)受体种类不同,导入方法不同 导入植物细胞:农杆菌转化法(常用)、基因枪法、花粉管通道法。从基因文库中获取目的基因 利用 PCR 技术扩增目的基因 逆转录 RNA 聚合酶识别和结合部位,位于基因的首端。鉴别受体细胞中是否含有目的基因。终止信号,位于基因的尾端。导入动物细胞:显微注射法。导入微生物细胞:Ca2+处理法。(2)受体细胞的种类 植物:可以是受精卵、体细胞(可经组
7、织培养成完整个体)动物:受精卵(因为动物细胞的全能性受到抑制)(3)转化实质:目的基因整合到受体细胞的染色体 DNA 上。4、目的基因的检测与鉴定(1)分子检测 检测转基因生物的染色体 DNA 是否插入了目的基因(DNA 分子杂交法)检测目的基因是否转录出了 mRNA(分子杂交法)检测目的基因是否翻译出了蛋白质(抗原抗体杂交法)(2)个体生物学水平鉴定 检测转基因生物是否具有了我们所需要的遗传特性。三、基因工程育种 1、方法:提取目的基因装入载体导入受体细胞基因表达筛选出符合要求的新品种 2、原理:基因重组。3、优点:目的性强,可以按照人们的意愿定向改造生物;育种周期短。4、缺点:技术复杂,存
8、在安全性问题。5、实例:抗软化番茄的培育。1.3 基因工程的应用 一、转基因生物 是指利用基因工程技术导入外源基因培育出的、能够将新性状稳定地遗传给后代的基因工程生物。二、基因工程的应用 1、植物基因工程 抗虫转基因植物减轻农药对环境的污染 抗病转基因植物 抗逆转基因植物 利用转基因改良植物的品质 2、动物基因工程 提高动物的生长速度 改善畜产品的品质 用转基因动物生产药物(乳腺生物反应器)用转基因动物作器官移植的供体 3、基因工程药物的生产 如用转基因工程菌生产细胞因子、抗体、疫苗、激素等。4、基因诊断和基因治疗(1)方法 基因诊断:采用基因检测的方法(DNA 分子杂交技术)来判断患者是否出
9、现了基因异常(如遗传病患者的基因缺陷)或是否携带病原体(如乙型肝炎病毒)等。基因治疗:是指利用正常基因置换或弥补缺陷基因的的治疗方法。体外基因治疗:先从病人体内获得某种细胞,进行培养,然后在体外完成基因转移,再筛选成功转移的细胞扩增培养,最后重新输入患者体内。体内基因治疗:用基因工程的方法,直接向人体组织细胞中转移基因的方法。(2)实例:ADA 基因缺陷症基因治疗机理 1.4 蛋白质工程 一、蛋白质工程崛起的缘由 基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质,这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的,它们的结构和功能符合物种生存的需要,却不一定完全符合人类生产和生活的需要。二、蛋白质工程的概念
10、 指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活需求。基因工程是其中的关键技术,因此,蛋白质工程又被称为第二代基因工程。三、蛋白质工程的原理 1、天然蛋白质合成:基因表达(转录和翻译)形成氨基酸序列的多肽链形成具有高级结构的蛋白质行使生物功能。(中心法则)2、蛋白质工程:从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)途径 四、蛋白质工程的类型 1、类型(1)大改:是指根据氨基酸的性质和特点,设计并制造出自然界中不存在的全新蛋白质,使之具有特定的氨基酸
11、序列、空间结构和预期的功能。(2)中改:是指在蛋白质分子中替代某一肽段或一个特定的结构域。(3)小改:是指通过基因工程中的定点诱变技术,有目的地改造蛋白质分子中某活性部位的 1 个或几个氨基酸残基,以改善蛋白质的性质和功能。2、定点诱变技术(见右图)五、蛋白质工程的应用 1、通过改造酶的结构,有目的地提高酶的热稳定性。2、在生物工程制药领域,蛋白质工程也有广泛的应用。专题 2 克隆技术 2.1 细胞工程概述 一、细胞工程的概念 是指以细胞为基本单位,在体外无菌条件下,进行培养、繁殖或利用细胞融合、核移植等技术,使细胞某些生物学特性按照人们的意愿发生改变,从而改良生物品种、创造新品种和加速繁育生
12、物个体,以及获得某些有用的细胞代谢产物的技术。二、细胞工程的类型 1、按研究对象可分为:植物细胞工程、动物细胞工程、微生物细胞工程 2、按所用技术可分为:植物组织培养、植物体细胞杂交 动物细胞培养、动物细胞融合和单克隆抗体制备、细胞核移植技术和动物体细胞克隆 2.2 植物的组织培养 一、植物细胞的全能性 1、概念:生物体内几乎每一个细胞内都含有该物种的全套遗传物质,具有发育成为完整个体所必需的全部基因,因此,这些细胞都具有发育成为一个新的生物个体的潜能。细胞的这种特性称为细胞全能性。2、理论依据:生物体内几乎每一个细胞内都含有该物种的全套遗传物质,具有发育成为完整个体所必需的全部基因。3、全能
13、性大小的判断(1)受精卵配子体细胞(2)植物细胞动物细胞(3)分化程度低的细胞分化程度高的细胞 4、实现全能性的条件(1)离体状态。(2)环境条件条件适宜(如营养物质、激素、温度等)。5、体细胞未表现出全能性的原因 基因的表达具有选择性。即未离体细胞只能在机体的调控下定向分化,不能表达其全能性。6、植物细胞的全能性是植物细胞工程的基础。【特别提示】目前的实验证明,离体的植物体细胞的全能性得到了充分的体现(如植物组织培养),而离体的动物体细胞,其全能性受到限制,但其细胞核仍然保持全能性(如克隆技术培养动物个体),然而需要卵细胞质才能体现出来。二、植物细胞工程(一)植物组织培养 1、概念:是指依据
14、细胞全能性的原理,在无菌条件下,分离植物的器官、组织、细胞或原生质体(称为外植体),并在培养基上培养,在适宜的条件下使其长成部分或完整植株的技术。2、理论基础:植物细胞的全能性。3、过程:附:相关概念 愈伤组织:是一团没有特定结构和功能并处于旺盛分裂状态的薄壁细胞。脱分化:由已分化的植物细胞形成愈伤组织的过程。再分化:愈伤组织生长一段时间后再移植到新的培养基(人教版:分化培养基)上继续培 养,重新诱导分化形成根、芽等器官的过程。4、条件:首先用消毒剂除去外植体表面的微生物,在无菌条件下将其放到适宜的培养基上。培养基一般有五类成分:(1)水(2)无机营养:包括大量元素和微量元素。(3)有机营养:
15、主要有糖、维生素、氨基酸。(4)生长物质:指植物激素,常用的有生长素和细胞分裂素,离体培养物的根芽分化取决于激素间的比例。此外,赤霉素对刺激细胞的伸长也有一定的作用。(5)天然附加物:如椰子乳、酵母提取物等。5、应用(1)微型繁殖:不仅可以保持优良品种的遗传特性,还可以高效快速地实现种苗的大量繁殖。(2)作物脱毒:植物分生区附近,如茎尖、根尖,很少被病毒感染,甚至无病毒,因而被用来培育无病毒植株。(3)制备人工种子 概念:是指在植物组织培养中得到的体细胞胚状体,包埋在含有营养物质和保护物质的包被中,在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体。优点:不受环境因素的制约,一年四季都可以进行工厂化生产;繁殖速
16、度快,可在短时间内提供大量种苗;有利于保存该种系的优良性状。(4)转基因植物的培育(5)生产药物、杀虫剂等。6、细胞工程育种之一植物组织培养育种 方法:离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织根、芽等器官植物体 原理:植物细胞的全能性 优点:快速繁殖、培育无病毒植株等 缺点:技术要求高、培养条件严格 实例:制备人工种子(二)植物体细胞杂交 离体的器官、组织、细胞 愈伤 组织 脱分化 再分化(分化培养基)胚状体试管苗植物体 1、概念:就是将不同种的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。2、理论基础:植物细胞的全能性。3、过程 附:(1)原生质体:是指去除植物细胞壁
17、后获得的裸露的植物细胞结构等。(2)诱导植物细胞融合的方法:物理法:离心、振动、电激等。化学法:一般用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。4、意义:克服远源杂交不亲和的障碍。5、细胞工程育种之二植物体细胞杂交育种 方法:去掉细胞壁诱导原生质体融合组织培养 植物体 原理:植物细胞的全能性(变异原理:染色体变异;融合原理:细胞膜具有一定的流动性)优点:克服远源杂交不亲和的障碍,培育出作物新品种。缺点:技术复杂,不能按人们的需要表现出亲代的优良性状。实例:番茄马铃薯的培育 2.3 动物细胞的培养与体细胞克隆 一、动物细胞培养 1、概念:就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培
18、养基中,让这些细胞生长和增殖。这项技术是动物细胞工程的基础。用于培养的动物细胞和组织大多取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织。2、过程:见下图 相关概念 细胞贴壁:培养时悬液中分散的细胞很快就会贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。原代培养:是指从供体获取组织或细胞后的初次培养。传代培养:将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养。(一般情况下,传代培养 10-50次后,细胞增殖会明显放缓,甚至完全停止,但有少部分细胞克服细胞寿命的自然极限,获得不死性,这些细胞已经发生了突变,正在朝着等同
19、于癌细胞的方向发展。)3、条件:(1)无菌、无毒的环境 培养液和培养用具进行无菌处理 培养液中添加一定量的抗生素 定期更换培养液(2)营养 葡萄糖、氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、促生长因子等。合成培养基中还需加入动物血清、血浆等(3)温度和 PH 温度:细胞体外培养的温度一般与动物的体温相近,哺乳动物多以 36.50.5为宜。PH:多数细胞最适 PH 为 7.2-7.4。(4)气体环境 细胞培养所需气体主要是 O2和 CO2,O2 是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的 PH。进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,将其置于 95%空气加 5%CO2的混合气体的培养箱 中进
20、行培养。附:培养基的的种类(按来源分)天然培养基:主要取自动物血清、动物组织提取液和鸡胚汁等,具有营养价值高、成分复杂的特点。合成培养基:是人工配制的,具有成分明确、便于控制实验条件的特点。4、应用:(1)许多有重要价值的生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等,都可以借助动物细胞的大规模培养来生产。(2)作为基因工程的受体细胞。(3)用于检测有毒物质,判断某种物质的毒性。(4)用于医学研究 二、细胞核移植和动物体细胞克隆(一)细胞核移植:是一种利用显微操作技术将某种动物细胞的细胞核移入同种或异种动物的去除细胞核的成熟卵细胞内的技术。(二)动物体细胞克隆 1、概念:将供体体细胞的细胞核与受体
21、去核卵细胞的细胞质进行人工组合,借助于卵细胞的发育能力,经过培养发育成胚胎,进而形成个体的技术。(关键:细胞核移植)(克隆:是指遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体。)2、过程:(克隆羊“多利”的产生过程)3、应用前景(1)在畜牧生产中,可以加速家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育;(2)在保护濒危物种方面,可以增加这些动物的存活数量;(3)在医疗卫生领域:转基因克隆动物可以作为生物反应器,生产许多珍贵的医用蛋白;在治疗人类疾病时,转基因克隆动物细胞、组织和器官可以作为异体移植的供体;人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化,形成相应的组织、器官后可以用于组织、器官的移植。(
22、4)研究克隆动物和克隆细胞可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老过程;(5)用克隆动物做疾病模型,能使人们更好的追中踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。4、细胞工程育种之三动物细胞核移植育种 方法:细胞核移植重组细胞培养成早期胚胎胚胎移植 原理:动物细胞核的全能性 优点:快速繁殖优良品种,保存濒危物种,有选择地繁殖某性别的动物。缺点:导致生物品系减少,个体生存能力下降。实例:“多利”羊等克隆动物的培育 附:现代生物技术育种小结 2.4 动物细胞融合与单克隆抗体(一)动物细胞融合 1、概念:指在一定条件下将 2 个或多个动物细胞融合为一个细胞的过程。(融合成的细胞称为杂交细胞)2、过程 类型 比较 基因
23、工程 育种 细胞工程育种 植物组织培养 育种 植物体细胞杂交 育种 动物细胞核移植 育种 原理 基因重组 植物细胞的全能性 植物细胞的全能性(变异原理:染色体变异;融合原理:细胞膜具有一定的流动性)动物细胞核的全能性 方法 提取目的基因装入载体导入受体细胞基因表达筛选出符合要求的新品种 离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织根、芽植物体 去掉细胞壁诱导原生质体融合组织培养 细胞核移植重组细胞培养成早期胚胎胚胎移植 优点 目的性强,可以按照人们的意愿定向改造生物;育种周期短。快速繁殖、培育无病毒植株等 克服远缘杂交不亲和的障碍,培育出作物新品种。快速繁殖优良品种,保存濒危物种,有选择地繁殖某性别的动
24、物。缺点 技术复杂,存在安全性问题。技术要求高、培养条件严格。技术复杂,不能按人们的需要表现出亲代的优良性状。导致生物品系减少,个体生存能力下降。举例 抗软化番茄、转基因鲤鱼等。制备人工种子、试管苗的培育、培养转基因植物等。白菜甘蓝的培育、“番茄马铃薯”的培育。“多利”羊等克隆动物的培育。诱导因素 不同来源的细胞 杂交细胞 附:诱导动物细胞融合的方法 主要有物理法(如电激)、化学法(如聚乙二醇)、生物法(如灭活的病毒)3、意义:克服远源杂交的不亲和性。(二)单克隆抗体 1、制备:2、优点:特异强、灵敏度高、并可能大量制备。3、应用:(1)作为诊断试剂 单克隆抗体特异强、灵敏度高,所以能准确识别
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