检验科性能验证程序文件(整理)课件.pptx

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1、学 海 无 涯 性能性能验验证证1 1 目目的的 验证检测试剂在仪器上的性能指标。2 2 适适用用范范围围 适用于检验科检验项目试剂的性能指标验证。3 3 职职责责 1.科主任：负责审批性能验证计划。2.技术负责人 1.负责制定性能验证方案和计划。2.负责组织性能验证的实施。3.负责定期对科室性能验证数据的统计、分析和总结。4.负责组织对上述活动的可行性和有效性评审。3.各专业组技术管理员 1.负责组织本组人员完成本组性能验证的验证工作。2.负责对本组性能验证数据的统计、分析和总结工作。4.检验人员 1.负责协助科室技术负责人和本组技术管理员完成本组的性能验证工作。2.负责完成本组性能验证工作

2、中应承担的检验工作。3.负责认真填写本组性能验证的检验记录。4 4 内容内容 1.1.生生化化 生化室项目需要验证的参数包括批内精密度，批间精密度、正确度、线性范围、参考 区间、可报告区间等，适用时，还要考虑分析灵敏度（仅对那些在接近 0 的低值有临床意 义的项目有必要进行确定，必要时，可引用说明书中给出的低值）和干扰试验。1.精密度 1.标本准备及要求 可采用新鲜或冻存的样本。当样本中待测物不稳定或样本不易得到时，也可考虑使用 基质与实际待检样本相似的样本，如质控品。应至少评估 2 个浓度水平样本的不精密度。当 2 个浓度水平样本的不精密度有显著差异时，建议增加为 3 个浓度水平。所选样本的

3、 被测物水平应在测量区间内，适宜时，至少有 1 个样本的被测物水平在医学决定水平左 右。注 1：通常较高值样本的不精密度较小，较低值样本的不精密度偏大。对低值有临 床意义的检测项目，宜评估有判断价值的低水平样本的不精密度。注 2：如检测结果没有明确的医学决定水平，可在参考区间上限左右选 1 个浓度，再根据检验项目的特点在测量区间内选择另一个浓度。注 3：如与厂商或文献报导的不精密度比较，所选样本水平宜与被比较的样本水平接 近。2.方案 方案 1：对验证材料每天分析 1 批次，2 个浓度，每个浓度重复测定 4 次，连续 5 天。记录结 果并计算均值、标准差和批内、批间变异系数 CV（%）。方案

4、2：批内精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同 的检测方法，同批次内检测混合的新鲜临床标本 20 次。记录结果并计算均值（X）、标准 差（SD）和批内变异系数 CV（%）。第 1 页1共 17学 海 无 涯 批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同 的检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不 出控的前提下），同批次内检测混合的新鲜临床标本 20 次，同一批号室内质控品某一时间段（至少 20 天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。4.1.1.3 结果判断 从卫生标准或美国临床实验室室间

5、质量评估或卫生部/省临检中心室间质评允许总误 差表中查阅评价项目的允许误差范围，由实验数据统计的批内不精密度和批间不精密度小 于等于允许误差范围的 1/4 和 1/3 作为检测系统不精密度性能的的可接受标准，且又小于 等于厂商提供的精密度性能指标，说明由实验室评价的检测系统的不精密度性能可接受，符合要求。若大于判断限，检测系统的不精密度是否符合要示，应再进一步做统计学处理 作出判断。2.正确度 1.标本准备及要求 按照如下优先顺序选用具有互换性的标准物质或基质与待测样本相类似的标准物质：1）有证标准物质（CRM），包括国家标准物质（如 GBW）、国际标准物质（如 WHO、IFCC）、CNAS

6、认可的标准物质生产者（RMP）提供的有证标准物质、与我国签署互认协议的其他国家计量机构提供的有证标准物质（如 NIST、JSCC）等；2）标准物质（RM），如厂商提供的工作标准品；3标准物质（RM），如厂商提供的工作标准品；4正确度控制品；5正确度验证室间质评样本，如 CNAS 认可的 PTP 提供的正确度验证样本。宜根据 测量区间选用至少 2 个浓度水平的标准物质样本。6卫生部或省临检中心室间质评质控血清含盖的项目，则以卫生部或省临床检验中 心室间质评结果为准。卫生部或省临检中心室间质评未涉及的项目，通过仪器之间的比对 来验证。2.方案 方案 1：根据测量区间选用 2 个浓度水平的室间质评血

7、清，每个浓度水平每天重复测定 2 次，连续测定 5 天，记录检测结果，计算全部检测结果的均值和偏倚。方案 2:使用 5 个水平的室间质评血清，每个水平重复测定 3 次。记录结果，计算每份质控血 清均值与靶值的偏倚。卫生部或省临检中心室间质评未涉及的项目，通过仪器之间的比对来实现，以参加卫 生部或省临检中心的室间质评的作为比对基准仪器，其最近 1 次参加卫生部或省临检中心的室间质评结果。采用 5 个患者的标本，标本浓度水平尽量覆盖测量范围，包括医学决定 水平。计算在医学决定性水平下的系统误差（偏倚%），偏倚=测定值-靶值/靶值*100%,偏倚%应1/2 CLIA88 或卫生部或省临检中心室间质评

8、最大允许误差，80%以上的数据符 合以上要求即为通过。成绩在 80%以上者即为验证通过。3.结果判断：偏倚1/2 卫生标准或美国临床实验室室间质量评估或卫生部/省临 检中心室间质评允许总误差。80%以上的数据符合以上要求即为通过。3.线性范围 1.目的：在确定某项目检测上限的同时检测其检测上下限是否呈线性关系，从而保 证该浓度范围检测结果的准确性。2.标本来源：采用本实验室常规检测标本获得的高值/低值标本进行。3.验证频率：仅在更换试剂盒厂家时进行验证。一旦验证通过，无特殊情况，不重 复验证。第 2 页2共 17第 3 页3共 17学 海 无 涯 4.方案 方案 1：不同浓度标本制备：取高值和

9、低值标本各一份，按如下配比：标本 1：低浓度样本；标本 2：三份低浓度标本与一份高浓样标本混匀；标本 3：二份低浓度标本与二份高浓样标本混匀；标本 4：一份低浓度标本与三份高浓样标本混匀；标本 5：高浓度样本。检测时，按标本 1,2，3，4，5，5，4，3，2，1，1,2，3，4，5 排列，每个标本测量 3 次，记录浓度以理论浓度为纵坐标(Y)，实测浓度为横坐标(X)。由统计学计算出 r2 和 回归方程 Y=aX+b。方案 2：取高值标本和低值标本各一份，将两者按一定的比例稀释成系列不同浓度的 标本（如 4:0、3:1、2:2、1:3、0:4 等），浓度范围遍布整个预期可报告区间，分别上机 按

10、低到高各重复测定 3 次，计算线性回归方程 Y=aX+b 及相关系数 R2。5.验证结果判断 a 在 0.951.05 范围内，b 接近 0，R0.975,R20.95，则判断为线性范围验证通过。4.1.4 参考区间 1.标本选择 选择年龄、性别等均匀分布，符合建立参考区间的健康体检者血清标本 20 份，对不 同项目的参考区间进行验证。如碱性磷酸酶(ALP)等在不同年龄人群的不同参考区间应分 别进行验证，如某些年龄人群标本不易获得时，可暂不做验证，但需与临床沟通，对于性 激素等检测项目因生理周期变化等因素导致无法获取有效人群标本，暂不做验证，但亦需 与临床沟通。2.结果判断：规定小于或等于 2

11、 份标本结果超出参考区间，即为验证通过。或 R=测定结果在参考范围内的例数/总测定例数90%即合格。4.1.5 最大稀释倍数和可报告范围验证 1.仅对于那些临床可报告区间大于分析测量范围的检测项目才需要进行验证。通常 是在线性范围高值的基础上外延至最大稀释度倍数对应的值。2.标本来源：含本项目浓度接近线性范围上限的临床新鲜标本。3.评价方案：用厂家推荐的稀释液（或以生理盐水或蒸馏水为稀释介质）对超过分 析测量范围上限的高值标本进行系列手工稀释，分别进行不同倍数（2倍、4倍、8倍、16 倍）的稀释，每份稀释标本重复测定2次，计算稀释后标本结果均值X与原浓度结果的偏倚 B。可报告范围下限为线性范围

12、下限，可报告范围上限为线性范围高限*最大稀释倍数。4.1.5.4 结果判断：偏倚 B1/2 卫生标准或美国临床实验室室间质量评估或卫生部/省临 检中心室间质评允许总误差。符合要求的最大稀释倍数为实验室最大稀释倍数。可报告范 围下限为线性范围下限，可报告范围上限为线性范围高限*最大稀释倍数。6.携带污染验证 1.标本来源：含本项目浓度接近线性范围上限的临床新鲜标本。2.评价方案：选取一份检测线性范围内的高浓度标本（H），以及一份低值标本或生 化纯水（L），按照下列次序进行检测：H、H、H、L、L、L,测定值分别为：H1、H2、H3、L1、L2、L3,计算携带污染率=（L1-L3）/（H3-L3）

13、*100%。3.结果判断：携带污染率2%。2.2.免免疫疫-定性（定性（ELISA 法法）操作者熟悉检验程序和评价操作程序，对操作程序校准为最佳状态，严格按操作程序 进行验证。从以下几方面进行验证：灵敏度、特异性、符合率、检出限、Cut off 值验证、重复性和比对试验。1.符合率、敏感度和特异性 学 海 无 涯 4.2.1.1 根据 CLSI 发布 EP12-A2 文件要求（应参考定量分析将偏倚和不精密度应用于定 性试验的评价，除阴性和强阳性标本外，选取在临界值附近的浓度用于定性试验不精密度 的研究。）来验证本实验室定性实验的符合率、敏感度和特异性，计算了近一年参加卫生 部临检中心室间质评的

14、对比结果，将两方结果输入表格中通过公式计算各项性能指标。实验方法(新方法)金标准 阳性(n)阴性(n)合计 阳性 a(真阳性)b(假阳性)a+b 阴性 c(假阴性)d(真阴性)c+d 合计 a+c b+d a+b+c+d 总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)100%，灵敏度=(a+d)/(a+b+c+d)，特异性=d/(b+d)4.2.1.2 结果判断 按照卫生部临检中心对室间质评结果的要求认为 80%及以上即为满意，故选择 80%作 为评价结果是否可接受的标准。灵敏度95%。特异性95%。2.人员比对 1.方法 选取至少 20 份标本(包括阳性、阴性和弱阳性)，先由实验室经验丰富的操作人

15、员进 行实验，以其实验结果作为参照，所有从事该项目检测的人员均对同标本进行操作，将各 自结果与参照结果进行比对。参考人员结果 检测人 员结果 阳性(n)阴性(n)合计 阳性 a(真阳性)b(假阳性)a+b 阴性 c(假阴性)d(真阴性)c+d 合计 a+c b+d a+b+c+d 总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)100%4.2.2.2 结果判断 以本实验室参加人员检测结果与参考人员检测结果是否达到 80%以上（80%以上即可，如能做到更高，可以以更高的标准来判断）来作为判断标准。3.定性实验的检出限 将定值样品进行倍比稀释（如稀释到原浓度的 2、4、8、16 倍）后进行检测。首次 出现

16、阴性的前一个稀释倍数为该实验的检出限。4.Cut-off 值验证 方法 1：在临界值基础上，准备出-20%浓度样本和+20%浓度样本（即定值样品本身），对以上 低、高浓度样本分别测定 20 次，记录阴性及阳性结果数，即为 cut-off 重复性验证。应至少有 19 次以上（95%）阳性反应或者有 19 次以上（95%）阴性反应为通过。方法 2：连续统计上百份已检测样本结果，计算临界值结果所占的比例，小于 5%为可接受限。4.2.5 精密度 1.批内精密度验证 1.验证方法 选弱阳性室内质控品在同一批试验内，按规定的操 作方法，一天内平行做 20 个测试 相同的样本，计算其 x、S 与 CV。2

17、.结果判断 第 4 页4共 17学 海 无 涯 定性实验(ELISA)的批内变异 CV%应10%（请确认）。或用卫生部临检中心的允许总 误差、说明书、CLIA88 等做判定标准。2.批间精密度验证 1.方法 选择弱阳性室内质控品，每天按照常规标本的方法一样测定，连续测定 20 天，计算 其 x、S 与 CV。2.结果判断 定性实验(ELISA)的批间变异 CV%应15%（请确认）。或用卫生部临检中心的允许总 误差、说明书、CLIA 88 等做判定标准。6.比对试验 分别收集化学发光法检测出的 HBeAg 20 例阳性及 20 例阴性样本，用酶联免疫方法进 行比对检测，根据阴阳性结果评价检测结果

18、的符合率。结果判断：用阴阳性判断两种方法检测结果的符合率。4.34.3 免免疫疫-定量定量 根据试剂盒说明书或行业内(如 CLIA 88)要求制定拟验证的性能参数。免疫的定量项目性能验证参考生化的性能验证。4.44.4 临临检检（血（血常常规规）相关性能参数包括：精密度(批内、批间精密度)、正确度、携带污染率、线性范围、可报告区间、参考区间的验证、不同方法和仪器间的比对、仪器分类结果与手工分类结果 的比对、实验室内结果的可比性等，必要时，还要考虑干扰。1.精密度 1.样本检测（可参考）参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP15A“用户对精密度和准确度性能的核实：批准指南”中关于精密度

19、的内容要求，用两个浓度水平的质控品，每天上机测量 4 次(连续测定，中间不间断)，连续测量 5 天。4.4.1.2 数据分析方法（可参考）按照 EP15-A 文件之规定，通过 Excel 软件，计算出批内标准差 Switin 和批间标 准差 Stotal。具体的计算公式为：其 中：D：表示总共检测天数(D=5)；n：单个样本每天重复检测的次数(n=4)；xdi：每个样本每天四次单独检测的结果；xd：每个样本每天四次检测结果的算数均数；xt：单个样本每天检测结果的算数均数的算数均数。3.结果判断（可参考）1.于批内精密度的判断，具体的计算和判断过程：1)按照下述公式计算出批内精密度的自由度。D：

20、表 示 总 共 检 测 天 数(D=5)；n：单个样本每天重复检测的次数(n=4);因此，按照我们的验证方案，批内精密度(Swithin)的自由度为 15。2)按照下述公式计算出 C 值百分点。第 5 页5共 17；学 海 无 涯 其中为检验水准或者说可接受类误差的概率，一般设置为 5%；为测试水平，本次证的测试水平为 2。因此 C 值百分点(10.05/2)100%97.5%。同时，根据 EP-15A 提供的表格查出 C 值，在本次验证中，C 值为 27.49。其中 within 表示该项目 1/4 CLIA88 的总误差。3)如果 Swithin 小于 verification value

21、，表明本次验证得到的精密度与1/4 CLIA88 总误差之间的差异无统计学意义，仪器可以继续使用；反之，则认为分析系统 的批内精密度不满足临床要求，需要联系生产厂家查找可能的原因。4.1.3.2 对于批间精密度的判断，具体的计算和判断过程：1)按照下述公式计算出室内精密度的自由度 T：其中，B 的计算公式为：其 中：D：表示总共检测天数(D=5)；n：单个样本每天重复检测的次数(n=4)；xdi：每个样本每天四次单独检测的结果；xd：每个样本每天四次检测结果的算数均数；xt：单个样本每天检测结果的算数均数的算数均数。2)按照下述公式计算出 C 值百分点。其中 为检验水准或者说可接受类误差的概率

22、，一般设置为 5%为测试水平，本次验证的测试水平为 2。因此 C 值百分点(10.05/2)100%97.5%。同时，根据 EP-15A 提供的表格查出 C 值，在本次验证中，C 值为 27.49。3)计算出 verification value。其中 total 表示该项目的 1/4 CLIA88 总误差。4)如果 Stotal 小于 verification value，表明本次验证得到的批间精密度与1/2 CLIA88 总误差之间的差异无统计学意义，仪器可以继续使用；反之，则认为分析系统的 批间精密度不满足临床要求，需要联系生产厂家查找可能的原因。2.正确度 1.实验方案：根据卫生临检中

23、心室间质评结果对血细胞分析项目进行正确度评估，成绩在 80%以上 者即为验证通过。而没有参加室间质评的仪器，至少使用 10 份检测结果在参考区间内的新鲜血样本，每份样本检测两次，计算 20 次以上检测结果的均值，以参加室间质量评价 成绩优良的仪器检测结果为标准，计算偏倚。2.结果符合相关标准。3.线性范围 1.实验方案 选取一份接近预期上限的高值全血样本(H)，分别按 100%、80%、60%、40%、20%、10%、0%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定 3 次，计算均值。以理论浓度为纵坐标，实测浓 度为横坐标。由统计学计算出 R2 和回归方程式 Y=aX+b。4.4.3.2 要求：a 值在

24、 10.05 范围内，相关系数 r0.975。4.4.2.2 结果符合相关标准。3.线性范围 1.实验方案 第 6 页6共 17学 海 无 涯 选取一份接近预期上限的高值全血样本(H)，分别按 100%、80%、60%、40%、20%、10%、0%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定 3 次，计算均值。以理论浓度为纵坐标，实测浓 度为横坐标。由统计学计算出 R2 和回归方程式 Y=aX+b。4.4.3.2 要求：a 值在 10.05 范围内，相关系数 r0.975。4.参考区间 1.人群来源 选择身体健康体检者 20 例，男女各半，无任何系统重大疾病史，目前无主观不适。抽取上述人群的空腹静脉血液

25、，按照标准操作程序进行相关项目的检测。2.结果分析判断 规定小于或等于 2 份标本结果超出生物学参考区间，即为验证通过。或 R=测定结果 在参考范围内的例数/总测定例数90%即合格。3.生物学参考区间评审每年一次。如更改检验程序(如在检测方法、仪器、试剂等 出现变更)或检验前程序，也应对生物学参考区间进行评审。再者，如在检验程序的执行 过程中出现生物学参考区间不适用于实验室所服务的被检测人群的情况，也应对生物学参 考区间进行评审。5.可报告区间 结合临床要求，其线性范围可以满足临床的需求，因此可报告区间即为线性范围。大 于或小于上述范围时，可用手工法或涂片染色镜检验证，以镜检结果报告或以大于或

26、小于 线性值报告。6.携带污染率 1.实验方案 取高浓度血液样本，混合均匀后连续测定三次，测定值分别为 H1、H2、H3；再取低 浓度血液样本，连续测定 3 次，测定值分别为 L1、L2、L3。按下列公式计算携带污染率。2.要求 结果与厂家性能要求或其它性能标准比较以判断是否可接受。4.4.7 仪器分类与手工分类比对 1.实验方案：取 20 位仪器分类未见明显异常报警之患者样本，每位患者分别用于 参考方法和仪器法检测，其中参考方法为人工染色显微镜分析，每份标本推两张血涂片(A 片和 B 片)，由两位资深检验人员对每张血涂片分析 200 个细胞。其中一位使用血涂片 A，另一位使用 B 片，每份样

27、本的人工分类结果取平均值。2.判定方法：将仪器法测量结果与人工分析的结果比较，计算两种方法的偏倚，偏 倚=仪器测定值-显微镜计数值/显微镜计数值*100%，其差值在生物学变异允许范围内 即可。8.不同吸样模式的结果可比性 1.实验方案 验证方法：每次校准后，取 5 份临床样本分别使用不同模式进行检测，每份样本各检测 2 次，分别计算两种模式下检测结果均值间的相对差异。自动均值手动均值 相对偏差=100%自动均值 2.要求：结果与厂家性能要求或其它性能标准比较以判断是否可接受。9.实验室内结果的可比性 1.实验方案 1.新仪器使用前，配套检测系统至少使用 20 份临床标本(浓度分布符合相关标准)

28、，每份样本分别使用临床实验室内部规范操作检测系统和被比对仪器进行检测，以内部规范第 7 页7共 17学 海 无 涯 操作检测系统的测定结果为标准，计算相对偏差，每个检测项目的相对偏差符合标准的比 例应80%。2.新仪器使用前，非配套检测系统按 EP9-A 文件与配套检测系统进行比对，至 少使用 40 份临床样本(浓度选择符合相关标准)，计算相对偏差，每个检测项目的相对偏 差符合标准的比例应80%。3.常规检测仪器使用过程中，至少使用 20 份临床样本(浓度选择符合相关标准)定期进行一次结果比对，每个检测项目的相对偏差符合标准的比例应80%。2.以下情况，可按 WS/T407 的方法和要求进行比

29、对：如室内质控结果有漂移趋势时、室间质评结果不合格，采取纠正措施后、更换重要部 件或重大维修后、软件程序变更后、临床医生对结果的可比性有疑问时、患者投诉对结果 可比性有疑问(需要确认时)、需要提高周期性比对频率时。3.结果判定：结果符合相关标准。5.5.临临检检（凝（凝血血）精密度(批内、批间精密度)、正确度、携带污染率、线性范围（可能只适用几个项目，如纤维蛋白原等）、可报告区间、参考区间，必要时，还要考虑干扰和实验室内结果的比 对等。1.精密度、正确度、可报告区间、参考区间 可参考血常规的做法。4.5.2 线性范围（可参考）1.实验方案 选取一份接近预期上限的高值(FIB)全血样本(H)，分

30、别按 100%、80%、60%、40%、20%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定 3 次，计算均值。将实测值与理论值作比较(偏离 应小于 10%)，计算 y=ax+b，验证线性范围。2.要求：a 值在 10.05 范围内，相关系数 r0.975，则判断为线性范围验证通 过。3.携带污染率 1.实验方案（可参考）高值样本对低值样本的污染：将低值样本架 1 和 3 的位置，高值样本置于 2 位置，每个样本分别测定 3 次，记录结果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。计算：低值样本对高值样本的污染：将高值样本置样本架 1 和 3 位置，低值样本置于 2 位置，每个样本分别测定 3

31、 次，记录结果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。计算：2.要求：CV 符合厂家提供的标准或相关的性能标准。4.干扰试验（可参考）1.实验方案：使用溶血样本、黄疸样本及脂血样本，按一定比例加入正常混合血浆，以原空白混合血浆作为空白对照，分别测定 PT、APTT、FIB，每个样本重复检测两次取均 值，计算偏离值，应10%。2.要求：结果符合厂家标准或相关性能标准。5.实验室内结果的比对 1.实验方案 1.新仪器使用前，配套检测系统至少使用 20 份临床标本(包含正常和异常结果标 第 8 页8共 17第 9 页9共 17学 海 无 涯 本)，每份样本分别使用临床实验室内部规范操

32、作检测系统和被比对仪器进行检测，以内 部规范操作检测系统的测定结果为标准，计算相对偏差，每个检测项目的相对偏差符合标 准的比例应80%。2.新仪器使用前，非配套检测系统按 EP9-A 文件与配套检测系统进行比对，至 少使用 40 份临床样本(包含正常和异常结果标本)，计算相对偏差，每个检测项目的相对 偏差符合标准的比例应80%。3.常规检测仪器使用过程中，至少使用 20 份临床样本(包含正常和异常结果标本)定期进行一次结果比对，每个检测项目的相对偏差符合标准的比例应80%。4.以下情况，需要进行比对：如室内质控结果有漂移趋势时、室间质评结果不合格，采取纠正措施后、更换重要部 件或重大维修后、软

33、件程序变更后、临床医生对结果的可比性有疑问时、患者投诉对结果 可比性有疑问(需要确认时)、需要提高周期性比对频率时。6.6.体体液液 尿液分析仪及试带主要对性能(正确度、精密度、参考区间等)进行评价，必要时，还 要考虑不同方法的比较，如与镜检的比较。尿干化学的判定标准和室内质控的判定标准类 似。PH 和比重的项目，可参考说明书中提到要求。1.精密度 1.批内精密度 按常规方法连续检测 20 次尿液质控品(阴性和阳性)，检测结果相差同方向不超过一 个级别，但是阴性结果不能检测成阳性，阳性结果不能检测呈阴性。2.批间精密度 选择室内质控作为衡量批间精密度的依据。每天室内质控品按照常规标本的方法一样

34、 测定，连续收集同一批号室内质控品某一时间段(至少 20 天)的室内质控数据。检测结果 相差同方向不超过一个级别，但是阴性结果不能检测成阳性，阳性结果不能检测呈阴性。4.6.2 正确度 根据卫生部临检中心的室间质评成绩，成绩在 80%以上判定为通过。4.6.3 参考区间 1.入选参考区间健康人群的标准 要求近 1 个月无服药史及发热，无泌尿系统疾病、高血压、糖尿病、肝炎、风湿等全 身性疾病，无泌尿系统疾病的家族史、泌尿道外科手术史及泌尿道结石史，无浮肿的现象，女性在非月经期内。2.判断标准：计算 95%分位数的结果。R=测定结果在参考区间范围内的例数/总测定 例数95%即合格。7.7.PCR

35、PCR HBV-DNA 定量项目（可采用对数参与计算）需要验证的参数包括：精密度(批内、批间)、正确度、线性范围、可报告区间、参考范围。定性检测项目验证内容至少应包括检出限及 符合率等。1.精密度 1.批内精密度 1.样本来源：高浓度及低浓度的混合的新鲜临床标本。2.实验方法：质控结果在控时，将高低值两个样本在同一批次内分别测定 20 次，同时进行质控品的测定，并计算均值、标准差和批内精密度(%)。3.结果判断 本项目的批内精密度实验 CV5%（请确认），则认为验证通过。4.7.1.2 批间精密度 4.7.1.2.1 样本来源：高浓度及低浓度的混合的新鲜临床标本。第 10 页10 共 17学

36、海 无 涯 2.实验方法：取高、低值两个样本，与病人标本一同进行测定 20 次，同时进行 质控品的测定并计算均值、标准差和批内精密度(%)。3.结果判断 本项目的批间精密度实验 CV8%（请确认），则认为符合要求，可以进行常规检测。4.7.2 正确度 根据卫生临检中心室间质评成绩（可以是最近几年的成绩）对 HBV-DNA 定量测定进行 正确度验证，成绩在 80%者即为验证通过。3.线性范围 1.样本来源：已知浓度的病人标本，浓度收集接近线性范围上限。实验方法：方法 1：将病人血清用灭菌蒸馏水稀释为 5 个浓度后，分别将每个稀释度检测 2 次，计算线性回归系数 R2。稀释方案：样本 1:20l

37、血清与 180l 蒸馏水混匀。样本 2:20l 样本 1 与 180l 蒸馏水混匀。样本 3:20l 样本 2 与 180l 蒸馏水混匀；样本 4:20l 样本 3 与 180l 蒸馏水混匀。样本 5:20l 样本 4 与 180l 蒸馏水混匀。方法 2：收集接近线性范围高限病人血清混合，用已检测无扩增的阴性血清稀释 5 个 浓度（如 10、100、1000），分别将每个稀释度检测 2 次，取其对数值计算线性回归方 程 y=ax+b 及相关系数 R2。2.结果判断 计算所得线性回归系数 R295%之间，认为线性范围验证通过。4.7.4 可报告区间 结合临床要求，该项目线性范围可以满足临床需要，

38、因此线性范围即为可报告区间（请 确认）。5.参考区间 1.实验方法：样本选入原则为健康体检者中无 HBV 感染、肝功能、B 超等正常者 20人，其中男女各 10 人，取血清进行 HBV-DNA 测定，同时进行质控品的测定。4.7.5.2 结果判断 规定小于或等于 1 份标本结果超出参考区间，即为验证通过。4.84.8 微微生物生物-人人员员比比对对 选取 20 份标本(包括革兰阳性、革兰阴性)，先由实验室经验丰富的操作人员进行试 验，以其实验结果作为参照，再由从事该项目检测的人员对标本进行操作，将各自结果与 参照结果进行比对，计算符合率。9.9.微微生物生物-细细菌菌鉴鉴定定 1.符合率 以公

39、认的标准菌株按日常操作上机鉴定，比较鉴定的百分率及生化反应的符合率。试 验结果和预期结果完全符合；要求鉴定菌种正确，生化反应不符合项数不超过一项。4.9.2 重复性 采用公认的标准菌株及卫生部质评菌株，对同一株细菌在不同工作日进行上机鉴定，比较两次鉴定结果的鉴定百分率及生化反应的符合率。要求两次鉴定完全相同；差异生化 反应项数不多于一项。10.10.微微生生物物-药药敏敏试试验验(K-B 法法)可采用室内质控的数据。1.符合率 以公认的标准菌株按日常操作方法操作，比较药敏纸片的抑菌圈直径大小的差异性。第 11 页11 共 17学 海 无 涯 4.10.2 重复性 采用公认的标准菌株，对同一株细

40、菌在不同工作日进行药敏试验，比较两次鉴定结果 的鉴定百分率及生化反应的符合率。11.11.微微生生物物-血血培培养养(仪仪器器法法)1.假阴性率 对血培养系统阴性瓶盲转血平板，任何细菌生长均视为假阴性，统计分析假阴性结果 占总送检血培养数的百分比。全自动血培养分析系统性能验证分析方法：季度回顾分析全 自动血培养分析系统的假阴性率和假阳性率。2.假阳性率 对血培养系统阳性瓶镜检未见细菌，转转血平板和巧克力平板培养一周后无任何细菌 生长均视为假阳性任何细菌生长均视为假阴性，统计分析假阳性结果占总送检血培养数的 百分比。全自动血培养分析系统性能验证分析方法：季度回顾分析全自动血培养分析系统的假 阴性

41、率和假阳性率。3.报阳时间 用一个或多个微生物调制菌悬液浓度为 101CFU/ml，接种于各种血培养瓶中模拟常规 操作上机测定，观察血培养瓶报阳时间是否适当(72h)。将不同微生物接种在不同的培 养瓶内，要求所有被测微生物在参考时间内呈阳性。同时进行验证试验：转钟相应的平板 培养基，有相应的微生物生长说明质量有效；无相应微生物生长必须重复试验，检查操作 是否有误、培养瓶是否在有效期内；如果重复试验仍未通过，立即停用培养瓶并寻找原因。做好记录，通知供应商或或退回培养瓶。12.12.应应用用说说明明中中的的提提到到的的性性能能验验证证（节节选选）1.分子诊断领域 1.定量检测方法和程序的分析性能验

42、证内容至少应包括正确度、精密度、可报告 区间等。定性检测项目验证内容至少应包括检出限及符合率等。验证结果应经过授权人审 核。2.通过与其他实验室（如已获认可的实验室、使用相同检测方法的实验室、使用 配套系统的实验室）比对的方式确定检验结果的可接受性时，应满足如下要求：a.规定比对实验室的选择原则；b.样品数量：至少 5 份，包括正常和异常水平；c.频率：至少每年 2 次；d.判定标准：应有80%的结果满足要求。3.实验室应对新批号或同一批号不同货运号的试剂和关键耗材进行验收，验收试 验至少应包括：a.外观检查：肉眼可看出的，如包装完整性、有效期等；b.性能验证：通过实验才能判断的，如试剂的核酸

43、提取效率和核酸扩增效率、试 剂的批间差异、关键耗材的抑制物等：试剂性能验证记录应能反映该批试剂的核酸提取效率和核酸扩增效率。一般情况下，临床实验室采用新批号试剂或关键耗材检测 5 份过去用旧试剂或关键耗材检测过的患者样 品进行验证，符合附录 A.6 要求即可视为满足要求。但当实验室怀疑提取试剂有质量问题 时，可采用凝胶电泳试验比较核酸提取物与核酸标准物确认核酸片段提取的完整性、260nm 紫外波长测定确认核酸提取的产率、260nm/280nm 比值确认核酸提取的纯度。核酸扩增效 率可通过计算标准曲线的斜率（slope）获得，实验室可参照供应商提供的斜率范围来评 价该批试剂的符合性。用于定性检验

44、的试剂，选择阴性和弱阳性的样品进行试剂批号验证。第 12 页12 共 17学 海 无 涯 用于定量检验的试剂，应进行新旧试剂批间的差异验证，方法和要求参照附录 A.6 要 求。耗材的抑制物验收：对关键耗材应检测是否存在核酸扩增的抑制物，方法和要求参照 附录 A.6 要求。4.实验室使用两套及以上检测系统检测同一项目时，应有比对数据表明其检测结 果的一致性，比对频次每年至少 2 次，每次不少于 20 份样品，浓度水平覆盖测量范围；比对结果的系统偏倚应符合附录 A.4 的要求。使用不同参考区间的检测系统间不宜进行比对。比对记录应由实验室负责人审核并签字，并应保留至少 2 年。分分子子诊诊断断项项目

45、目分分析析性能性能标标准准 A.1 应不低于国家标准、行业标准、地方法规要求。A.2 自建检测系统不精密度要求：以能力验证/室间质评评价界限（靶值 0.4 对数值）作为允许总误差（TEa），重复性精密度3/5TEa；中间精密度4/5TEa。A.3 设备故障修复后，分析系统比对 5 份样品，覆盖测量区间，至少 4 份样品测量结 果偏倚 7.5%。A.4 实验室内分析系统定期比对：样品数 n20，浓度应覆盖测量区间，计算回归方 程，系统误差应7.5%。A.5 留样再测判断标准：按照项目稳定性要求选取最长期限样品，5 个样品，覆盖测 量区间，至少 4 个样品测量结果偏倚7.5%。A.6 试剂批间差异

46、、耗材的抑制物的验收合格判断标准：选取 5 个旧批号检测过的样品，覆盖测量区间（包括阴性、临界值、低值、中值和高值），至少 4 个样品测量结果偏 倚7.5%，其中阴性和临界值样品必须符合预期。A.7 没有标准和室间质评要求时，实验室间结果比对合格标准可依据制造商声明的性 能标准而制定。2.2.临临床床化化学学领领域域 使用配套分析系统时，可使用制造商的溯源性文件，并制定适宜的正确度验证计划；使用非配套分析系统时，实验室应采用有证参考物质、正确度控制品等进行正确度验证或 与经确认的参考方法（参考实验室）进行结果比对以证明实验室检验结果的正确度。如以上方式无法实现，可通过以下方式提供实验室检测结果

47、可信度的证明：参加适宜 的能力验证/室间质评，且在最近一个完整的周期内成绩合格；与使用相同检测方法的已 获认可的实验室、或与使用配套分析系统的实验室进行比对，结果满意。设备故障修复后，应首先分析故障原因，如果设备故障影响了分析性能，应通过以下 合适的方式进行相关的检测、验证：a.可校准的项目实施校准或校准验证；b.质控物检测结果在允许范围内；c.与其他仪器的检测结果比较，偏差符合附录 A.3 的要求；d.使用留样再测结果进行判断，偏差符合附录 A.5 的要求。4.12.2.1 检验程序验证 检验方法和程序的分析性能验证内容至少应包括正确度、精密度和可报告区间。4.12.2.2 检验程序的确认

48、如果使用内部程序，如自建检测系统，应有程序评估并确认正确度、精密度、可报告 区间、参考区间等分析性能符合预期用途。4.12.2.3 生物学参考区间或临床决定值 参考区间评审内容应包括：参考区间来源、检测系统一致性、参考人群适用性等，评 审应有临床医生参加。临床需要时，宜根据性别、年龄等划分参考区间。如果建立参考区第 13 页13 共 17学 海 无 涯 间，样品数量应不少于 120 例，若分组，每组的样品数量应不少于 120 例。验证参考区间时，每组的样品数量应不少于 20 例。4.12.2.4 替代方案 对没有开展能力验证/室间质评的检验项目，应通过与其他实验室（如已获认可的实 验室、使用相

49、同检测方法的实验室、使用配套系统的实验室）比对的方式，判断检验结果 的可接受性，并应满足如下要求：a.规定比对实验室的选择原则；b.样品数量：至少 5 份，包括正常和异常水平；c.频率：至少每年 2 次；d.判定标准：应有80%的结果符合要求。4.12.2.5 检验结果可比性 实验室用两套及以上检测系统检测同一项目时，应有比对数据表明其检测结果的一致 性，实验方案可参考中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 407-2012医疗机构内定量检验 结果的可比性验证指南，或比对频次每年至少 1 次，样品数量不少于 20，浓度水平应覆 盖测量范围；比对结果的系统偏倚应符合附录 A.1 或 A.4 的要求

50、。比对结果不一致时，应分析原因，并采取必要的纠正指施，及评估纠正指施的有效性。使用不同参考区间的检测系统间不宜进行结果比对。比对记录应由实验室负责人审核并签字，并应保留至少 2 年。临临床床化化学学检检验验分分析析性能性能要要求求 A.1 适用时，性能指标应不低于国家标准、行业标准、或地方法规的要求，如中华人 民共和国卫生行业标准 WS/T 403-2012 A.2 检测系统不精密度要求：以能力验证/室间质评评价界限作为允许总误差（TEa），重复性精密度1/4TEa；中间（室内）精密度1/3TEa；或小于规定的不精密度。A.3 实验室内分析系统间不定期比对（如设备故障修复后）要求：样品数 n5