艾滋病检测原理和技术规范课件-PPT.ppt

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1、艾滋病检测原理和技术规范课件一、艾滋病与艾滋病病毒一、艾滋病与艾滋病病毒（有（有（有（有A A A AE E E E多个亚型）多个亚型）多个亚型）多个亚型）与一种感染与一种感染与一种感染与一种感染灰身白脸猴灰身白脸猴灰身白脸猴灰身白脸猴的猴免疫缺陷病毒（的猴免疫缺陷病毒（的猴免疫缺陷病毒（的猴免疫缺陷病毒（SIVSIV）相似。相似。相似。相似。HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2Human immunodeficiency virus HIV（有（有（有（有A A A AJ J J J，OO1 1 1 1OO4 4 4 4 多个亚型）多个亚型）多个亚

2、型）多个亚型）与一种感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（与一种感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（与一种感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（与一种感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIVSIV）相似。相似。相似。相似。艾滋病病毒艾滋病病毒感染后，可严重破坏人体的免疫系统，使人体丧感染后，可严重破坏人体的免疫系统，使人体丧失抵御各种疾病的能力，失抵御各种疾病的能力，有利于各种病原体的侵入，有利于各种病原体的侵入，从而导致各从而导致各种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤，最终导致死亡，病死种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤，最终导致死亡，病死率可达率可达100100。HIV-1 MHIV-1 M组组组组HIV-1 OHIV-

3、1 O组组组组HIV-2HIV-2喀麦隆、加蓬喀麦隆、加蓬HIVHIV型别和亚型的型别和亚型的分类进化与地区分布：分类进化与地区分布：西非、印度西非、印度HIVHIV基因亚型与感染途径的关系基因亚型与感染途径的关系艾滋病从感染到发病的一般过程艾滋病从感染到发病的一般过程大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点二、艾滋病检测的原理及方法二、艾滋病检测的原理及方法各种检测技术为艾滋病防治工作各种检测技术为艾滋病防治工作提供广泛的技术支持平台提供广泛的技术支持平台艾滋病艾滋病实验诊

4、断方法实验诊断方法各种诊断试剂特性各种诊断试剂特性硒标法硒标法金标法金标法HIV抗体筛查试验抗体筛查试验明胶颗粒凝集试验明胶颗粒凝集试验（Particle agglutination testParticle agglutination test，PAPA）PAPA的操作和结果判断的操作和结果判断5 5 450/630nm下测定OD值混匀，加盖，37温育 洗板3 3 加入底物第二次特异性结合第二次特异性结合4 4 加入终止液1 1 加入样品 洗板2 2 加入酶标记物 加盖，37温育 加盖，37温育第一次特异性结合第一次特异性结合酶联免疫分析酶联免疫分析 ELISAELISA（双抗原夹心、两步法

5、）快速法可否单独使用？快速法可否单独使用？n 全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范（20042004版）：将版）：将PAPA、dot-dot-EIAEIA、胶体硒法纳入快速检测规范方法，因此可以使用。、胶体硒法纳入快速检测规范方法，因此可以使用。n 有研究指出：有研究指出：n 任何一种快速试剂可以筛查出任何一种快速试剂可以筛查出99%99%以上的阴性样本；以上的阴性样本；n 两种快速试剂均为阳性时，可以筛查出两种快速试剂均为阳性时，可以筛查出98%98%以上的阳性以上的阳性样本；样本；n 两种快速试剂结果不一致时，可用两种快速试剂结果不一致时，可用ELISAELISA复检；复检；n 单

6、独使用或两种同时使用时，特异性差别无显著意义。单独使用或两种同时使用时，特异性差别无显著意义。针对各种病毒蛋白的特异抗体针对各种病毒蛋白的特异抗体针对各种病毒蛋白的特异抗体针对各种病毒蛋白的特异抗体 区分区分区分区分ELISAELISAELISAELISA真阳性与假阳性真阳性与假阳性真阳性与假阳性真阳性与假阳性 检测检测检测检测HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1和和和和HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2HIV抗体确证试验抗体确证试验Western Blot 免疫印迹法免疫印迹法HIVHIV的主要基因及其产物的主要基因及其产物 （HIVHIV标志物）标志物）标志物）标志物）ss-RN

7、Ass-RNA全自动免疫印迹仪全自动免疫印迹仪HIVHIV抗体阳性诊断标准：抗体阳性诊断标准：2 2条条env env（gp160/gp120+gp41gp160/gp120+gp41）1 1条条env+p24env+p24p55p55p66p66p31p31p51p51gp120gp120gp160gp160gp41gp41p17p17p24p24膜蛋白膜蛋白（env）核蛋白核蛋白（gag）逆转录酶逆转录酶（pol）筛查试验：筛查试验：诊断出阴性样本，诊断出阴性样本，诊断出阴性样本，诊断出阴性样本，并为阳性并为阳性并为阳性并为阳性/可疑样本排除非特异条带。可疑样本排除非特异条带。可疑样本排除

8、非特异条带。可疑样本排除非特异条带。复检复检1 1（试剂（试剂A A）：）：对阳性对阳性对阳性对阳性/可疑样本排除操作误差。可疑样本排除操作误差。可疑样本排除操作误差。可疑样本排除操作误差。复检复检2 2（试剂（试剂B B）：）：对阳性对阳性对阳性对阳性/可疑样本排除试剂误差。可疑样本排除试剂误差。可疑样本排除试剂误差。可疑样本排除试剂误差。确证试验：确证试验：诊断出阳性样本。诊断出阳性样本。诊断出阳性样本。诊断出阳性样本。筛查试验和确证试验的作用筛查试验和确证试验的作用HIV/AIDSHIV/AIDS 诊断标准诊断标准诊断标准诊断标准 （GBGB 16000-1995 16000-1995

9、16000-1995 16000-1995）HIV！HIV？HIVHIV感染母亲所生婴儿：感染母亲所生婴儿：分别于分别于1212个月、个月、1818个月追踪检测个月追踪检测阴性者为阴性，阴性者为阴性，1818个月仍阳性者为阳性。个月仍阳性者为阳性。三、艾滋病检测技术规范三、艾滋病检测技术规范主要内容：主要内容：样品采集和处理样品采集和处理样品采集和处理样品采集和处理 检测方法检测方法检测方法检测方法 （HIVHIVHIVHIV抗体、病毒核酸、抗体、病毒核酸、抗体、病毒核酸、抗体、病毒核酸、病毒载量、病毒载量、病毒载量、病毒载量、CD4CD4CD4CD4、HIVHIVHIVHIV抗原检测）抗原检

10、测）抗原检测）抗原检测）安全防护、职业暴露安全防护、职业暴露安全防护、职业暴露安全防护、职业暴露 质量管理质量管理质量管理质量管理 （质量保证、质量控制、质量评价）（质量保证、质量控制、质量评价）（质量保证、质量控制、质量评价）（质量保证、质量控制、质量评价）实验室质量考评实验室质量考评实验室质量考评实验室质量考评 HIVHIVHIVHIV诊断试剂质量评估诊断试剂质量评估诊断试剂质量评估诊断试剂质量评估筛查试验筛查试验（试剂（试剂A A）阳性可疑阳性可疑均阴性均阴性均阴性均阴性均阳性均阳性阴阴阴阴 性性性性重复检测（试剂重复检测（试剂A+BA+B）阴阴阴阴 性性性性阳阳 性性确证试验确证试验筛

11、查实验室筛查实验室筛查实验室筛查实验室一阴一阳一阴一阳确证实验室确证实验室确证实验室确证实验室复核检测复核检测（试剂（试剂A/B/CA/B/C）阳性可疑阳性可疑阴阴阴阴 性性性性筛查报告筛查报告（阴性）（阴性）确认报告确认报告（阴性）（阴性）确认报告确认报告确认报告确认报告（阳性）（阳性）（阳性）（阳性）HIVHIV抗体检测结果处理规范抗体检测结果处理规范HIVHIV待确证样品待确证样品待确证样品待确证样品HIVHIV阳性确证报告原件阳性确证报告原件阳性确证报告原件阳性确证报告原件感染者感染者感染者感染者确认报告原件确认报告原件确认报告原件确认报告原件确认报告复印件备案确认报告复印件备案确认报

12、告复印件备案确认报告复印件备案筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位确证实验室确证实验室确证实验室确证实验室筛查实验室筛查实验室筛查实验室筛查实验室艾滋病样本确证、报告流程：艾滋病样本确证、报告流程：认真填写各类表格（最好能打印），及时上报。认真填写各类表格（最好能打印），及时上报。各筛查实验室每月各筛查实验室每月5日前上报上月检测数据：日前上报上月检测数据：四、艾滋病检测的质量控制四、艾滋病检测的质量控制 行政支持行政支持行政支持行政支持 重视、投入、理解重视、投入、理解重视、投入、理解

13、重视、投入、理解 实验室规范化建设实验室规范化建设实验室规范化建设实验室规范化建设 规范、制度、程序规范、制度、程序规范、制度、程序规范、制度、程序 人员要求人员要求人员要求人员要求 资质条件、培训和轮训资质条件、培训和轮训资质条件、培训和轮训资质条件、培训和轮训质量保证（质量保证（质量保证（质量保证（QAQA）质量控制（质量控制（质量控制（质量控制（QCQC）室内质控室内质控室内质控室内质控 质控图的建立和应用质控图的建立和应用质控图的建立和应用质控图的建立和应用 检验期间核查检验期间核查检验期间核查检验期间核查 试剂对照、外部质控品对照、平行双样试剂对照、外部质控品对照、平行双样试剂对照、

14、外部质控品对照、平行双样试剂对照、外部质控品对照、平行双样 结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）可实时校验：样品、试剂、仪器、操作等环节。可实时校验：样品、试剂、仪器、操作等环节。质量评价（质量评价（质量评价（质量评价（EQAEQA）实验室室间质量考评实验室室间质量考评实验室室间质量考评实验室室间质量考评 建立各项规章制度和建立各项规章制度和建立各项规章制度和建立各项规章制度和操作程序，定期检查；操作程序，定期检查；操作程序，定期检

15、查；操作程序，定期检查；人员定期接受培训和人员定期接受培训和人员定期接受培训和人员定期接受培训和复训，培养良好的业复训，培养良好的业复训，培养良好的业复训，培养良好的业务素质；务素质；务素质；务素质；对对HIVHIV实验室的实验室的1010项基本要求项基本要求 仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；样品流转有序，记录详细，保存规范；样品流转有序，记录详细，保存规范；样品流转有序，记录详细，保存规范；样品流转有序，记录详细，保存规范；采用合格试剂，经常核查试剂

16、质量，正确保存和使用；采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；环境条件符合要求，有监控有记录；环境条件符合要求，有监控有记录；环境条件符合要求，有监控有记录；环境条件符合要求，有监控有记录；严格按照规范和试剂说明书操作；严格按照规范和试剂说明书操作；严格按照规范和试剂说明书操作；严格按照规范和试剂说明书操作；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；坚

17、持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。每个实验室必须配备至少每个实验室必须配备至少每个实验室必须配备至少每个实验室必须配备至少2 2 2 2种不同原理种不同原理种不同原理种不同原理/不同厂家的试剂，不同厂家的试剂，不同厂家的试剂，不同厂家的试剂，其中一种必须是其中一种必须

18、是其中一种必须是其中一种必须是ELISAELISAELISAELISA（第三代、双抗原夹心、两步法）。第三代、双抗原夹心、两步法）。第三代、双抗原夹心、两步法）。第三代、双抗原夹心、两步法）。第一次筛查试验推荐使用高敏感性的第一次筛查试验推荐使用高敏感性的第一次筛查试验推荐使用高敏感性的第一次筛查试验推荐使用高敏感性的ELISAELISAELISAELISA法，快速法可用法，快速法可用法，快速法可用法，快速法可用于应急试验或复核试验。于应急试验或复核试验。于应急试验或复核试验。于应急试验或复核试验。按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，

19、试剂按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂批批检报告。批批检报告。批批检报告。批批检报告。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。不同品牌、不同批号的试剂不能混

20、用（包括阳性对照）。不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。使用诊断试剂注意事项使用诊断试剂注意事项 严格按照说明书操作和判断。严格按照说明书操作和判断。严格按照说明书操作和判断。严格按照说明书操作和判断。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。试剂使用前室温平衡的重要性。试剂使用前室温平衡的重要性。试剂使用前室温平衡的重要性。试剂使用前室温平衡的重要性。正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。正确使用恒温设备（校准温度、

21、放置方式、放置位置）。正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。固定样品排列方式，固定对照品位置。固定样品排列方式，固定对照品位置。固定样品排列方式，固定对照品位置。固定样品排列方式，固定对照品位置。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。严格控制反应温度和时间。严格控制反应温度和时间。严格控制反应温度和时间。严格控制反应温度和时间。实验操作注意事项实验操作注意事项