(1)--乳酸脱氢酶及辅酶的作用生物化学.ppt

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1、乳酸脱氢酶及其辅酶的作用实验目的 1.掌握酶蛋白与辅酶的关系。2.掌握组织中酶蛋白及辅酶提取的方法。3.了解乳酸脱氢酶及同工酶的临床意义。背景知识-酶的构成1.单纯酶（simple enzyme）：仅含有肽链的酶称为单纯酶2.缀合酶（conjugated enzyme）：由酶蛋白和辅助因子共同构成的酶 3.辅助因子（cofactor）：分为辅酶和辅基 缀合酶酶蛋白：决定反应的特异性及催化机制 辅助因子：决定反应的性质和反应类型全酶辅酶或辅基转移的基团NAD+或NADP+氢原子和电子FMN或FAD氢原子和电子TPP醛基磷酸吡哆醛氨基辅酶A酰基生物素CO2四氢叶酸一碳单位甲基钴胺素/5-脱氧腺苷钴

2、胺素甲基/相邻碳原子上氢原子、烷基、羧基的互换背景知识-乳酸脱氢酶实验原理背景知识-乳酸脱氢酶 背景知识-乳酸脱氢酶同工同工酶（isozyme）：催化相同的化学反）：催化相同的化学反应，但，但酶蛋白的分子蛋白的分子结构、理化性构、理化性质和免疫学特点各不相同的一和免疫学特点各不相同的一组酶。背景知识-乳酸脱氢酶LDH同工酶红细胞白细胞血清骨骼肌心肌肺肾肝脾LDH14312270731443210LDH2444934.70243444425LDH3123320.95335121140LDH41611.7160512720LDH5005.7790120565人体各组织器官LDH同工酶谱（活性%）背

3、景知识-乳酸脱氢酶 实验原理乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）NADH+H+NAD+丙酮酸 COOHC=OCH3乳酸 COOHCHOHCH3kCN丙酮酸氰醇MBMBH2操作步骤-辅酶I溶液的制备 1/3大试管的肌肉匀浆沸水浴5min倒入研钵磨成细浆配平后离心3000rpm，5min收集上清 转入小试管辅酶操作步骤-乳酸脱氢酶蛋白提取法2小试管肌肉匀浆配平后离心3000rpm，8min收集上清置于一支大试管滤液即为酶蛋白提取液加半匙活性炭，充分混匀约3min操作步骤3.取三支试管，按下表加入试剂123乳酸脱氢酶蛋白提取液ml辅酶I提取液0.5%氰化钾溶液5%乳酸钠溶液（mL）0.01%亚甲兰溶液蒸馏水1-10滴0.55滴11110滴0.55滴-110滴0.55滴1摇匀液体石蜡8 滴8 滴8 滴酶蛋白辅酶I全 酶14 Page注意事项1.KCN为剧毒，切勿用嘴吸取，以免吸入口中。2.加入蒸馏水后各管摇匀，加入液体石蜡后切勿再摇。3.离心前，要配平感谢聆听