综合康复疗法对胫腓骨骨折术后患者骨折愈合速度的影响.doc
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1、综合康复疗法对胫腓骨骨折术后患者骨折愈合速度的影响3244态明显不同12,建立了两段法培养模式:第1阶段为黑素细胞纯化阶段,注意了3个关键点:真表皮别离.采用Displtte酶使真表皮在基底膜带处别离,用镊子小心撕取表皮,防止表皮沾染真皮成纤维细胞.差速贴壁法接种原代表皮细胞.角质形成细胞比黑素细胞贴壁慢,而且不宜在含血清普通培养基中生长,因此接种1h后大部分角质形成细胞尚未贴壁,黑素细胞大局部贴壁,此时更换为黑素细胞培养液,可以除去大局部尚未贴壁的角质形成细胞.在细胞传代时,利用胰蛋白酶差速消化法(黑素细胞贴壁没有角质形成细胞牢)去除角质形成细胞.经实验反复验证,经以上方法培养的细胞很纯,经
2、电镜观察该细胞含有黑素颗粒;L-Dopa染色阳性,获得黑素细胞纯度100%.第2阶段为优化扩增阶段.待黑素细胞纯化后,用不含TPA的培养基继续扩增传代,细胞形态由细的多分支状逐渐增宽变为梭形,生长速度减慢,细胞周期显示增殖减缓.该培养条件中所用添加剂ET.1是许多细胞的促分裂剂,可由角质形成细胞合成分泌,能促进黑素细胞分裂;bFGF体内多处存在,主要由成纤维细胞分泌,能明显促进含黑素细胞在内的多种细胞分裂增殖,其产品已在临床广泛应用.因此此时培养出的黑素细胞作为移植物更加平安.结论:先用含有TPA培养液纯化培养黑素细胞,然中国临床康复8卷第,72004.06-15出版后用不含TPA的培养液传代
3、培养,细胞形态逐渐变化,反映TPA对黑素细胞的致瘤影响逐渐消失,此时获得的黑素细胞更加平安.生长曲线,细胞周期,核型分析结果也印证了这个结论.因此本文建立的两段法培养出的黑素细胞更加适合临床移植应用,将促进白癜风等色素性皮肤病的治疗开展.(图14见插图171页)4参考文献1LemerAB,HalabanR,KlausSN,etalTransplantationofhumanmelanocytes.JInvestDermatol1987;89(3):219242OlssonMJ,JuhlinL.Long-termfollow-upofleucedermapatientstreatedwithtr
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