优化装液量实验课件.ppt

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1、实训报告实训报告实实 验验实验目的实验目的实验原理实验原理实验材料实验材料实验步骤实验步骤实验报告实验报告实验结论实验结论实验目的实验目的1.掌握配平板、斜面、种子培养基的制掌握配平板、斜面、种子培养基的制 备、灭菌、接种、划线、涂布培养的操备、灭菌、接种、划线、涂布培养的操作过程作过程2.掌握摇瓶发酵培养的操作原理及过程掌握摇瓶发酵培养的操作原理及过程3.进行优化装液量实验操作进行优化装液量实验操作4.掌握分光光度计的使用掌握分光光度计的使用5.掌握生长曲线的绘制掌握生长曲线的绘制实验原理实验原理welcome to use these PowerPoint templates,New Co

2、ntent design,10 years experience优化装液量优化装液量 在发酵过程中有多方面的限制因素，而在发酵过程中有多方面的限制因素，而溶氧溶氧往往往是最易成为控制因素。影响摇瓶的因素为往是最易成为控制因素。影响摇瓶的因素为摇瓶摇瓶装液量和摇瓶机的种类装液量和摇瓶机的种类。在摇瓶发酵时，装液量。在摇瓶发酵时，装液量越少，越少，传氧系数传氧系数越大。但是，由于装液量少，在越大。但是，由于装液量少，在发酵过程中增加发酵液的蒸发等，所以在摇瓶发发酵过程中增加发酵液的蒸发等，所以在摇瓶发酵时，需要对酵时，需要对摇瓶装液量摇瓶装液量进行研究，找出最佳状进行研究，找出最佳状液量。液量。实

3、验原理实验原理welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience分光光度计分光光度计分光光度计分光光度计的的基本原理基本原理是溶液中的物质在光的照是溶液中的物质在光的照射下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收射下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的的吸收光谱吸收光谱，因此当某，因此当某单色光单色光通过溶液时，其能通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质量就会被吸收而减弱，光能量减

4、弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合的浓度有一定的比例关系，也即符合比色比色原理原理比耳比耳定律定律 实验原理实验原理welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience生长曲线生长曲线将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫

5、生生长曲线长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。通过测定微生物的生长曲线，可了解各不同而有所改变。通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律。菌的生长规律。实验材料实验材料 固体培养基制备固体培养基制备1.培养皿、试管

6、、培养皿、试管、1ml、5ml、10ml的移液管、的移液管、玻璃棒、涂布器、烧杯、玻璃棒、涂布器、烧杯、250ml三角瓶、酒三角瓶、酒精灯、天平、牛角匙、精灯、天平、牛角匙、PH试纸、记号笔、试纸、记号笔、纱布、接种工具、高压灭菌锅、培养箱、显纱布、接种工具、高压灭菌锅、培养箱、显微镜等微镜等2.培养基培养基 LB培养基为酵母提取物培养基为酵母提取物1.5g、蛋白胨、蛋白胨3g、氯化钠、氯化钠3g、琼脂、琼脂4.5g、水、水250ml（补足到（补足到300）ml、pH 7.0。实验步骤实验步骤 （1）配制培养液）配制培养液按照培养基配方依次称取酵母提取物按照培养基配方依次称取酵母提取物1.5g

7、、蛋白胨、蛋白胨3g、氯化钠、氯化钠3g、琼脂、琼脂4.5g边加边搅拌，配制成培养液。边加边搅拌，配制成培养液。（2）调节）调节pH采用采用pH试纸测试，调节培养基的试纸测试，调节培养基的酸碱度酸碱度至至7.07.2。（3）分装）分装将培养基趁热分装到洁净的试管中将培养基趁热分装到洁净的试管中.培养基的高度约为培养基的高度约为试管高度的试管高度的15。注意不要污染试管口，用。注意不要污染试管口，用棉花棉花塞塞紧塞塞紧试管。试管。固体培养基固体培养基实验步骤实验步骤1、手心不烫手背烫，这是一个经验数据，、手心不烫手背烫，这是一个经验数据，此时的温度在此时的温度在45度左右，最适合倒皿。度左右，最

8、适合倒皿。2、连续倒多个皿，尤其是在冬天往往容易、连续倒多个皿，尤其是在冬天往往容易凝固，一旦凝固则需要再加热到较高温度才凝固，一旦凝固则需要再加热到较高温度才能溶化（玻璃体的特性）。建议此时能溶化（玻璃体的特性）。建议此时50度度 固体培养基固体培养基倒平板倒平板实验步骤实验步骤固体培养基固体培养基划线划线实验步骤实验步骤固体培养基固体培养基斜面种子斜面种子 （7）试管斜面）试管斜面 A贴标签贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位的位置。置。(若用记号笔标记则不需标

9、签若用记号笔标记则不需标签)。B点燃酒精灯。点燃酒精灯。C接种接种 用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。简述如下：上。操作必须按无菌操作法进行。简述如下：1)手持试管手持试管 斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)旋松管塞旋松管塞 先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。出。3)取接种环取接种环 4)拔管塞，试管口缓缓过火灭菌拔管塞，试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫切勿烧得过烫)。实验步骤实验步骤 5)接种环冷却接种环冷却 6)取菌

10、取菌 注意不要使接种环的部分碰到管注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。7)接种接种 底部向上部作底部向上部作“Z”形来回密集划形来回密集划线，切勿划破培养基。线，切勿划破培养基。8)塞管塞塞管塞 塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。以免试管在移动时纳入不洁空气。9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。棉花塞旋紧。固体培养基固体培养基斜面种子斜面种子实验步骤实验步骤 斜面接种时试管口朝上；斜面接种时试管口朝上；接种时试管口在酒精灯火焰处灭菌

11、。接种时试管口在酒精灯火焰处灭菌。使用前超净工作台开使用前超净工作台开15分钟紫外线分钟紫外线 注意开通风注意开通风 使用的器皿注意消毒使用的器皿注意消毒 操作时戴无菌手套或并用操作时戴无菌手套或并用75%酒精消毒酒精消毒 操作时尽量靠近酒精灯火焰操作时尽量靠近酒精灯火焰 缩短操作时间越短，暴露在空气中的时间缩短操作时间越短，暴露在空气中的时间越短，污染几率越小越短，污染几率越小 装量掌握在斜面顶端不超过试管或扁平长装量掌握在斜面顶端不超过试管或扁平长度的度的2/3注意事项注意事项斜面种子斜面种子实验步骤实验步骤 （1）配制培养液）配制培养液 按照培养基配方依次称酵母膏按照培养基配方依次称酵母

12、膏1.5g、蛋白胨、蛋白胨3g、氯化钠、氯化钠3g、水、水250ml（补足到（补足到300）ml、pH 7.0边加边搅拌，配制成培养液。边加边搅拌，配制成培养液。（2）调节）调节pH采用采用pH试纸测试，调节培养基的试纸测试，调节培养基的酸碱度酸碱度至至7.07.2。（3）分装）分装将培养基趁热分装到洁净的锥形瓶中将培养基趁热分装到洁净的锥形瓶中.不同装液量不同装液量（30mL、40mL、50mL、60mL、70mL）发酵培养）发酵培养基的配制（注意不要污染瓶口口，用纱布塞塞紧试管）。基的配制（注意不要污染瓶口口，用纱布塞塞紧试管）。液体培养基液体培养基实验步骤实验步骤（1）培养基营养成分较斜

13、面丰富，以确保一定菌体生长量；培养基营养成分较斜面丰富，以确保一定菌体生长量；能保持生长过程中能保持生长过程中pH稳定。稳定。（2）培养基装量适当，以保证良好的通气并与发酵罐通气）培养基装量适当，以保证良好的通气并与发酵罐通气条件相适应；参考装量为条件相适应；参考装量为40-50 ml/250 ml瓶，瓶，60-80 ml/500 ml瓶，瓶，90-110 ml/750 ml瓶，瓶，120-150 ml/1000 ml瓶；如果是厌氧培养，则装量应增加一倍以上；瓶；如果是厌氧培养，则装量应增加一倍以上；3)灭菌时要不要让冷凝水打湿或粘污培养基的瓶塞或纱布灭菌时要不要让冷凝水打湿或粘污培养基的瓶塞

14、或纱布上上4）注意摇床转速，转速越快，偏心距越大，通气越好。经注意摇床转速，转速越快，偏心距越大，通气越好。经常检查，皮带松弛时要紧一紧。常检查，皮带松弛时要紧一紧。5）注意摇床中心与边缘、上层与下层的温差注意摇床中心与边缘、上层与下层的温差 摇瓶种子摇瓶种子-注意事项注意事项实验报告实验报告welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience涂布分离单菌落的结果涂布分离单菌落的结果染菌分析染菌分析231空培养皿灭菌不彻底；超净台存在杂菌倒平板时，动作不迅速；搬动时，导致培养液洒落，污染

15、培养皿口；接种工具混用；没有在无菌范围内操作；衣服携带杂菌染菌原因染菌原因所接菌种含有杂菌实验报告装液量 (ml)培养液(ml)接种量(ml)5%OD值（平均值）PH值3028.51.50.6586.740382.00.6706.75047.52.50.6666.760573.00.6406.77066.53.50.6396.7摇瓶种子摇瓶种子优化装量优化装量初始初始ph7.0 调后调后ph7.4 1.记录实验结果，并选择出最佳装液记录实验结果，并选择出最佳装液数据分析数据分析ph值值 转速过快，导致不同装量的容氧量相同转速过快，导致不同装量的容氧量相同培养时间短，波动平缓培养时间短，波动平缓

16、Od值值时间00.511.522.533.5od值0.1010.1410.190.2640.3441.2080.7990.893PH7.277.77.57.27.16.77.4实验报告实验报告welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience大肠杆菌生长曲线数据分析数据分析1号号2号锥形瓶中的成分有所不同，号锥形瓶中的成分有所不同，配置条件有所差异，导致吸光度变配置条件有所差异，导致吸光度变化剧烈化剧烈进行实验的培养基接种量条件要进行实验的培养基接种量条件要相同相同实验结论实验结论结论结论优化装液量，保持条件一致的情况下，优化装液量，保持条件一致的情况下，菌种在菌种在40ml的培养液中生长状态最好。的培养液中生长状态最好。Thank you!