食品中大肠菌群的测定(优选)ppt课件.ppt
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1、火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去食品中大肠菌群测定(一)参考GB47893-2010火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去1、了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌群测定在食品卫生检验中的意义。2、练习并掌握大肠菌群的检验方法。一、目的火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去二、原理1、大肠菌群大肠菌群系指一群在大肠菌群系指一群在3737、2424小时能发酵乳小时能发酵乳糖产酸产气,需氧或
2、兼性厌氧的革兰氏阴性糖产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。无芽孢杆菌。火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属的亚属细菌组成。火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去该菌主要来源于该菌主要来源于人畜粪便人畜粪便,故以此作为粪便污染,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学指标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学意义。意义。它反映了食品是否被粪便污染,同时间接地
3、指出食品 它反映了食品是否被粪便污染,同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。是否有肠道致病菌污染的可能性。食品中大肠菌群数系以每 食品中大肠菌群数系以每1g 1g(或(或mL mL)检样内)检样内大肠菌群 大肠菌群近似可能数 近似可能数MPN MPN(themostprobablenumber-themostprobablenumber-简称 简称MPN MPN)表示)表示2、测定的意义火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去3、大肠杆菌的生物学特性基本形态基本形态 此菌为两端钝圆的短小杆菌,一般约 此菌为两端钝圆的
4、短小杆菌,一般约0.5-0.5-0.8m*1.0-3.0m 0.8m*1.0-3.0m,多单独存在或成双,但,多单独存在或成双,但不呈长链排列。约 不呈长链排列。约50%50%的菌株有周生鞭毛,的菌株有周生鞭毛,但多数只有 但多数只有1-4 1-4根,一般不超过 根,一般不超过10 10根,故菌体 根,故菌体动力弱。多数菌株有菌毛,有的有荚膜或微 动力弱。多数菌株有菌毛,有的有荚膜或微荚膜,不形成芽孢,对普通碱性染料着色良 荚膜,不形成芽孢,对普通碱性染料着色良好,革兰氏染色阴性。好,革兰氏染色阴性。火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被
5、褥勇敢地冲出去 在普通营养琼脂上有 在普通营养琼脂上有3 3中菌落形 中菌落形态:态:1 1)光滑型:菌落边缘整齐,)光滑型:菌落边缘整齐,表面有光泽、湿润、表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色,在生理盐水 光滑、呈灰色,在生理盐水中易分散;中易分散;2 2)粗糙型:菌落扁平、干涩、)粗糙型:菌落扁平、干涩、边缘不整齐,易 边缘不整齐,易 在生理盐水中自凝;在生理盐水中自凝;3 3)黏液型:常为含有荚膜的)黏液型:常为含有荚膜的菌株。菌株。培养特性:大肠杆菌合成代谢能力强,在含无机盐、铵盐、葡萄 大肠杆菌合成代谢能力强,在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为 糖的普通培养基上
6、生长良好。最适生长温度为37 37,在 在42-44 42-44 条件下仍能生长,生长温度范围 条件下仍能生长,生长温度范围15-46 15-46。火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去三、材料1、食品样品乳制品乳制品火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:设备和材料如下:恒温培养箱、恒温水浴箱、恒温培养箱、恒温水浴箱、振荡器、振荡器、无菌无菌吸管吸管或微量移液器
7、及吸头、或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶无菌锥形瓶、无无菌培养皿菌培养皿、菌落计数器菌落计数器等。等。3、仪器设备火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去月桂基硫酸盐胰蛋白胨(月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LSTLST)肉汤)肉汤、煌绿乳煌绿乳糖胆盐(糖胆盐(BGLBBGLB)肉汤、)肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)VRBA)、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液、1mol/L1mol/L氢氧化钠(氢氧化钠(NaOH)NaOH)、1mol/L1mol/L盐酸(盐酸(HCIHCI)。4、培养基和
8、试剂火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去第一法大肠菌群MPN计数法。第二法大肠菌群平板计数法。四、检验方法火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去10 10倍系列稀释 倍系列稀释 选择合适稀释度接种 选择合适稀释度接种LST LST肉汤管 肉汤管36 36 1 1.48h2h.48h2h产气 产气 不产气 不产气25g 25g检样 检样-225mL-225mL稀释液 稀释液大肠菌群阴性 大肠菌群阴性 BGLB BGLB肉汤 肉汤(361)(361)48h2
9、h 48h2h不产气 不产气大肠菌群阳性 大肠菌群阳性大肠菌群阴性 大肠菌群阴性产气 产气报告 报告大肠菌群MPN检验流程查 查MPN MPN表 表火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去 1、样品的稀释(11)固体和半固体样品固体和半固体样品u u称取 称取25g 25g样品,放入盛有 样品,放入盛有225ml 225ml磷酸盐缓冲液或生理 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,盐水的无菌均质杯内,8 8000r/min-10 000r/min-10000r/min 000r/min均质 均质1 1min-2min min-
10、2min,或放入盛有,或放入盛有225ml 225ml磷酸盐缓冲液或生理 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min-2 1min-2min min,制成,制成1:10 1:10的样品匀液。的样品匀液。第一法 大肠菌群MPN计数法火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去(2)液体样品 以无菌吸管吸取 以无菌吸管吸取25m 25mL L样品,置盛有 样品,置盛有225m 225mL L磷酸盐缓冲 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无 液或生理盐水的
11、无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分棍匀,制成 菌玻璃珠)中,充分棍匀,制成1:10 1:10的样品匀液。的样品匀液。(3 3)样品匀液的 样品匀液的pH pH值应在 值应在6.5-7.5 6.5-7.5之间,必要时分别 之间,必要时分别用 用1mol/L 1mol/L氢氧化钠(氢氧化钠(NaOH NaOH)或)或1mol/L 1mol/L盐酸(盐酸(HCI HCI)调节。)调节。火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被
12、褥勇敢地冲出去(44)用用1m1mLL无菌吸管或微量移液器吸取无菌吸管或微量移液器吸取1:101:10样样品匀液品匀液1m1mLL,沿管壁缓缓注入,沿管壁缓缓注入9m9mLL磷酸盐缓冲磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用11支支1m1mLL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1:1001:100的样品匀液。的样品匀液。火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去(55
13、)根据对样品污染状况的估计,按上述操作,)根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成依次制成1010倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释释11次,换用次,换用11支支1m1mLL无菌吸管或吸头。从制备无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过1515minmin。火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去每个样品,选择每个样品,选择33个个适宜的适宜的连续稀释度连续稀释度的样品匀液的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种(液体样品
14、可以选择原液),每个稀释度接种33管管月桂基硫酸盐胰蛋白胨月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LSTLST)肉汤)肉汤,每管接种,每管接种1m1mLL(如接种量超过(如接种量超过1m1mLL,则用双料,则用双料LSTLST肉汤)肉汤),363611培养培养24h24h22hh,观察倒管内是否有气泡产,观察倒管内是否有气泡产生,如未产气则继续培养至生,如未产气则继续培养至48h2h48h2h。2、初发酵试验火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性,产气者则进行复发酵试验。
15、火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去用接种环从所有用接种环从所有48h2h48h2h内发酵产气的内发酵产气的LSTLST肉汤管肉汤管中分别取培养物中分别取培养物ll环,移种于煌绿乳糖胆盐环,移种于煌绿乳糖胆盐(BGLBBGLB)肉汤管中,)肉汤管中,363611培养培养48h2h48h2h,观察,观察产气情况。产气者,计为大肠菌群阳性管。产气情况。产气者,计为大肠菌群阳性管。3、复发酵试验火灾袭来时要迅速疏散逃生,不可蜂拥而出或留恋财物,要当机立断,披上浸湿的衣服或裹上湿毛毯、湿被褥勇敢地冲出去根据大肠菌群阳性管数,检索根
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