微生物的实验室培养(1).ppt

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1、专题专题2 2微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题课题1 1微生物的实验室培养微生物的实验室培养.微生物的类群微生物的类群微微生生物物原核类原核类:真核类真核类非细胞类：非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌真菌：真菌：原生生物：原生生物：草履虫、变形虫等草履虫、变形虫等病毒、类病毒、朊病毒病毒、类病毒、朊病毒微生物的共同特点：微生物的共同特点：一一.微生物基础知识微生物基础知识1.1.细菌的形态细菌的形态细菌主要是以二分裂的方式细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）进行增殖（如右图）2

2、.2.细菌的繁殖细菌的繁殖3.3.细菌的菌落细菌的菌落.定义：定义：单个或者少数细菌在固体培养基上单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做体，叫做菌落菌落。.功能：功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以可以作为菌种鉴定的重要依据作为菌种鉴定的重要依据。几种菌落及其形态4.4.病毒的结构病毒的结构:由核酸和蛋白质构成。由核酸和蛋白质构成。病毒的结构病毒的结构吸附吸附吸附吸附注入注入注入注入合成合成合成合成释放释放释放释放组装组装组装组装5.

3、5.病毒的繁殖病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段，即：病毒的增殖一般可分五个阶段，即：吸附吸附注入核酸注入核酸合成核酸和蛋白质合成核酸和蛋白质组装组装释放释放6.6.病毒的营养方式病毒的营养方式：寄生：寄生微生物需要的大类营养要素物质是：微生物需要的大类营养要素物质是：.微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物质及功能1.1.碳源碳源 2.2.氮源氮源 3.3.无机盐无机盐 4.4.水水：凡是能为微生物提供所需碳元素的：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。营养物质。无机碳源：无机碳源：COCO2 2；NaHCONaHCO3 3等等有机碳源：有机碳源：糖类糖类、脂肪酸、花生、脂肪酸、花

4、生粉饼、石油等粉饼、石油等.概念概念.来源：来源：1.1.微生物的碳源微生物的碳源无机氮源：无机氮源：N N2 2、NHNH4 4+、NONO3 3-、NHNH3 3等。等。有机氮源：有机氮源：尿素、牛肉膏、尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供N N元素元素的营养物质。的营养物质。2.2.微生物的氮源微生物的氮源.概念：概念：.来源：来源：.培养基培养基 1.1.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、氮源氮源、无机盐无机盐等等营养物质，另营养物质，另外还需要满足微生物生长对外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊特殊

5、营养物质营养物质,如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等要求。等要求。1物理性质物理性质培养基分为：培养基分为：固体培养基、半固体培养基、固体培养基、半固体培养基、液体培养基液体培养基2、成分成分：天然培养基、合成培：天然培养基、合成培养基养基3、用途用途：选择培养基、鉴别培：选择培养基、鉴别培养基养基液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长backbackbackback半固体培养基：半固体培养基：(是否运动是否运动)固

6、体培养基：菌落固体培养基：菌落几种选择培养基几种选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基选择酵母菌、霉菌等真菌选择酵母菌、霉菌等真菌无氮培养基无氮培养基选择固氮菌（根瘤菌、圆褐固氮菌）选择固氮菌（根瘤菌、圆褐固氮菌）无碳培养基无碳培养基选择自养型微生物选择自养型微生物(硝化细菌硝化细菌)backbackbackback.无菌技术无菌技术无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。中，所有防止杂菌污染的方法。消毒定义：消毒定义：利用利用温和温和理化方法，杀死理化方法，杀死部分部分微微生物的过程，生物的过程，不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子。2.2

7、.2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 灭菌的定义：灭菌的定义：用用强烈强烈的理化方法消灭的理化方法消灭所有所有微生物，微生物，包括芽孢和孢子。包括芽孢和孢子。煮沸消毒法煮沸消毒法：100100煮沸煮沸5-6min5-6min。巴氏消毒法巴氏消毒法：70-7570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min。化学药剂消毒法化学药剂消毒法：用：用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。紫外线消毒紫外线消毒。.消毒的方法：消

8、毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌：干热灭菌：160-170 160-170 下加下加热热1-2h1-2h。高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min.15-30min.灭菌的方法：灭菌的方法：二二.实验操作实验操作(以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例).制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化4.4.灭菌灭菌:5 5.倒平板倒平板:.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法。微生物的接种的微生物的接

9、种的常用接种方法有常用接种方法有：4.4.菌种的保存菌种的保存接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。3.3.微生物的恒温培养微生物的恒温培养.长期保存：长期保存：甘油管藏法甘油管藏法.临时保藏（频繁使用）：临时保藏（频繁使用）：课堂检测课堂检测1 1、有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（、有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也

10、能提供能量D编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml2 2、右表是某微生物、右表是某微生物培养基成分，请据此培养基成分，请据此回答：回答：（1 1）右表培养基可）右表培养基可培养的微生物类型是培养的微生物类型是 。自养型微生物自养型微生物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2O O），该培养基可），该培养基可

11、用于培养用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是前，要进行的是 。（6 6）用于菌种鉴定，应该增加的成分是用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）2011河南高考河南高考有些细菌可分解原油，从而消除由原有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：解原油的菌株。回

12、答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以释液接种于以 为唯一碳源的为唯一碳源的固体培养基土，从功能上讲，该培养固体培养基土，从功能上讲，该培养基属于基属于 培养基。培养基。原油原油选择选择（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，采用的接种方法有两种，即即 和和 。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解能力的降解能力 。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法强强（4）通常情况下，在微生物培养）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌烧灭菌、和和 无菌无菌技术要求试验操作应在酒精灯附近技术要求试验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的进行，以避免周围环境中微生物的污染。污染。干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌