细胞培养技术实验3细胞培养用品的清洗、包装和消毒课件.ppt

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1、实验三实验三 细胞培养用品的清洗、包装和消毒细胞培养用品的清洗、包装和消毒一、实验目的一、实验目的1.掌掌握握细细胞胞培培养养常常用用实实验验器器材材的的清清洗洗要要领领、清洗步骤和注意事项。清洗步骤和注意事项。2.掌掌握握细细胞胞培培养养常常用用器器材材的的包包装装要要领领和和要要求。求。3.掌掌握握除除菌菌滤滤器器的的安安装装、使使用用和和拆拆除除方方法法及操作注意事项。及操作注意事项。二、实验原理二、实验原理离体条件下，有害物质直接同细胞接触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，达到不含任何残留物的要求。微生物污染是造

2、成细胞培养失败的主要原因，因此细胞培养用品在培养细胞前，要消毒或灭菌。对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。三、器材三、器材培养皿（培养皿（3）25mL培养瓶（培养瓶（2）100mL培养瓶（培养瓶（4）尖吸管（尖吸管（5）5mL或或10mL移液管移液管（3）血球计数板（血球计数板（1）青霉素小瓶（青霉素小瓶（3）盐水瓶（盐水瓶（1）离心管（离心管（2）100mL烧杯（烧杯（1）250mL烧杯（烧杯（1）50或或100mL玻玻璃璃注注射射器器1.玻璃器皿：玻璃器皿：三、器材三、器材2.金属器械：金属器械：解剖刀解剖刀（1）大号圆头镊（大号圆头镊（1）眼科剪（眼科剪（3）眼科

3、镊（眼科镊（3）100目金属筛网（目金属筛网（1）正压除菌滤器正压除菌滤器三、器材三、器材3.橡胶、塑料制品：橡胶、塑料制品：青霉素瓶塞（青霉素瓶塞（4）小橡皮吸头（小橡皮吸头（6）大橡皮吸头（大橡皮吸头（4）盐水瓶翻口塞（盐水瓶翻口塞（1）针头滤器（针头滤器（5）培养瓶盖（培养瓶盖（2小、小、4大）大）三、器材三、器材4.其它：其它：5mL一次性注射器（一次性注射器（5）金属饭盒（金属饭盒（1）记号笔记号笔纱布纱布 剪刀剪刀棉花棉花 棉绳棉绳牛皮纸牛皮纸 铝箔铝箔四、试剂和材料四、试剂和材料n5盐酸n清洁液（酸液）n0.5mol/LNaOHn0.5mol/LHCln三蒸水n75酒精五、操作五

4、、操作（一）玻璃器皿的清洗、包装和消毒（一）玻璃器皿的清洗、包装和消毒1玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤。一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤。1）浸浸泡泡 新新的的或或用用过过的的玻玻璃璃器器皿皿都都要要先先用用清清水水浸浸泡泡，软软化化和和溶溶解解附附着着物物。新新玻玻璃璃器器皿皿使使用用前前得得先先用用自自来来水水简简单单刷刷洗洗，晾晾干干或或烘烘干干（50）后后用用5盐盐酸酸浸浸泡泡过过夜夜，然然后后用用自自来来水水反反复复振振荡荡冲冲洗洗后后备备刷刷洗洗；用用过过的的玻玻璃璃器器皿皿用用后后应应立立即即浸入清水中备刷洗。浸入清水中备刷洗。2）刷

5、刷洗洗 将将浸浸泡泡后后的的玻玻璃璃器器皿皿放放到到洗洗涤涤剂剂水水中中，用用软软毛毛刷刷反反复复刷刷洗洗。不不要要留留死死角角，并并防防止止破破坏坏器器皿皿表表面面的的光光洁洁度度。将将刷刷洗洗干干净净的的玻玻璃璃器器皿皿洗洗净、晾干或烘干（净、晾干或烘干（50），备浸酸。），备浸酸。3）浸浸酸酸 浸浸酸酸是是将将上上述述器器皿皿浸浸泡泡到到清清洁洁液液中中，又又称称酸酸液液，通通过过酸酸液液的的强强氧氧化化作作用用清清除除器器皿皿表表面面的的可可能能残残留留物物质质。浸浸酸酸不不应应少少于于六六小小时时，一一般般过夜或更长。浸酸时放取器皿要小心。过夜或更长。浸酸时放取器皿要小心。4）冲洗）

6、冲洗 刷洗和浸酸后的器皿都必须用水刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复“注水倒空注水倒空”15次以上，最后用三蒸水次以上，最后用三蒸水浸洗浸洗23次，晾干或烘干（次，晾干或烘干（50）后备）后备包装用。包装用。2玻璃器皿的包装玻璃器皿的包装 包包装装材材料料常常用用牛牛皮皮纸纸、硫硫酸酸纸纸、棉棉布布、铝铝饭饭盒盒、较较大大培培养养皿皿、铝铝箔箔等等。小小的的培培养养器器皿皿用用牛牛皮皮纸纸包包装装后

7、后再再装装入入饭饭盒盒内内，较较大大的的器器皿皿可可以以进进行行局局部包扎。部包扎。3玻璃器皿的消毒玻璃器皿的消毒玻玻璃璃器器皿皿的的消消毒毒可可以以用用高高温温湿湿热热灭灭菌菌（2030min）和和高高温温干干热热消消毒毒（160保保持持90120分钟）。分钟）。（二）橡胶制品的清洗、包装与消毒（二）橡胶制品的清洗、包装与消毒1橡胶制品的清洗橡胶制品的清洗橡橡胶胶制制品品洗洗涤涤方方法法：浸浸泡泡后后，2%NaOH煮煮沸沸15分分钟钟，流流水水冲冲洗洗，1%HCl煮煮沸沸15分分钟钟(或或浸浸泡泡30分分钟钟)，流流水水冲冲洗洗，蒸蒸馏馏水水煮煮沸沸20分分钟钟，三蒸水浸洗三蒸水浸洗2-3次

8、，晾干或次，晾干或50烘干备用。烘干备用。2橡胶制品的包装橡胶制品的包装细细胞胞培培养养用用的的橡橡胶胶制制品品一一般般较较小小，用用牛牛皮皮纸纸包包装装后再装入饭盒内。后再装入饭盒内。3橡胶制品的消毒橡胶制品的消毒高温湿热灭菌。高温湿热灭菌。（三）塑料制品的清洗、包装与消毒（三）塑料制品的清洗、包装与消毒1塑塑料料制制品品的的清清洗洗塑塑料料制制品品质质软软、易易出出现现划划痕痕；耐耐腐腐蚀蚀能能力力强强、但但不不耐耐热热。其其清清洗洗程程序序：使使用用器器皿皿后后立立即即用用清清水水清清洗洗，浸浸于于自自来来水水过过夜夜，用用纱纱布布或或棉棉签签和和50稀稀洗洗液液刷刷洗洗，流流水水冲冲洗

9、洗（1520遍遍），晾晾干干，浸浸于于清清洁洁液液15分分钟钟，流流水水冲冲洗洗（1520遍遍）,蒸蒸馏馏水水浸浸洗洗三三次次，三三蒸蒸水水泡泡24小小时时，晾晾干干或或50烘烘干干备备用。用。2塑料制品的包装塑料制品的包装细细胞胞培培养养用用的的塑塑料料制制品品一一般般较较小小，用用牛牛皮皮纸纸包包装装后后再再装入饭盒内。装入饭盒内。3塑料制品的消毒塑料制品的消毒高温湿热灭菌。高温湿热灭菌。（四）金属器械的清洗、包装与消毒（四）金属器械的清洗、包装与消毒1金属器械的清洗金属器械的清洗放放到到含含洗洗涤涤剂剂的的水水中中，反反复复刷刷洗洗后后，自自来来水水反反复复冲冲洗洗干干净净，晾晾干干，用

10、用75酒酒精精擦擦拭拭，自自来来水水反反复复冲冲洗洗干干净净，最最后后三三蒸蒸水水浸浸洗洗3次次，晾晾干干或或50烘烘干干备用。备用。2金属器械的包装金属器械的包装较小的金属器械用牛皮纸包装后再装入饭盒内。较小的金属器械用牛皮纸包装后再装入饭盒内。3金属器械的消毒金属器械的消毒金金属属器器械械的的消消毒毒可可以以用用高高温温湿湿热热灭灭菌菌（2030min）和和高高温温干干热热消消毒毒（160保保持持90120分钟）。分钟）。（五）正压除菌滤器的清洗、包装与消毒（五）正压除菌滤器的清洗、包装与消毒1正压除菌滤器的清洗正压除菌滤器的清洗放放到到含含稀稀洗洗涤涤剂剂的的水水中中，反反复复刷刷洗洗后

11、后，流流水水冲冲洗洗15min，漓漓水水，蒸蒸馏馏水水浸浸泡泡24h，三三蒸蒸水水浸浸泡泡24h，晾干或晾干或50烘干备用。烘干备用。2正压除菌滤器的包装正压除菌滤器的包装在在包包装装前前应应将将滤滤膜膜装装好好（滤滤膜膜在在使使用用前前需需经经三三蒸蒸水水浸浸泡泡过过夜夜，安安装装时时使使用用两两层层0.22m的的滤滤膜膜，光光面面朝朝上上），然然后后用用铝铝箔箔或或牛牛皮皮纸纸包包好好正正压压除除菌菌滤滤器器的的出出液液口口和和进进气气口口，再再用用棉棉布布将将整整个个正正压压除除菌菌滤滤器器团团团团裹裹住住，并并捆捆好。好。3正压除菌滤器的消毒正压除菌滤器的消毒121高压湿热灭菌高压湿热灭菌20min。（六）针头滤器的清洗、包装与消毒（六）针头滤器的清洗、包装与消毒针针头头滤滤器器的的清清洗洗、包包装装与与消消毒毒同同塑塑料料制制品品，但但是是包包装装前前应应将将滤滤膜膜装装好好，安安装装滤滤膜膜的的注意事项和要领同正压过滤器。注意事项和要领同正压过滤器。