高中生物222动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

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1、思考下列问题：思考下列问题：1、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？融合有什么不同呢？2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？合过程有什么影响？3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？相同？两者的融合过程是否也一样？一、动物细胞融合一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用动物细胞融合动物细胞融

2、合杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁融合融合组培组培物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：4.4.诱导

3、方式诱导方式指两个或多个动物细胞结合形成指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程（细胞杂交）。一个细胞的过程（细胞杂交）。形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞细胞膜的流动性细胞膜的流动性物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEG)PEG)生物法：灭活的病毒生物法：灭活的病毒动物细胞融合动物细胞融合细胞融合与诱导细胞融合物质：细胞融合与诱导细胞融合物质：诱导因素：仙台病毒、聚乙二醇、电激诱导因素：仙台病毒、聚乙二醇、电激诱导细胞融合的仙台病毒必须诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活灭活。思考：思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒为什么细胞融合过程中使用

4、的病毒需要灭活？不灭活行吗？需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。丧失感染性保留丧失感染性保留融合活性。融合活性。细胞融合技术应用于哪些方面？细胞融合技术应用于哪些方面？细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。植物细胞杂交与动物细胞融合的比较植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目比较项目比较项目比较项目植物体细胞杂交植物

5、体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合原理细胞融合原理使用的酶使用的酶使用的酶使用的酶诱导方法诱导方法诱导方法诱导方法主要用途主要用途主要用途主要用途细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）化学（聚乙

6、二醇）物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体二、单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体？什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。疫功能的球蛋白。浆细胞产生抗体。浆细胞产生抗体。B B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体

7、（浆细胞产生抗体）。生抗体（浆细胞产生抗体）。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。具有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。体。所以传统的抗体的生产方法及缺陷是所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？什么？怎样解决这个问题？长期以来，为了获得抗体，采用的长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法

8、获得的抗体，不仅方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏低，反应不够灵敏。单克隆抗体单克隆抗体 由单个由单个B B淋巴细胞经过无性繁殖（克淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。强的抗体称为单克隆抗体。特点：特点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 技术原理技术原理1）单个）单个B淋巴细胞产生单一抗体（但不能淋巴细胞产生单一抗体（但不能无限增殖）无限增殖）2）肿瘤细胞能无限增殖（

9、但不能分泌单一）肿瘤细胞能无限增殖（但不能分泌单一抗体）抗体）3）细胞融合技术杂交瘤细胞（既无限增殖）细胞融合技术杂交瘤细胞（既无限增殖又分泌单一抗体）又分泌单一抗体）4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞（获取大量单克隆抗体）（获取大量单克隆抗体）2.单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程思考：思考：1 1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲这样融

10、合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有细胞的遗传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体以获得大量单克隆抗体3.3.整个制备过程为何要经过两次筛选整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特能产生特异性抗体的细胞群。异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞

11、克隆得来的，所由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，克隆的含义，只不过克隆的不是只不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗抗体杂交法体杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 21.注射抗原的目的注射抗原的目的是什么？是什么？注射抗原注射抗原

12、效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 22.诱导细胞融合的诱导细胞融合的手段有哪些？手段有哪些？注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗抗体杂交法体杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 23.若细胞两两融合后，若细胞两两融合后，有几种融合情况？有几种融合情况？注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂

13、多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗抗体杂交法体杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 24.第一次筛选出的杂交瘤第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？养和专一抗体检测？效应效应B B细胞细胞B B淋巴细胞淋巴细胞注射抗原注射抗原骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合B-BB-B细胞细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1多种杂交瘤细胞多种杂交瘤细胞符合要求的杂交符合要求的杂交瘤细胞瘤细胞抗原抗原-抗抗体杂交法体杂交法 筛选筛选2 2克隆化克隆化体外培养体外培养小鼠腹腔内

14、增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既可以产生特异性抗既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖。体，又可以大量增殖。（1 1）小鼠骨髓瘤细胞与）小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴细胞融合？淋巴细胞融合？（2 2）制备过程中应用哪些细胞）制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？工程技术手段？（3 3）在整个制备的过程中要经过几次筛选在整个制备的过程中要经过几次筛选？思考思考：细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活细胞融合技术、细胞培养技术细胞融合技术、细胞培养技术 第一次筛选得到杂交瘤细胞，第二次筛选在第一次筛选得到杂交瘤细胞

15、，第二次筛选在多孔培养板上，在每孔只有多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞一个杂交瘤细胞的前的前提下培养筛选出特异抗体的细胞群。提下培养筛选出特异抗体的细胞群。3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成癌症治疗，可制成“生物导弹生物导弹”，也有少，也有少量用于治疗其它疾病。量用于治疗其它疾病。小

16、结小结两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三三个个“一一”一个诱导细胞融合的新方法灭活一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实验方案3、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_2、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_4、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC