血红蛋白的提取和分离人教版选修.ppt

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1、 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需要事先处理；电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小，而非所带电荷的性质和分子的大小、形状。【典例1】有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是A.它们都是分离蛋白质的重要方法B.它们的原理相同C.使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要D.以上说法都正确【解题关键】解答本题的关键应明确以下两点：(1)凝胶色谱法的原理；(2)电泳法的原理。【标准解答】选A。凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的一种有效方法；电泳法是利用待测样品中各种分子带

2、电性质的差异和分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离或鉴定。所以A正确，B错；这两种方法都用到缓冲溶液，以调节溶液的酸碱度，所以C错误。综上所述，答案选A。2.凝胶色谱操作(1)凝胶色谱柱的装填：用蒸馏水溶胀凝胶均匀装填色谱柱在约50 cm高的操作压下，用300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12 h，使凝胶装填紧密。(2)打开流出口，使缓冲液与凝胶面平齐，关闭出口(3)样品的加入和洗脱用吸管将1 mL透析后的样品加到色谱柱顶端，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内后，关闭下端出口。小心加入物质的量浓度为20 mmo

3、l/L的磷酸缓冲液(pH=7.0)到适当高度后，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。凝胶的预处理：沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡。色谱柱的装填：装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。【典例2】(2011扬州高二检测)如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题：(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有_功能。(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则

4、A是_；乙装置中，C溶液的作用是_。(3)甲装置用于_，目的是_。用乙装置分离蛋白质的方法叫_，是根据_分离蛋白质的有效方法。(4)用乙装置分离血红蛋白时，待_时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。【解题关键】(1)理解凝胶色谱法的原理；(2)分析磷酸缓冲液的作用；(3)掌握蛋白质的分离与提取方法。【标准解答】(1)血红蛋白能携带氧气，体现了蛋白质具有运输功能。(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是磷酸缓冲液；乙装置中，C溶液的作用是洗脱血红蛋白。(3)甲装置用于透析(粗分离)，目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质。用乙装置分离蛋白质的方法叫凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。(4)待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。答案：(1)运输(2)磷酸缓冲液 洗脱血红蛋白(3)透析(粗分离)去除样品中相对分子质量较小的杂质 凝胶色谱法 相对分子质量的大小(4)红色的蛋白质接近色谱柱底端【误区警示】在血红蛋白的提取和分离中，缓冲液能维持溶液酸碱度稳定；透析过程中，可以除去小分子的杂质；在蛋白质纯化过程中，可以将血红蛋白分离出来。