【课件】2023届高三生物一轮复习课件第36课+微生物的培养技术及应用.pptx

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1、第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 31培养基的配制培养基的配制(1)概概念念：人人们们按按照照微微生生物物对对_的的不不同同需需求求，配配制制出出供供其其_的的营养基质。营养基质。考点一微生物的基本培养技术考点一微生物的基本培养技术营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖(2)种类种类按物理状态可分为液体培养基和按物理状态可分为液体培养基和_。按功能可分为选择培养基按功能可分为选择培养基和和_。(3)成成分分：各各种种培培养养基基一一般般都都含含有有水水、_、氮氮源源和和_，此此外外还要满足微生物生长还要

2、满足微生物生长对对_、特殊营养物质特殊营养物质以及以及_的的需求。需求。固体培养基固体培养基鉴别培养基鉴别培养基碳源碳源无机盐无机盐pH氧气氧气第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3(4)无菌技术的主要方法及适用对象无菌技术的主要方法及适用对象(连线连线)2无菌技术无菌技术(1)目的：目的：获得获得_。(2)关键：关键：防止防止_污染污染。(3)措施措施：_和和_。纯净的微生物培养物纯净的微生物培养物杂菌杂菌灭菌灭菌消毒消毒第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键

3、能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 33微生物的纯培养微生物的纯培养(1)概概念念：由由_繁繁殖殖所所获获得得的的微微生生物物群群体体是是纯纯培培养养物物，获获得得_的的过程就是纯培养。过程就是纯培养。(2)过程：过程：包括包括_、灭菌、接种、灭菌、接种、_和和培养等步骤。培养等步骤。(3)常用接种方法常用接种方法：_法和法和_法。法。单一个体单一个体纯培养物纯培养物配制培养基配制培养基分离分离平板划线平板划线稀释涂布平板稀释涂布平板第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3(4)实

4、例实例酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌干热灭菌干热灭菌平板划线法平板划线法倒置倒置未接种未接种微生物概述微生物的概念：微生物的概念：_的统称。的统称。包括包括_等。等。本章中提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。本章中提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。难以用肉眼观察的微小生物难以用肉眼观察的微小生物细菌、真菌、病毒及一些原生生物细菌、真菌、病毒及一些原生生物禽流感病毒禽流感病毒SARSSARS病毒病毒大大型型真真菌菌实验室培养微生物条件1 1）提供微生物生长繁殖所需）提供微生物生长繁殖所需营养营养和和环境条件环境条件培养基的配制培养基的配制2 2）确保其它微生物无法

5、混入）确保其它微生物无法混入无菌技术无菌技术高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌固体培养基固体培养基3 3）将需要的微生物分离出来）将需要的微生物分离出来微生物的纯培养微生物的纯培养微生物在其表微生物在其表面生长，可以面生长，可以形成肉眼可见形成肉眼可见的的菌落。培养基的配制人们按照微生物对人们按照微生物对营养物质营养物质的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其生长繁殖的生长繁殖的营养基质营养基质。用以用以培养培养、分离分离、鉴定鉴定、保存微生物保存微生物或积累其代谢物或积累其代谢物。011.概念：概念：2.作用：作用：3.类型：类型：固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基 半固体培养基半固体培养

6、基划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种含化学成分含化学成分不明确不明确的天然物质的天然物质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定允许特定种类的微生物生长允许特定种类的微生物生长,同同时抑制或阻止其他种类微生物时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基生长的培养基培养、分离出特培养、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示剂或在培养基中加入某种指示剂或化学药品化学药品,用以鉴别不同种类用以鉴别不同种类的微生物的微生物鉴别不同种鉴别不同种

7、类微生物类微生物天然培养基合成培养基固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基（1）基本成分：水、碳源、氮源、无机盐。碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：氮源氮源NH4、NO3-、NH3等等。牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。CO2、CO32-、HCO3-。葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：牛肉膏、蛋白胨：牛肉膏、蛋白胨：均可提供碳元素、氮元素。均可提供碳元素、氮元素。无机盐无机盐Zn、Cu、Mn、Co、Mo等等大量元素：大量元素：微量元素：微量元素：Ca、K、Mg等等自养微生物自养微生物

8、异养微生物异养微生物为什么培养基需要氮源？为什么培养基需要氮源？是是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。01培养基的配制01牛肉牛肉膏膏蛋白胨蛋白胨（2）特殊需求：满足微生物对 的需求。培养培养厌氧微生物厌氧微生物时，需要时，需要提供提供_的条件。的条件。例如：例如：培养培养乳酸杆菌乳酸杆菌时，需要在培养基中添加时，需要在培养基中添加_；培养培养霉菌霉菌时，需要将培养基调至时，需要将培养基调至_；培养培养细菌细菌时，需要将培养基时，需要将培养基调至调至 ；01培养基的配制第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学

9、科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 31培培养养基基只只能能用用以以培培养养、分分离离、鉴鉴定定、保保存存微微生生物物，不不能能用用以以积积累累其代谢物。其代谢物。()()2琼脂固体培养基是实验室中最常用的培养基之一。琼脂固体培养基是实验室中最常用的培养基之一。()()3消消毒毒是是指指使使用用较较为为温温和和的的物物理理、化化学学或或生生物物等等方方法法杀杀死死物物体体表表面面或内部的微生物，包括芽孢和孢子。或内部的微生物，包括芽孢和孢子。()()4配制培养基时应先灭菌再调配制培养基时应先灭菌再调pH。()()5平板划线法中每一次划线后要将接种环灼烧。平板划线法中每一次划线后要将接

10、种环灼烧。()6倒倒平平板板时时，应应将将打打开开的的皿皿盖盖放放到到一一边边，以以免免培培养养基基溅溅到到皿皿盖盖上上。()第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 31(选选择择性性必必修修3 P10旁旁栏栏思思考考)为为什什么么培培养养基基需需要要氮氮源源？_。2(选择性必修选择性必修3 P10相关信息相关信息)牛肉膏和蛋白胨含有的营养物质牛肉膏和蛋白胨含有的营养物质有有_。培养基培养基中中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的糖、维生素和有机氮

11、等营养物质糖、维生素和有机氮等营养物质第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3考向考向1|培养基的成分与功能的分析培养基的成分与功能的分析1下列有关培养基的叙述，正确的是下列有关培养基的叙述，正确的是()A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基中都只含有碳源、氮源、水和无机盐培养基中都只含有碳源、氮源、水和无机盐C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D微微生生物物在在固固体体培培养养基基表表面面生生长长，一一

12、定定能能形形成成肉肉眼眼可可见见的的单单个个细细菌繁殖而来的菌落菌繁殖而来的菌落A新坐标新坐标P369第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 32(2021山山东东卷卷)解解脂脂菌菌能能利利用用分分泌泌的的脂脂肪肪酶酶将将脂脂肪肪分分解解成成甘甘油油和和脂脂肪肪酸酸并并吸吸收收利利用用。脂脂肪肪酸酸会会使使醇醇溶溶青青琼琼脂脂平平板板变变为为深深蓝蓝色色。将将不不能能直直接接吸吸收收脂脂肪肪的的甲甲、乙乙两两种种菌菌分分别别等等量量接接种种在在醇醇溶溶青青琼琼脂脂平平板板上上培培养养。甲甲菌菌菌菌落落周

13、周围围呈呈现现深深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是()A甲菌属于解脂菌甲菌属于解脂菌B实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力B乙菌菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙乙菌菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，菌也可以在

14、培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；错误；获得纯净的微生物培养物的关键是获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染！条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物，不能消灭芽孢和孢子煮沸消毒法煮沸消毒法煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法化学药剂消毒法化学药剂消毒法化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源紫外线消毒法紫外线消毒法紫外线消毒法紫外线消毒法用紫外灯照射接种室、接种用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台。箱、超净工作台。灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，

15、包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具(涂布器、接种环涂布器、接种环)、试管口或瓶口、试管口或瓶口干热灭菌法玻璃器皿、金属用具湿热灭菌法培养基及容器无菌技术02芽孢芽孢 芽孢是某些细菌（如芽孢杆菌属）在营养条芽孢是某些细菌（如芽孢杆菌属）在营养条件缺乏时，在菌体内形成的一个圆形或椭圆形、件缺乏时，在菌体内形成的一个圆形或椭圆形、含水量低、抗逆性强的含水量低、抗逆性强的休眠体休眠体。孢子是脱离亲本后孢子是脱离亲本后能直接或间接发育成新个能直接或间接发育成新个体体的生殖细胞，它是有丝分裂或减数分裂的产物。的生殖细胞，它是有丝分裂或减数分裂的产物。孢子孢子第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术

16、及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3考向考向2|无菌技术的辨析无菌技术的辨析3(2021北北京京卷卷)人人体体皮皮肤肤表表面面存存在在着着多多种种微微生生物物，某某同同学学拟拟从从中中分分离出葡萄球菌。下述操作错误的是离出葡萄球菌。下述操作错误的是()A对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B使用无菌棉拭子从皮肤表面取样使用无菌棉拭子从皮肤表面取样C用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D观察菌落的形态和颜色等进行初步判断观察菌落的形态和颜色等进行初步判断C取样后的棉拭子浸入无取样后的棉拭子浸入

17、无菌水制备菌液，取菌水制备菌液，取0.1 mL菌液滴加到培养基菌液滴加到培养基表面，再用灼烧灭菌过表面，再用灼烧灭菌过的且冷却的涂布器涂布，的且冷却的涂布器涂布，C错误错误第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 34(2022湖湖北北卷卷改改编编)灭灭菌菌、消消毒毒、无无菌菌操操作作是是生生物物学学实实验验中中常常见见的的操作。下列叙述正确的是操作。下列叙述正确的是()A动、植物细胞动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行的提取必须在无菌条件下进行B微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止

18、污染微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染C为为防防止止蛋蛋白白质质变变性性，不不能能用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法对对牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养基进行灭菌养基进行灭菌D可可用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法对对实实验验中中所所使使用用的的微微量量离离心心管管、细细胞胞培培养养瓶等进行灭菌瓶等进行灭菌D第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3【易错提醒】【易错提醒】把握选择无菌技术的原则把握选择无菌技术的原则(1)考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。考虑无菌技术的效果：灭菌的

19、效果比消毒要好。(2)考考虑虑操操作作对对象象的的承承受受能能力力：活活体体生生物物材材料料、操操作作者者的的手手等等只只能能消消毒，而不能灭菌。毒，而不能灭菌。1概念：概念：由由 繁殖所获得的微生物群体是纯培养物，获繁殖所获得的微生物群体是纯培养物，获得得 的过程就是纯培养。的过程就是纯培养。03微生物的纯培养2常用方法：常用方法：法和法和 法。法。03微生物的纯培养采用采用平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法将单个微生物将单个微生物分散分散在固体培养基在固体培养基上，之后得到的上，之后得到的单菌落单菌落一般是由单个微生物形成的一般是由单个微生物形成的纯培养物纯培养物。微生物

20、群分散单个细胞单个菌落繁殖不同菌落的不同菌落的形状、大小、颜色形状、大小、颜色等不同。等不同。菌落是菌落是鉴定菌种鉴定菌种的重要依据。的重要依据。3方法步骤方法步骤1制备培养基配制培养基灭菌倒平板培养基：培养基：高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌:100kPa100kPa、121121，15-30min15-30min培养皿：培养皿：干热灭菌干热灭菌:160:160170170 ，灭菌，灭菌2h2h探究 实践 酵母菌的纯培养步骤：（酵母菌计算计算称量称量溶化溶化定容定容待培养基待培养基冷却至冷却至5050左右左右时，时，在在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近倒平板。倒平板。将配好的培养基，转移到将配好的培养基

21、，转移到锥形瓶锥形瓶灭菌。灭菌。马铃薯琼脂培养基）防止皿盖上的水珠落防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；入培养基，造成污染；防止培养基中的水分防止培养基中的水分过快蒸发。过快蒸发。酵母菌的纯培养平板划线法注意：注意：接种环接种环灼烧的次数和时灼烧的次数和时机。机。探究实践2接种和分离酵母菌避免接避免接种环上种环上可能存可能存在的杂在的杂菌污染菌污染培养物培养物。杀死接种环上残留的菌种，杀死接种环上残留的菌种，保证使下一次划线时，菌保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的种直接来源于上次划线的末端末端第一步灼烧第一步灼烧每次划线前每次划线前灼烧灼烧划线操作结束时划线操作结束时灼烧灼烧杀死接

22、种环上残留的菌种，避免杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。污染环境和感染操作者。通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离得到单个菌落（即由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体）。平板划线法 酵母菌的纯培养12345探究实践 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板接种后的平板和和一个一个未接种的平板未接种的平板倒置，放入，放入2828左右的左右的恒温培养箱恒温培养箱中培养中培养24-28h24-28h。u未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？未接种

23、的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？u在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、颜色、形状、大小形状、大小是否一致？如果你是否一致？如果你观察到了观察到了不同形态的菌落不同形态的菌落，你能分析可，你能分析可能是哪些原因引起的吗？能是哪些原因引起的吗？3培养酵母菌步骤：没有。没有。如果有，说明如果有，说明灭菌不彻底培养灭菌不彻底培养基基被杂菌污染。被杂菌污染。原因：接种的菌种不纯、无菌操作不规范。原因：接种的菌种不纯、无菌操作不规范。第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力

24、凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3考向考向3|微生物的培养、纯化方法及过程分析微生物的培养、纯化方法及过程分析5以下关于倒平板的操作，错误的是以下关于倒平板的操作，错误的是()A在火焰旁取下装有培养基的瓶塞在火焰旁取下装有培养基的瓶塞B倒平板前，让锥形瓶的瓶口迅速通过火焰倒平板前，让锥形瓶的瓶口迅速通过火焰C倒倒平平板板时时将将培培养养皿皿的的盖盖拿拿开开，以以方方便便将将锥锥形形瓶瓶中中的的培培养养基基倒倒入入培养皿培养皿D平板冷却凝固后要倒过来放置平板冷却凝固后要倒过来放置C第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析

25、高考命题课时质量评价1 12 23 36(2021山山东东卷卷)含含硫硫蛋蛋白白质质在在某某些些微微生生物物的的作作用用下下产产生生硫硫化化氢氢导导致致生生活活污污水水发发臭臭，硫硫化化氢氢可可以以与与硫硫酸酸亚亚铁铁铵铵结结合合形形成成黑黑色色沉沉淀淀。为为探探究究发发臭臭水水体体中中甲甲、乙乙菌菌是是否否产产生生硫硫化化氢氢及及两两种种菌菌的的运运动动能能力力，用用穿穿刺刺接接种种的的方方法法分分别别将将两两种种菌菌接接种种在在含含有有硫硫酸酸亚亚铁铁铵铵的的培培养养基基上上进进行行培培养养，如如图图所所示示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是()

26、A乙菌的运动能力比甲菌强乙菌的运动能力比甲菌强B为不影响菌的运动需选用液体培养基为不影响菌的运动需选用液体培养基C该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染污染B第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 37下下图图为为实实验验室室培培养养和和纯纯化化大大肠肠杆杆菌菌过过程程中中的的部部分分操操作作步步骤骤，下下列列说法错误的是说法错误的是()A步骤使用的培养基是已经调节过步骤使用的培养基是已经调节

27、过pH并灭菌的培养基并灭菌的培养基B步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行C到到的过程中，接种环共灼烧了的过程中，接种环共灼烧了5次次D步骤操作时，不能将第步骤操作时，不能将第1次和第次和第5次的划线相连次的划线相连C第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3【易错提醒】【易错提醒】培养物、纯培养物、纯培养的辨析培养物、纯培养物、纯培养的辨析第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 31微

28、生物的选择培养微生物的选择培养(1)选选择择培培养养基基：将将允允许许特特定定种种类类的的微微生生物物生生长长，同同时时_其他种类微生物生长的培养基。其他种类微生物生长的培养基。(2)稀稀释释涂涂布布平平板板法法：将将菌菌液液进进行行一一系系列列的的梯梯度度稀稀释释后后，将将不不同同稀稀释释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。考点二微生物的选择培养和计数考点二微生物的选择培养和计数抑制或阻止抑制或阻止第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3涂

29、布平板操作涂布平板操作培养基表面培养基表面酒精酒精涂布均匀涂布均匀第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3培培养养：待待涂涂布布的的菌菌液液被被培培养养基基吸吸收收后后，将将平平板板_，放放入入3037 的的_中培养中培养12 d。2微生物的数量测定微生物的数量测定(1)利用稀释涂布平板法计数利用稀释涂布平板法计数为为了了保保证证结结果果准准确确，一一般般选选择择菌菌落落数数在在_的的平平板板计计数数，并并且且在在同一稀释度下，应至少对同一稀释度下，应至少对_个平板进行计数，并个平板进行计数，并求求_

30、。统计结果往往比实际值统计结果往往比实际值_。倒置倒置恒温培养箱恒温培养箱303003平均值平均值少少(2)利用显微镜直接计数利用显微镜直接计数需用细菌计数板或血细胞计数板。需用细菌计数板或血细胞计数板。统计结果统计结果是是_的总和。的总和。活菌数和死菌数活菌数和死菌数第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 33土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数脲酶脲酶尿素尿素聚合酶链式反应（PCRPCR）是一种在体外扩增是一种在体外扩增DNADNA片段片段的技术，此项技术要求使用的技术，

31、此项技术要求使用耐高温的耐高温的DNADNA聚合酶聚合酶。美国黄石国家公园美国黄石国家公园那么，如何从众多的微生物中筛选出单一菌种那么，如何从众多的微生物中筛选出单一菌种？水生栖热菌能在水生栖热菌能在70-8070-80高温条件下生存，而绝大多数微生物在此高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。条件下不能生存。启示：寻找目的菌时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。19731973年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中筛选出筛选出水生栖热菌水生栖热菌，并从这种菌种提取出，并从这种菌种提取出耐高温的耐高温的DNADNA聚合酶聚合酶

32、。为什么为什么水生栖热菌水生栖热菌能从热泉中被筛选出来呢能从热泉中被筛选出来呢？思路：人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。选择培养基一 在微生物学中，将，同时的培养基，称为选择培养基。思路思路：在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。改变培养基中的营养成分改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石。例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石油作为唯一碳

33、源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；改变微生物的培养条件改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物；用普通培养基在无氧条件下分离厌氧型和兼性厌氧型微耐高温的微生物；用普通培养基在无氧条件下分离厌氧型和兼性厌氧型微生物。生物。探究实践 选择培养基配方的设计选择培养基配方的设计 尿素CO(NH2)2含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿

34、素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。讨论：讨论：1.1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？来，培养基的配方该如何设计？2.2.该培养基与该培养基与普通培养基普通培养基有哪些共同点和不同点？有哪些共同点和不同点？(细菌生长的氮源)尿素 NH3 脲酶脲酶尿素分解菌尿素分解菌【典例】据培养基的配方表，回答下列问题：【典例】据培养基的配方表，回答下列问题：牛肉膏牛肉膏5.0g5.0g蛋白胨蛋白胨10.0g10.0gNaClNaCl5.0g5.

35、0g琼脂琼脂20.0g20.0g蒸馏水蒸馏水定容到定容到1000ml1000mlKHKH2 2POPO4 41.4g1.4gNaHNaH2 2POPO4 42.1g2.1gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2g0.2g葡萄糖葡萄糖10.0g10.0g尿素尿素CO(NHCO(NH2 2)2 21.0g1.0g琼脂琼脂15.0g15.0g蒸馏水蒸馏水定容到定容到1000ml1000ml培养基一培养基二1.1.从物理性质看，两种培养基属于哪类？依据是什么从物理性质看，两种培养基属于哪类？依据是什么？培养基的主要用途是什么？培养基的主要用途是什么？固体培养基的主要用途：分离、鉴定、计数。固

36、体培养基的主要用途：分离、鉴定、计数。3.3.从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到何种细菌？何种细菌？可获得能可获得能分解尿素分解尿素的微生物。的微生物。2.2.两种培养基中共有哪些成分？两种培养基中共有哪些成分？碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐培养基二的碳源为培养基二的碳源为_，氮源为，氮源为_；葡萄糖葡萄糖尿素尿素都属于固体培养基。都属于固体培养基。依据是添加了凝固剂依据是添加了凝固剂琼脂琼脂培养基二培养基二第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 2

37、3 31(选选择择性性必必修修3 P16思思考考讨讨论论)(1)如如果果让让你你配配制制一一种种培培养养基基，将将土土壤壤稀稀释释液液中中能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌分分离离出出来来，培培养养基基的的配配方方该该如如何何设设计计？_。(2)该该 培培 养养 基基 与与 普普 通通 培培 养养 基基 有有 哪哪 些些 共共 同同 点点 和和 不不 同同 点点？_。设设计计一一种种选选择择培培养养基基，用用尿尿素素作作为为唯唯一一氮氮源源，可可以以将将分分解解尿尿素素的的细细菌分离出来菌分离出来这这种种培培养养基基与与普普通通培培养养基基相相比比，只只是是用用尿尿素素作作为为唯唯一一氮氮源源，

38、培培养养基基的其他营养成分基本相同的其他营养成分基本相同第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 32(选选择择性性必必修修3 P16思思考考讨讨论论)结结合合对对照照组组，分分析析培培养养物物中中是是否否有有杂杂 菌菌 污污 染染 以以 及及 选选 择择 培培 养养 基基 是是 否否 筛筛 选选 出出 一一 些些 菌菌 落落。_。如如果果没没有有接接种种的的培培养养基基上上没没有有菌菌落落生生长长，说说明明培培养养基基没没有有被被杂杂菌菌污污染染。如如果果接接种种后后的的完完全全培培养养基基上上的的菌菌

39、落落数数明明显显多多于于选选择择培培养养基基上上的的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物计数：测定分解尿素的细菌的数量稀释涂布平板法将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。注意：注意：稀释度足够高时，能在培养基表面形成稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落单个菌落。微生物的选择培养二稀释涂布平板法1.梯度稀释2.涂布平板1.梯度稀释铲取土样，将样品装入纸袋中1101101101107 71101106 61101103 311

40、01102 21101104 41mL1mL1mL1mL1mL1101105 5注意：取土样用的小铁铲和盛土注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌样的的纸袋在使用前都要灭菌微生物的选择培养二稀释涂布平板法将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。90mL无菌水9mL无菌水1mL取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。注意：各浓度分别注意：各浓

41、度分别涂布涂布3 3个平板个平板（重复（重复实验）实验）注意：多余的酒注意：多余的酒精在烧杯中滴尽，精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰然后再放在火焰上灼烧。上灼烧。2.涂布平板微生物的选择培养二稀释涂布平板法10107 710106 610103 310102 210104 41mL1mL1mL1mL9mL9mL无菌水无菌水1mL10105 51.梯度稀释移液枪恒温培养箱稀释稀释10103 3倍倍稀释稀释10104 4倍倍稀释稀释10105 5倍倍空白对照空白对照细菌一般选用104、105、106 稀释倍数的菌液进行涂布培养。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37的恒温培养箱中，培

42、养1-2d。3.菌落培养微生物的选择培养二稀释涂布平板法方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理接种工具单菌落的获得用途接种效果图相同点通过通过连续划线连续划线的操作，将的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散聚集的菌种逐步稀释分散将菌液进行一系列的将菌液进行一系列的等比稀释等比稀释，然后将，然后将不同稀释度的菌液分别不同稀释度的菌液分别涂布涂布到固体培养到固体培养基的表面，进行培养，以得到单菌落。基的表面，进行培养，以得到单菌落。接种环接种环涂布器涂布器从从最后划线区最后划线区挑取挑取稀释度合适稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落的整个平板上都可找到单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落

43、分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落分离纯化菌种，获得单菌落用于计数用于计数都能分离纯化菌种都能分离纯化菌种 都在固体培养基上进行的都在固体培养基上进行的平板划线法 vs 稀释涂布平板法稀释涂布平板法显微镜直接计数法微生物的数量测定三间接计数法间接计数法直接计数法直接计数法缺点：不能区分死菌和活菌偏大不适于对运动细菌的计数。不适于对运动细菌的计数。不适于对运动细菌的计数。不适于对运动细菌的计数。个体小的细菌在显微镜下难以观察。个体小的细菌在显微镜下难以观察。个体小的细菌在显微镜下难以观察。个体小的细菌在显微镜下

44、难以观察。优点：快速、直观优点：快速、直观要求:选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证 获得获得菌落数为菌落数为30-30030-300、适于计数的平板、适于计数的平板。同一稀释度同一稀释度至少对至少对3 3个平板个平板进行进行重复计数重复计数，然后，然后求平均值求平均值；微生物的数量测定三稀释涂布平板法缺点:统计的菌落数往往比活菌的实际数目少统计的结果一般用菌落数而不是活菌数表示；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数表示；分离微生物分离微生物统计样品中统计样品中活菌活菌的数目的数目原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液

45、中的一个活菌。通过计数平板上的通过计数平板上的菌落数菌落数，就能，就能推测推测出样品出样品中大约含有多少活菌。中大约含有多少活菌。【原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。】分析实验结果时，要考虑分析实验结果时，要考虑重复组重复组结果是否接近，结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。思考：如何从平板上的菌落数推测出思考：如何从平板上的菌落数推测出每克（每每克（每mlml）样品中的菌落数）样品中的菌落数？每克（每ml）样品中的菌落数(CV)M注：注：C C代表某一稀释度下平板上生长的代表某一稀释度下平板上生长的平均菌

46、落数平均菌落数 V V代表代表涂布平板时涂布平板时所用的稀释液的体积所用的稀释液的体积(ml)(ml)M M代表代表稀释倍数稀释倍数微生物的数量测定三稀释涂布平板法 间接计数法间接计数法第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 31利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。()()2培养分解尿素的细菌，培养基的培养分解尿素的细菌，培养基的pH会增大。会增大。()()3筛选分解尿素的细菌的培养基以尿素为唯一氮源，且为液体培养基。筛选分解尿

47、素的细菌的培养基以尿素为唯一氮源，且为液体培养基。()()4利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数()()5统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计()()6利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量。利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量。()()第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3考向考向1|选择培养基成分

48、与功能的分析选择培养基成分与功能的分析1下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡葡萄萄糖糖、尿尿素素、琼琼脂脂、蒸蒸馏水馏水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、葡萄糖、琼脂、蒸馏水CKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、蒸馏水、尿素、琼脂、蒸馏水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛牛肉肉膏膏、蛋蛋白白胨胨、琼琼脂脂、蒸馏水蒸馏水A第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高

49、考命题课时质量评价1 12 23 32物物质质W是是一一种种含含氮氮有有机机物物，W在在培培养养基基中中达达到到一一定定量量时时培培养养基基表表现现为为不不透透明明。某某小小组组欲欲从从土土壤壤中中筛筛选选出出能能降降解解W的的细细菌菌，结结果果如如下下图。下列说法错误的是图。下列说法错误的是()A透明圈的形成是因为透明圈的形成是因为W物质被分解物质被分解B所用的选择培养基应该是以物质所用的选择培养基应该是以物质W为唯一氮源为唯一氮源C甲菌落中的细菌可能是利用空气中的氮气作为氮源甲菌落中的细菌可能是利用空气中的氮气作为氮源D乙菌落中的细菌都能降解乙菌落中的细菌都能降解W，不需要进一步纯化，不需

50、要进一步纯化D乙菌落中的细菌不一定都能降解乙菌落中的细菌不一定都能降解W，因此仍需要进一步纯化，因此仍需要进一步纯化，D错误错误。第第36课微生物的培养技术及应用课微生物的培养技术及应用构建必备知识培养关键能力凝练学科素养探析高考命题课时质量评价1 12 23 3【易错提醒】【易错提醒】能够在选择培养基上生长的不一定都是目的菌株能够在选择培养基上生长的不一定都是目的菌株原原则则上上选选择择培培养养基基只只能能允允许许特特定定种种类类的的微微生生物物生生长长，但但实实际际上上，微微生生物物的的培培养养是是一一个个非非常常复复杂杂的的问问题题，有有些些微微生生物物可可以以利利用用其其他他微微生生物