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1、检验师免疫知识点汇总随机误差的主要特征是具有抵偿性。在某些情况下，自身耐受被破坏导致免疫自稳功能低下，机体免疫系统对自 身成分发生免疫应答，称为自身免疫。CEA为含有复杂的抗原决定簇和多种异构型的糖蛋白。一般认为AFP含量起过400ng/ml,对原性肝癌有较高的诊断价值。PCR-SBT方法是一种通过对扩增后的HLA基因片段进行核酸序列测定，从而 判断HLA基因多态性的方法，是最精确、直湿的方法免疫原性是指抗原分子能诱导免疫应答的特性。抗原性是指抗原分子能与应答产物发生特异性反应的特性完全抗原既有免疫原性，又有免疫反应性（抗原性）。既能刺激机体产生免 疫应答，包括诱导产生抗体及效应T淋巴细胞，又

2、能与抗体或效应T淋巴细 胞发生特异性结合的能力。半抗原仅能与相应的抗体发生特异性结合反应（即有抗原性），自身不能诱 导机体产生抗体（即无免疫原性）。制备人工抗原常用为载体牛血清白蛋白溶解度大，免疫活性强，且易获得。淋巴结、脾、扁桃体等为外周淋巴器官，是成熟淋巴细胞定居的场所，执行 免疫应答功能。单克隆抗体理化性状高度均一，其抗原结合部位和同种型都相同，生物活性 专一。特异性强，纯度高，易于实验室标准化和大量制备。人-鼠嵌合抗体是通过基因工程技术将人Ig的C区与鼠1g的V区连接，导 入细胞内表达制备的抗体。免疫球蛋白的型及亚型是根据CL （恒定区轻链）抗原性的不同进行分类的， 各Ig可分为K型和

3、入型。免疫球蛋白类及亚类的是根据（CH）（恒定区重链）的结构和抗原性不同区 分的，可将 Ig 分为 IgG、IgA、IgM IgD IgE 5 类。抗原抗体反应必须在合适的PH环境中进行，一般PH为6-9,有补体参与的 反应pH为7. 2-7. 4,过高或过低都将影响抗原与抗体反应采用磷酸盐作为包被缓冲液一般选择中性条件，即PH7. 2-7. 4。MHC是major histocompatibility complex的缩写，含义为主要组织相容 性复合体。M蛋白是Monoclonal protein,其含义是单个B细胞恶性增殖所分泌的免 疫球蛋白，无抗体生物活性。B 淋巴细胞表面标志有 mlg

4、、CD19/15、CD21、CD35、CD32、CD40、CD80/86 分子等。成熟B淋巴细胞表面表达SmlgM和SmlgDoCD19区分外周血B细胞与其他细胞；应用CD5可分类B1细胞和B2细胞B1细胞不表达CD23,表达CD5,与机体的免疫调节、自身免疫病及B细胞 源性肿瘤密切相关B2细胞不表达CD5,表达CD23,是外周血中主要的B细胞。是执行体液免 疫的主要细胞，其通常在接受多数抗原刺激后经活化、增殖、分化以及伴 随的体细胞突变和亲和力成熟的过程中，产生高亲和力抗体。成熟B细胞可同时表达mlgD和mlgM,未成熟的B细胞膜表达mlgM,无论B 细胞成熟与否均表达mlgM,即u链；所以

5、用抗口链的抗体可活化B细胞， 其他细胞均不表达mlgM。TCR是T细胞抗原受体，表达于所有成熟T细胞表面，是T细胞识别外来抗 原并与之结合的特异受体。T细胞表面具有SRBC受体（CD2）,能与SRBC结合形成花环CD3表达在全部T细胞表面，是T细胞共同的表面标志。CD4、CD8只表达在部分T细胞上CD2表达在全部人T细胞上和部分NK细胞上，因其能与绵阳红细胞结合， 又称绵阳红细胞受体。利用E花环试验测定外周血中T细胞总数。是胸腺 细胞最早表达的分化抗原。CD32：又称Fc受体，此受体可与抗体包被的红细胞结合形成EAC玫瑰花环， 是鉴别B细胞的方法。CD抗原（簇分化抗原）：区别淋巴细胞的重要标志

6、CD3表达于全部T细胞表面，是T细胞的共同的表面标志。是组成TCR-CD8 复合物的重要组成部分。CD4：主要是辅助性T细胞（Th细胞），HIV受体。Th细胞作用有抗原特异 性，但通常不能直接杀伤靶细胞。CD8：主要是细胞毒T细胞（Tc细胞）,Tc细胞既具有抗原特异性又能直 接杀伤靶细胞。CD14：单核细胞特异性免疫标志CD19/CD5分子：成熟B细胞均表达CD19CD21： B细胞上的EB病毒受体。CD34：造血干细胞CD35： C3b受体。此分子与相应补体或者分子结合后，可使B细胞活化CD56：临床上将CD3-CD56+CD16+认作NK细胞。NK细胞标志NKT细胞：大多数CD4-CD8-

7、T细胞CD41：巨核细胞CD3+CD8+CD30- ： Tel 细胞CD3+CD8+CD30+ ： Tc2 细胞CD3 + CD4 + CD8-：辅助性 T 细胞（Th）CD3 + CD4-CD8+ ：细胞毒性T细胞（Tc或CTL）CD4 + CD25 +调节性T细胞（Tr或Treg）NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞作用无特异性。肿瘤病灶中浸润的巨噬细胞与肿瘤的扩散及转移呈负相关，肿瘤患者巨噬 细胞的吞噬率和吞噬指数明显下降。Tc （细胞毒性T细胞）细胞具有CD8分子，与相应抗体结合，与磁性颗粒结 合。CD4和CD8是T淋巴细胞上的抗原蛋白质cd4 +称为辅助性T细胞（Th细胞）CD8 +称为细

8、胞毒性T细胞（Tc细胞）.当特异性抗原记忆T细胞再次与相应过敏原接触时，可迅速增殖分化为效应T细胞,即CD4+ Thl细胞T（tdh）细胞 和CTL细胞.Raji细胞表面有大量C3b、Clq和C3d受体，没有Smlg。B细胞与尼龙棉结合单核细胞黏附玻璃或塑料表面特性CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的区别主要在于分化抗原，只能通过特异性抗 体区分，故采用免疫磁珠法分离。M蛋白是由于单克隆浆细胞异常增殖所产，其理化性质十分均一，但无免疫 活性，可为疫球蛋白的任何类型。T细胞介导细胞免疫应答，其功能检测包括体内（0T试验）和体外（T细胞 及其亚群、淋巴细胞转化等）。T细胞表面具有PHA受体，能与P

9、HA结合，促进体外培养的T细胞发生转 化并增殖。T细胞表面具有PIIA受体，能与PHA结合，促进体外培养的T细胞发生转化 并增殖。这一过程称为淋巴细胞转化，常用于反映细胞免疫的功能。培养 72小时溶血空斑试验为检测B细胞功能的试验。EPAP含义为辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶复合物，酶为辣根过氧化物 酶。“P”为辣根过氧化物酶英文的字头。DAB为HRP的不溶性底物，氧化后形成的不溶物沉积于组织中，通过显微镜 可观察到。Bruton病属于体液免疫缺陷，但由于新生儿体液中存在一定量由母体合成 的IgG及slgA,因此，出生后6个月才会出现反复化脓性感染。慢性肉芽 肿属原发性吞噬细胞功能缺陷，其中

10、性粒细胞和单核细胞的调理、吞噬和杀 伤能力受损。体液免疫缺陷者易发生细菌性感染，且以化脓性细菌感染为主，细胞免疫缺 陷者还易发生恶性肿瘤。性联锁重症联合免疫缺陷病是由于IL-2, IL-4, IL-7, IL-9和IL-15共同 拥有的受体Y链（yc）基因突变，使之不能正常合成ye链。此链为共用 链，从而使T细胞和B细胞不能接受CK作用，均不能活化。HIV除感染CD4 + T细胞外，还能感染巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和脑组 织中的小肢质细胞。乳胶法主要用于定性IgM-RF的测定而速率散射比浊法主要用于IgM-RF的定量T型TH型超敏反应均为体液免疫所致，将患病动物血清（抗体）转移至正常 动物

11、体内，可复制出类似症状。血清特异性IgE测定、皮内试验和激发试验均能检出过敏原，但后两者属于 体内试验放射变应原吸附试验（RAST实验）：将纯化的变应原吸附于固相载体，加入 待测血清，再用放射性核素标记的抗IgE抗体反应，定量检测血清中特异性 IgE水平。1型超敏反应引起效应器官的功能损害，无实质性病理损害。由于变应原 再次进入体内后引发的超敏反应。反应的特点包括：发生快，几秒钟至儿十 分钟内出现症状，消退亦快；为可逆性反应。由结合在肥大细胞和嗜碱性粒 细胞上的IgE抗体所介导。主要病变在小动脉，毛细血管扩张，通透性增加， 平滑肌收缩。有明显的个体差异和遗传背景。补体不参与此型反应。肥大细 胞

12、、嗜碱性粒细胞表面可吸附IgE,与变应原结合后脱果直粒，嗜酸性粒细胞 被趋化到局部释放活性介质。皮内试验原理：变应原的稀释保存液或生理盐水一般用做阴性对照，二硝基 氟苯和白三烯是变应原，阳性对照液常用盐酸组胺。 皮试假阳性的原因： 变应原稀释液偏酸或偏碱；患者有皮肤划痕症；变应原变质或污染H型超敏反应（溶细胞型超敏反应）：属于体液免疫，抗体、补体、NK细胞、 吞噬细胞均参与。抗原或抗原抗体复合物存在于细胞膜上：介导的抗体是IgG、 IgM,有补体、吞噬细胞、NK细胞参与，导致靶细胞破坏。（CD4+TH1细胞 ） 输血反应、新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血和药物过敏性血细胞减少 症血细胞抗体是

13、II型超敏反应的主要介质，检测抗红细胞抗体方法是乳胶凝 集试验。III型超敏反应是由可溶性免疫复合物沉积于局部或全身多处毛细血管基底 膜后，通过激活补体和在一些效应细胞参与作用下，引起的以充血水肿、局 部坏死和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤。III型超敏反应是可溶性抗原与相应抗体结合，形成中等大小的可溶性免疫 复合物，沉积于局部或全身毛细血管基底膜后，通过激活补体系统，吸引白 细胞和血小板聚集，引起以充血水肿、中性粒细胞浸润、组织坏死为主要 特征的病理性免疫应答。（IgE ）III型超敏反应的发生主要是由循环免疫复合物（CIC）引起，通过检测CIC 可证实某些疾病是否与HI型超敏

14、反应有关。PEG沉淀法IV型超敏反应是细胞免疫介导的变态反应，T细胞介导。传染性变态反应由 病毒和其他胞内寄生菌引起，是细胞免疫过程伴随的病理损伤。IV型超敏反应是由效应T细胞（CD8+T细胞）与相应致敏原作用引起的以单个 核细胞（巨噬细胞、淋巴细胞）浸润和组织细胞变性坏死为主的吞噬反应。 （无补体抗体）混合淋巴细胞反应不能判定HLA型别，只能说明供受体HLA-D抗原配合程 度，如果掺入量和转化细胞最多，表示MLC强阳说明D抗原完全错配。淋巴细胞功能测定的体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此了解淋巴 细胞对抗原、半抗原和有丝分裂原刺激后的应答反应移植物抗宿主排斥反应发生于干细胞移植。移植物内

15、干细胞在宿主体内存活 并增殖，这种免疫细胞被宿主HLA抗原活化、发生免疫应答，引起宿主广泛 组织损伤。超急性排斥反应主要由体液免疫介导，由于患者体液中预先存在抗供者HLA 抗体所致。数分钟或数小时即可发生。患者体内预存抗体与移植物血管内细 胞结合，坏死性血管炎症是超急性排斥反应的主要病理改变。移植前如果受 者血清中预先存在抗供者淋巴细胞的抗体，移植后80%发生超急性排斥反应， 必须做淋巴细胞交叉毒性试验以检测受者体内抗供者淋巴细胞的细胞毒性 抗体。急性排斥反应主要由细胞免疫介导，患者T细胞直接识别供者HLA分子，T 细胞大量活化，攻击移植物，引起损伤。主要原因是细胞免疫应答。CD8 + Tc能

16、直接识别异体MHC分子，是重要的效应细胞。小血管壁上有单个核细 胞为主的细胞浸润、间质水肿与血管损害。为急性排斥反应的病理改变。 3H-TdR 4小时细胞转化试验是一种检测受者致敏T细胞的方法，是一项预 报急性排斥反应危象较为满意的试验。急性体液排斥反应的病理改变：激活补体，导致急性血管炎症为其主要病理改变。急性细胞排斥反应由细胞免疫介导，主要为CD8 + CTL细胞毒性及巨噬细胞 的作用，导致急性间质炎症。慢性排斥反应属于迟发型变态反应，表现为血管壁细胞浸润、间质纤维化 和痕迹形成。NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等在抗肿瘤体液免疫效应中发挥作用的共 同机制是借ADCC效应杀伤IgG包裹的肿瘤

17、细胞。细胞免疫应答在机体抗肿瘤效应发挥重要作用，且肿瘤抗原属于内源性抗 原，肿瘤细胞可将抗原提呈给CD8+ Tc细胞，使其活化，发挥细胞毒效应。 NK细胞属于非特异性免疫细胞，无需抗原活化，直接发挥杀伤肿瘤效 应。NK细胞在肿瘤发生早期起重要效应。K562为人NK细胞敏感的靶细胞，测定NK细胞活性时以K562为靶细胞。抗血清保存有三种方法：第一种 是4c保存，通常可保存3个月-半年，效价高时可保存1年左右; 第二种是-20C至卜40低温保存，可保存5年左右，但需防止反复冻融 第三种是真空冰冻干燥保存，可保存5-10年。免疫印迹同时检测多种自身抗体，为ENA抗体检测的常用方法。抗-CCP对类风湿

18、性关节炎的敏感性为80%,且具有较高特异性。CA125是子宫内膜癌的标志物。胰腺癌的标志物是CA19-9CA15-3是监测乳腺癌患者术后复发的最佳指标。葡聚糖-泛影葡胺（Ficoll）等密度梯度离心法是利用一种密度介于1.075- 1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密 度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。Ficoll分离液法是一种 单次差速密度梯度离心的分离法。Ficoll分层液主要用于分离外周血中单个核细胞，是一种单次密度梯度离 心分离法，其分布由上到下依次为：稀释的血浆层、单个核细胞层、粒细胞 层和红细胞层。从单个核细胞悬液中除去单核细胞，从而获得

19、纯淋巴细胞群的主要方法有： 吸附柱过滤法、黏附贴壁法、磁铁吸引法及试剂分离法。对分离细胞可采用的短期保存技术为：将分离的细胞用适量含10%20%灭活小牛血清的Hanks或其他培养液稀释 重悬，短期保存可置于4c保存；长期保存技术为：液氮深低温（-196C）环境保存细胞，加入二甲亚碉作 为保护剂。Percoll分离液法是一种连续密度梯度离心分离法，该法是纯化分离单核细 胞和淋巴细胞的一种较好的方法。Percoll分层液法:1、死细胞层、血小板，2、富含单核细胞组分层，3、富含淋巴细胞的组分层4、粒细胞与红细胞层IgG M蛋白：B至慢丫球蛋白IgA M蛋白：B和丫球蛋白之间IgD和IgE M蛋白：

20、B到丫球蛋白轻链病M蛋白：丫球蛋白有时也可在a2-B球蛋白区域非抗原性刺激物包括脂多糖(LPS)、植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陆(PWM) oLPS刺激B细胞PWM可刺激T和B类细胞PHA和ConA刺激T细胞增殖PPD为T细胞增殖的特异性刺激物植物血凝素、刀豆蛋白、CD3单克隆抗体为T细胞增殖的非特异性刺激物DiGeorge综合征的病因为胚胎胸腺发育不良，属于原发性T细胞免疫缺陷 病原发性吞噬细胞缺陷慢性肉芽肿。选择性IgA缺陷症属于原发性B细胞缺陷。细菌脂多糖为B细胞增殖的非特异性刺激物凝胶过滤法又称分子筛层析。通过凝胶分子筛作用，可将大、中、小三类分 子分开，选择凝胶

21、柱时应注意选用适于分离范围内的凝胶。离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷 的蛋白质抗原。常用的离子交换剂有离子交换纤维素、离子交换凝胶、离子 交换树脂。HAT系次黄喋吟(hypoxantin) 氨基蝶聆(aminopterin)和胸腺嗑噬核昔 (thymidin)三种物质各英文首字之缀列，HAT培养基也就是指含有这三种物 质的细胞培养基。次黄噤吟磷酸核酸核糖转化酶是HGPRTo人一鼠嵌合抗体是将人IgC区与鼠IgV区连接，导入细胞内表达制备而成的 抗体。制备单克隆抗体的方法是用缺乏次黄喋吟悔酸核糖转化酶或胸腺喀咤核昔 酸酶的瘤细胞变异株与经免疫的小鼠脾脏的B细胞融

22、合。体液中的溶菌酶主要由巨噬细胞分泌。炭粒廓清实验用来检测巨噬细胞功能吞噬功能检测巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细 胞、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒 用斑螫敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞TNF-a由细菌脂多糖活化的单核-巨噬细胞产生。IFN-丫又称H型干扰素或免疫干扰素，主要由T细胞和自然杀伤细胞产生。几乎所有的有核细胞均可产生IL1,主要以巨噬细胞为主。IL 6可诱导肝细胞合成a 1 抗糜蛋白酶，能刺激浆细胞生长。IL-4是能够增强Th2细胞反应，促进IgE类别转换的一类细胞因子。IgG、IgA、IgM的测定方法是：单向琼脂扩散法、速率散射比浊法

23、等；IgD的测定方法是：单向琼脂扩散法、ELISA等；IgE的测定方法是：ELISA、间接血凝试验、放射免疫法、化学发光免疫分 析、免疫荧光测定法等。血清区带电泳是测定M蛋白的一种定性试验，常用乙酸纤维素膜和琼脂糖电 泳两种方法。主要是以正常电泳图谱与标本图谱进行比较，可看出异常Ig 的区带和位置。M区带：M区带多见于丫区或B区IgG型一 y区为主IgA型一丫与B区IgM型一B 2区或丫区IgD型一B或丫区多克隆丙球病：在丫区着色深，宽大而不均匀。低丙球病：丫区无区带。AIDS的发病过程中无替代途径补体的激活。T细胞分化成熟的场所是胸腺B细胞发育的中枢器官是骨髓淋巴细胞发生免疫应答的场所是淋巴

24、结直接凝集试验检测颗粒性抗原间接凝集试验是以抗原致敏载体检测抗体反向间接凝集试验是以抗体致敏载体检测抗原间接凝集抑制试验将标本首 先加人抗体，然后加入抗原致敏颗粒，如未出现凝集，则说明待测标本中含 有相应抗原协同凝集试验以金黄色葡萄球菌作为载体标准品是含量确定的处于一定基质中特性明确的物质。质控品是含量已知的处于与实际标本相同的基质中的特性明确的物质。电化学发光免疫分析常将抗原或抗体包被于磁性颗粒表面，通过磁场达到分 离目的。ELISA是将抗原或抗体吸附于聚苯乙烯的微孔板中，用洗涤方法去除游离标 记物，属于固相吸附分离技术。RIA采用PEG沉降结合标记物，然后测定沉淀物，属于PEG沉降分离。1

25、271食物碘EL1SA法主要用于可溶性细胞因子的测定。酶联免疫斑点试验可在光学显微镜下观察分泌细胞因子的细胞。分子生物学测定方法可检测细胞因子基因的缺失和突变非霍奇金淋巴痛是淋巴结或其他淋巴组织中的淋巴细胞或组织细胞发生恶 性增生所致。M蛋白：筛选：蛋白区带电泳 类型：免疫固定电泳 定量：免疫比浊法HLA复合体是一组复杂基因系统，遗传特征包括：多态性、单元型和连锁不 平衡。同时 也表现为共显性遗传规律。B 2-M是MHC-I类分子的轻链， 由15号染色体上的基因编码。受者T细胞对供者MHC分子的识别可以是通过直接途径和间接途径，不仅 仅指直接识别；受者T细胞识别经过受者APC加工处理的、来源于

26、供者MHC分子的肽被称 为间接识别。T细胞对供者MHC分子的识别，被识别分子的形式是经处理的同种异型MIIC 分子来源的肽。HLAT、H类分子的抗原多肽结合区是体现HLA分子多态性的主要区域。Ig 样区由a 2和B 2组成，系非多态区域。HLA-I分子主要提呈内源性抗原。利用特异性抗血清，通过微量细胞毒试验可对所有HLA-I类抗原和HLA-DR 抗原进行分型，其他抗原需通过细胞分型法鉴定。淋巴细胞丰富表达HLA分子，获取容易，可作为待检细胞。HLAT类分子可广泛表达于各种组织的有核细胞上，以淋巴细胞、白细胞表 面的表达密度最高，肝、肾、皮肤、主动脉和肌细胞次之，血小板和网织 红细胞也表达此类抗

27、原，而成熟红细胞、神经细胞和滋养层细胞则不表达。 HLATT类分子的分布较窄，主要存在于B细胞、单核/巨噬细胞、树突状细 胞及其他抗原递呈细胞上。血清学分型法所用的分型血清，同时含有I类和II类两种抗原的抗体， 为防止I类抗原的抗体干扰，必须经多人份血小板吸附(血小板只表达I类 抗原)。细胞因子大多数是低分子量蛋白质，多以单体形式存在，以非特异的方式 发挥作用，不受MHC限制。IL-2 ：(白细胞介素2)由活化T细胞产生，促进T细胞增殖，通过自分 泌或旁分泌方式发挥作用。细胞免疫促进因子可用于肿瘤治疗。以单体形 式存在，分子量较小。能促进B细胞增生和分泌抗体，但不能促进免疫球 蛋白类别的转换。

28、IL-4：能够促进免疫球蛋白类别的转换肿瘤坏死因子：诱导肿瘤细胞凋亡，杀伤和抑制肿瘤细胞；同时是一种炎 症因子，参与炎症反应。 可上调MHC分子表达水平，促进抗原提呈。IL-3与血细胞分化发育密切相关，能促进多能干细胞的定向分化。IL-3可 刺激多能干细胞和多种祖细胞的增殖与分化， 又称为多重集落刺激因子 (multi-colony stimulating factor , multi-CSF) 和造血细胞生长因子(hemopoietic cell growth factor, HCGI;)Raji细胞是由Burkitt淋巴瘤患者分离建立的B细胞株。 肿瘤相关抗原是指非肿瘤所特有的、正常细胞和

29、其他组织上也存在的抗原， 只是其含量在细胞癌变时明显增高，此类抗原只表现为量的变化而无严格 的肿瘤特异性。肿瘤标志物免疫测定对高危人群进行筛查和对可疑肿瘤患者进行动态观察, 但不能用于普通人群早期普查。注射丙种球蛋白、抗毒素、细胞因子等以治疗或紧急预防感染的措施属于 被动人工免疫注射灭活疫苗、类毒素等使之产生特异性免疫为自动人工免疫。颗粒性抗原包括各种细胞、细菌、寄生虫、SRBC等。用于凝集反应。组织液、细胞裂解液、血清蛋白、细菌培养液均为可溶性抗原，均可与相 应抗体结合形成沉淀反应。（可溶性抗原与相应抗体在一定条件下形成。）研磨法是制备组织细胞抗原的方法具备免疫原性的佐剂，如卡介苗、枯草分枝

30、杆菌、短小棒状杆菌、百日咳 杆菌、脂多糖、细胞因子等；不具备免疫原性的佐剂，如氢氧化铝佐剂、磷酸铝、磷酸钙、石蜡油、羊毛 脂、表面活性剂、藻酸钙、多聚核甘酸、胞壁肽等。单克隆抗体只识别单一抗原表位，与抗原结合的强度不如多克隆抗体，故抗 原抗体反应的亲和力降低。（诊断试剂缺点）单克隆抗体只识别单一抗原表位，减少交叉反应，提高实验方法的特异性。 （诊断试剂提高）不完全抗体的含义：能与抗原牢固结合，但因分子量较小，不能起到由桥联 作用而形成的可见凝集现象，IgG类抗体常出现不完全反应。半抗原载体：蛋白质类，常用的有人血清清蛋白、牛血清清蛋白、血蓝蛋白 等多肽类聚合物，常用多聚赖氨酸大分子聚合物和某些

31、颗粒，如聚乙烯毗咯烷酮、活性炭等荧光显微镜下，不同的抗核抗体呈现不同的荧光核型。抗DNA荧光核型呈现 周边型，对诊断SLE有重要价值。荧光偏振技术用荧光素标记小分子抗原。标记抗原和待测抗原共同竞争定量 抗体，通过检测偏振光的强度测定待测抗原的含量。荧光抗体染色技术中直接法较其他几种方法特异性高，非特异性染色最低。 双向扩散试验中沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致，沉淀线靠近抗 原孔，提示抗体含量大；反之，提示抗原含量多。（靠近多的，弯向小的。） 沉淀反应：免疫比浊法（抗原过量检测系统）的基本原则是在反应体系中 保持抗体过量。此时，待测抗原含量与浊度呈正相关。聚乙二醇（PEG）能够加快抗原抗

32、体的结合，促进免疫复合物形成，缩短反应 时间O 免疫比浊测定过程中，当抗原过量时，形成的IC分子小，而且会发生再解 离，使浊度反而下降，光散射亦减少，形成高剂量钩状效应。免疫透射比浊分析实验要求溶液中存在的抗原抗体复合物分子应足够大，分 子太小则阻挡不了光线的通过。速率散射比浊法：即在抗原抗体反应达到最高峰时，测定其复合物形成的量, 峰值的高低在抗体过量情况下与抗原的量成正比。速率散射比浊免疫分析 是一种抗原-抗体结合反应的动态测定法，将各单位时间内抗原抗体形成复 合物的速率及复合物颗粒产生的散射信号联系在一起，即形成速率散射比浊 分析。其优点是快速，灵敏度高，结果准确可靠。免疫比浊法测定密切

33、相关的因素有：抗原抗体的比例、抗体的质量、抗原抗 体反应的溶液、增浊剂的应用。（抗原的质量 ）初步制备抗原破碎组织细胞的方法有反复冻融法、超声破碎法、自溶法、 酶处 理法、表面活性剂处理法。（微波破碎法）细胞融合为一随机过程，融合后共有五种细胞存在，分别是脾-瘤融合细胞、 脾细胞、脾-脾融合细胞、骨髓瘤细胞和瘤-瘤融合细胞。杂交瘤技术，巨噬细胞为常用的饲养细胞HAT为一种选择性培养基，其中和为DNA复制的原料，“A”为 叶酸拮抗剂，能阻断细胞DNA合成主要途径。分子量越大，融合率越高，但对细胞毒性也越大。一般选择分子量为1000-2 000o分离血清免疫复合物PEG所用的分子量6000,对蛋白

34、质沉淀具有良好的选 择性。“克隆化”的目的是使每孔为单一细胞系分泌单一特异性抗体。因此，“有 限稀释法”接种的杂交瘤细胞数量是每孔1个。在同种异体移植时，决定组织相容性的同种抗原很多，其中起主要作用的 是MHC的高度多态性。间接凝集试验分为4类: 正向间接凝集反应反向间接凝集反应间接凝集抑制反应： 将标本与抗体试剂反应，然后加人致敏载体，若未 出现凝集现象，说明待测标本中含有相应抗原， 凝集反应被抑制，如乳胶 法妊娠试验。协同凝集反应： 是一种反向间接凝集。采用金黄色葡萄球菌作为载体。 该菌体细胞壁中含有A蛋白（SPA）, SPA能与特异性抗体TgG的Fc段结合。 当其与IgG抗体连接时，就成

35、为抗体致敏的颗粒载体，若与相应抗原接触， 即出现凝集现象。间接血凝试验：是以红细胞作为载体的间接凝集试验。绵羊红细胞容易获 得，醛化后容易保存和致敏，为最常用的固相载体。正向间接血凝试验分：用红细胞包被抗原检测抗体的正向间接血凝试验。正向（或反向）间接血凝抑制试验：先将可溶性抗原（或抗体）与相应 的抗体（或抗原）混合，然后再加入抗原（或抗体）致敏的红细胞，则能 抑制原先的血凝现象。抗人球蛋白试验属于一种特殊间接凝集试验，用于检测不完全抗体。其原 理是通过抗人球蛋白（第二抗体）与待检抗体结合，待检抗体与红细胞表 面抗原结合，形成凝集现象。间接Coombs试验用于检测游离在血清中的不完全抗体。将受

36、检血清和具有 待测不完全抗体相应抗原性的红细胞结合，然后加入抗球蛋白抗体就可出 现可见的红细胞凝集。多用于检测母体Rh（D）抗体， 以便尽早发现和避免 新生儿溶血症的发生。直接凝集：反应中的抗原称为凝集原，为颗粒性抗原，该试验既能检测抗 原也能检测抗体。为颗粒性抗原直接与相应抗体反应，比例合适时出现凝集。玻片凝集试验为定性试验方法试管凝集试验为半定量试验方法，常用试管凝集试验有肥达试验和外斐试 验。免疫电泳技术中采用的是可溶性抗原，故该技术属于免疫反应中的沉淀反 应。免疫电泳技术：直流电场下的凝胶内扩散；对流免疫电泳：双扩与定向电泳；火箭免疫电泳：单扩 与 电泳；免疫电泳：双扩与区带电泳；免疫

37、固定电泳：区带电泳与沉淀反应单向扩散试验：向琼脂内混入抗体，待测抗原从局部向琼脂内自由扩散， 如抗原和相应抗体结合，则形成沉淀环。对流免疫电泳：可测出的蛋白质抗原的浓度可达U g/ml。 原理是双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。琼脂凝胶的pH是8.4 火箭免疫电泳：作为抗原定量只能测定Ug/ml以上的含量，如加人微量 1251标记的标准抗原作放射自显影，灵敏度可高达ng/mlo绘制标准曲线 是以峰高为纵坐标，抗原浓度为横坐标。待测抗原的量与沉淀峰高度呈正 相关。琼脂凝胶中的抗体不移动，样品孔抗原向阳极泳动。含量可低达3ug/ml放射免疫分析：所使用的核素分两类，一类发射丫射线，

38、如1251,通常使 用晶体闪烁体探测。另一类发射射线，如3H,使用液体闪烁体探测。免疫放射分析法：免疫放射分析核素标记在抗体分子上，体系中标记抗体 过量，属于非竞争反应。放射免疫分析法标记抗原，待测抗原是与过量（放免为限量）抗体结合。必 备条件为：放射性核素标记的抗原、标准品、特异抗体、B与F分离、放射 性测量仪器。荧光效率为荧光素基本特性，与其他因素无关。化学发光是吸收化学能使分子激发而发射的光荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光辣根过氧化物酶（HRP）的常见底物为：邻苯二胺（OPD）、四甲基联苯胺（TMB）前者反应后显橙黄色，后者为蓝色碱性磷酸酶（AP）的底物为：对硝基苯磷酸酯（P-NPP

39、）,反应后为黄色。可见光波长范围：390-760纳米红光：波长范围：760-622纳米；橙光：波长范围：622-597纳米；黄光：波长范围：597-577纳米；绿光：波长范围：577-492纳米；青光：波长范围：492-450纳米；蓝光：波长范围：450-435纳米；紫光：波长范围：435-390纳米.双抗体夹心ELISA主要用于检测大分子抗原，以确保待测抗原与固相抗体 和酶结合物抗体反应。如CEA牛血清白蛋白是ELisa最常用的封闭物质。间接法主要用于检测抗体，包括病原体抗体（HIV抗体）或自身抗体。不论哪 一种抗体，它们均具有同种型抗原表位，这种表位具有种属特异性，但种 属内是相同的。间接

40、法的标记抗体在同一种属内具有通用性。应用捕获法可检测IgM类抗体，其包被物质是抗IgM,用于捕获血清中所有 IgMoPEG沉淀法的特点：pH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以 沉淀的PEG浓度越小，分离血清免疫复合物一般采用PEG分子量6000o PEG沉淀血液中的免疫复合物，继而用胰蛋白酶消化沉淀中的抗体蛋白，游 离出抗原成分，用反向间接血凝试验检测HbsAg-CICo取活体组织，通过免疫荧光抗体染色，可直接对组织中免疫复合物定位。 非特异性循环免疫复合物的检验技术中，普遍应用的是PEG沉淀法。目前化学发光酶免疫分析中常用的标记酶：HRP催化TMB呈蓝色，加终止液后最大吸收波长为

41、450nll1。HRP催化的发光剂为鲁米素及其衍生物HRP催化0PD呈橙黄色，加终止液后最大吸收波长为492nmoHRP由糖蛋白 和亚铁血红素组成，其酸的活性基团位于亚铁血红素部分。ALP催化的发光底物为AMPPD化学发光直接标记抗原或抗体物质口丫咤脂发光剂三联毗咤钉和电子供体三丙胺在电极表面进行电化学和化学发光两 个过程。时间分辨荧光检测仪器光源：脉冲伍灯(闪烁1000次/秒)。以具有独特荧 光特性的锢系元素及其螯合剂作为示踪物，建立的一种新型的非放射性微 量分析技术。故Eu最为常用。吸收滤片的作用是允许荧光通过，阻止紫外光通过，安装在分色镜与目镜 之间。激发滤片的作用是允许特定波长的激发光

42、通过，安装在光源与分色镜之间。ELISA的常用固相膜：聚苯乙烯酶免印迹所用的固相膜：NC膜FITC为异硫氟基荧光素，黄绿色荧光，便于观察，且标记容易，为最常用 的荧光素。激发波长495nm,与抗体的氨基结合形成稳定化学键。发射波长 530nmo时间分辨荧光免疫测定的标记物质为锢系元素。荧光酶免疫分析是以碱性磷酸酶为标记物，反应管作为固相载体，以4-甲 基伞形酮磷酸盐(4-MUP)为酶反应荧光基质。N-羟基丁二酰亚胺酯分子中的酯键在碱性溶液中迅速水解，C=0基团即可与 蛋白质中的赖氨酸残基形成肽键，使生物素标记在抗体分子上。亲和素以结合1 U g生物素所需的量作为其活性单位。Img链霉亲和素的最

43、高活性可达18单位。 ling亲和素的最高活性单位约为13-15o生物素分子有两个环状结构，其中咪哇酮环是结合生物素分子的主要部位。 生物素分子有两个环状结构，其中睡吩环中含有戊酸侧链，侧链末端的竣 基是与抗原、抗体或标记物结合的分子结构。为保证抗体分子的生物活性不受影响，每个抗体分子一般标记生物素的数 目为3-5。标记反应时，生物素：IgG=2 : 1 （mg/mg） o随机运动（类似布朗运动）和定向运动，是中性粒细胞运动形式。小吞噬细 胞即中性粒细胞。机体内吞噬细胞的吞噬活动大致划分为趋化、吞噬和消化3个阶段。检测细胞内杀菌功能时，加美蓝溶液作活体染色，如胞内白色念珠菌呈蓝 色，表示该菌已

44、被杀死。硝基四氮陛蓝（NBT）还原试验用以检测中性粒细胞的胞内杀菌能力。干扰素生物活性表现为抗病毒效应。以wish细胞为指示细胞，将细胞、VSV 病毒与待测标本孵育，细胞病变程度与干扰素生物活性呈反比关系。此种 方法属于细胞病变抑制法。许多细胞均能产生，但主要以巨噬细胞为主，ILT是一种重要的炎症因子。 TNF对多种肿瘤细胞有杀伤和抑制作用，可引起肿瘤组织出血坏死，具有细 胞毒效应。IgG、IgA的重链有1个VH和3个CH功能区。根据CII抗原性不同将Ig重链分为5种根据II链抗原性的差异可将其分为5类：口链、丫链、a链、6链和链， 不同H链与L链（k或入链）组成完整Ig的分子分别称之为IgM

45、. IgG、IgA、 IgD 和 IgE重链：口链（IgM）、丫链（IgG）、a 链（IgA）、5 链（IgD）和 e 链（IgE） Ig分子量较大，电泳时迁移缓慢， 主要位于丫区。补体系统由4部分组成：经典途径成分，替代途径成分，调节因子，补体 受体。前3部分存在于体液中，补体受体为膜结合分子。补体结合试验有五种成分参与反应，分属三个系统：反应系统、补体系统 和指示系统，可检测抗原或抗体，不出现溶血为补体结合试验阳性。脾是富含血管的最大外周淋巴器官。IgG与抗原结合形成免疫复合物，可通过经典途径激活补体。与补体结合 的部位位于CH2功能区。补体经典途径是以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主

46、要激活剂。各补体 补体替代途径的激活物多是一些微生物的菌体多糖、内毒素、某些蛋白水解 酶等以及凝聚的1g。成分激活顺序C142356789。（Clq最早激活）MBL途径是由甘露醇结合凝集素与病原体结合后启动的补体激活。补体系统的生物学活性有溶细胞作用、清除免疫复合物、炎症介质作用、中和与溶解病毒作用。（中和作用 ）总补体活性通过溶血试验测定，溶血素为定量，采用两个溶血素单位。总补体活性通过溶血试验测定，因溶血程度与补体活性呈“S”曲线，50% 溶血时，补体活性变化对溶血程度影响最大，试验最敏感补体C3属于球蛋白，免疫原性很强，可制备特异性抗体。特异性抗体与血 清C3结合形成浊度，通过比浊即可测

47、定血清中C3含量。产生补体的主要器官是肝脏，主要细胞是肝细胞和巨噬细胞。约90%血浆补 体由肝脏细胞合成，少数由其他细胞合成，如C1由肠上皮和单核巨噬细胞 产生，D因子由脂肪组织产生IgM分子为五聚体，激活补体能力较强，不需加人抗人球蛋白，便能使周围 红细胞溶解形成空斑。CH50试验测定经典途径总补体活性补体结合试验用以检测某种抗原或抗体免疫溶血法检测其活性火箭免疫电泳可用于检测单个补体成分含量C1抑制物缺陷会导致遗传性血管性水肿变态反应中，C3a. C5a等过敏毒素会导致组织损伤。流式细胞仪：收获率与纯度之间有对应关系。当被要求分选细胞纯度高，收获率相对低，当要求分选细胞收获率高，其纯 度就相对较低。细胞分选得率与分选的速度密切相关。当分选速度过高，会使有的目的细胞漏检，得率下降；分选速度降低，目的 细胞信号被检时间增加，得率增加。前向散射光信号的强弱与细胞体积大个成正比。侧向散射光信号的强弱与细胞成其他果真粒内部结构的复杂程度相关。T细胞亚群是参与机体免疫调节反应的重要细胞Thl细胞分泌的细胞因子促进细胞免疫，Th2细胞分泌的细胞因子促进体液 免疫对细胞免疫其负调节作用。IL-4、IL-10为Th2细胞分泌的细胞因子，负调节细胞