54-蛋白质含量的测定.ppt

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1、 蛋白质含量的测定蛋白质含量的测定FolinFolin-酚试剂法（酚试剂法（LowryLowry法）和考马斯亮蓝法法）和考马斯亮蓝法（BrodfordBrodford法）法）一一 FolinFolin-酚试剂法（酚试剂法（LowryLowry法）法）目的和要求目的和要求学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。进一步掌握分光光度法求标准曲线、准确测定未知样品、正确使用仪器 原理原理蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如折射率、比重、紫外吸收等测定而得知：或用化学方法，如定氮、双缩脲反应、Folin-酚试剂反应等方法来求算。其中双缩脲法和Folin-酚法是一般实验室中经常使用的方法。它们操

2、纵简便、迅速，不需要复杂而昂贵的设备，又能适合一般实验室的要求，若作一般的浓度测定较为适应。Folin-酚法灵敏度高，较双缩脲法灵敏100倍。本实验采用的是Folin-酚法。Folin-酚法所用的试剂由两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试剂，可与蛋白质中的肽键起显色反应。试剂乙（磷钨酸和磷钼酸混合液）在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸，故有此颜色反应。因此，用Folin-酚法测定蛋白质含量灵敏度较高。实验实验步步骤骤1.标准曲线的制作：按下表操作管 号BSA（300gmL）H2OPr.含量g步 骤12345600.20.40.

3、60.81.01.00.80.60.40.20050100150200250各试管加入试剂甲5.0mL，混合后放置10分钟，加入试剂乙0.5mL，立即混合，37度恒温反应20分钟。以1号为参比，测A750的值。2.样品（小白菜）液的提取称取小白菜1-4克（菜杆2-4克，菜叶1-2克）置于研钵中，加5mL蒸馏水在低温下研磨成匀浆，全部转移至50mL容量瓶中，并定容至刻度，然后抽滤，在3000rpm离心20分钟，上层清液为提取液，待用。样品的测定吸取提取液和稀释250倍的血清液各1.0mL于试管中（三次重复），分别加5.0mL试剂甲，放置10分钟后，加试剂乙0.5mL，立即混匀，恒温37度反应20分钟，测A750的值。管 号小 白 菜T 或 A管 号血 清T 或 A123123小白菜用mgg，血清用mgmL。