一份猪链球菌病的病例报告.docx

《一份猪链球菌病的病例报告.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一份猪链球菌病的病例报告.docx（7页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、猪链球菌病的病例报告1. 发病状况2023 年 1 月 20 日, 天气严寒, 阴雨, 气温降低到 2。某猪场断奶仔猪和育肥猪突然消灭发烧、咳嗽、关节肿大、跛行等, 体重多为 3555 kg, 该场兽医技术人员给病猪投喂阿莫西林、青霉素 460 万 IU+链霉素 1 g/头, 连续 3 d, 病症未见明显好转, 到 25 日龄时, 共发病仔猪 23 头, 育肥猪 8 头, 死亡 6 头, 死亡率 19.35%。经询问畜主了解到该场注射了猪伪狂犬病、猪蓝耳病、猪瘟和口蹄疫疫苗, 未注射其他疫苗。2. 临床病症2.1 猪链球菌病的类型猪链球菌病是一类病，临床常见的有四种类型，分别为化脓型、全身败血

2、型、脑膜炎型和关节炎型。（1） 化脓型链球菌 化脓型链球菌是由 E 群链球菌感染引起，感染 猪多表现全身组织器官的化脓，本类菌感染后一般 在局部定植，免疫系统识别后，白细胞会通过趋化 性向感染部位游走，特别是嗜中性白细胞，能将病 原菌很快吞噬，同时自身也死亡裂解，化作脓细胞， 引发脓肿。初期多见于下颌和咽喉部位的淋巴结， 后期随着病原的迁移会引发其他部位的脓肿。（2） 败血型链球菌 败血型链球菌以 C 群兽疫链球菌发病最多， 感染猪后会在感染部位先行增殖，数量到达确定程 度后会随血流到达全身，形成全身感染，之后不断 分泌毒素，毒素入血后对血细胞造成破坏作用，引 发全身性贫血，同时病灶不断集中，

3、造成全身组 织器官的病变。病猪表现突然发病，体温上升到 4142范围内，全身衰弱，精神萎靡，采食量 下降，皮肤发紫伴有出血点，可视黏膜发绀，局部 猪腹泻，有的病猪表现呼吸急促，呈现腹式呼吸， 黏液性鼻漏，常卧地不起，死亡率较高。（3） 脑膜炎型链球菌 脑膜炎型链球菌感染通常由 C 群链球菌引起， 多发于 2 月龄以内的仔猪，链球菌能损伤血脑屏障， 对脑组织神经细胞造成破坏。病猪体温上升，一般 在 4042.5，神经病症明显，全身抖动，共济失调， 原地转圈或倒走，有的嘴里消灭不自主磨牙，猛力拍打背部病猪可蛙跳，后期消灭四肢麻痹，无法行 走，侧躺于地，四肢作游泳样动作，最终死亡。4关节炎型链球菌

4、关节炎型链球菌对关节部位有特别的亲嗜性， 特别是肘关节、膝关节和趾关节，能对关节滑膜造 成损害，并引发黏液分泌的削减，初期表现行走姿 势转变，跛行，后期关节炎性反响猛烈，局部肿大， 行走困难，影响采食和饮水，体质越来越弱，在猪 群中的地位也越来越低， 易受其他猪的攻击，最终 衰竭而死。2.2 临床诊断病猪表现简洁，多种类型都并存。病猪精神沉郁，食欲废绝，发烧、体温在 41以上，怕冷， 眼结膜潮红，眼睑水肿，流泪，鼻腔内流出黏性和脓性分泌物. 呼吸困难，皮肤发红，耳朵、腹部、后肢内侧等处有红色斑点. 有 5 头病猪关节肿大，跛行，3 头猪消灭神经病症，盲目转圈，四肢运动失调，肌肉震颤，头往后仰。

5、有3 头猪后期并发脑炎病症，颈部强直、角弓反张，坐卧或瘫卧姿势。有 4 头猪类便拉稀，灰白色。3. 病理变化剖检病猪 3 头，淋巴结肿大、充血，特别是颌下、咽部、颈部淋巴结病变明显，关节可见淡黄色化脓性渗出物;浆膜有浆液性炎症变化，脑膜炎病猪病变为脑膜充血、出血，脑膜程度不同地有弥散性出血点;心内膜红肿，心包积液:脾肿大，脾包膜上有纤维素冷静，外表和边缘有梗死灶:肝瘀血肿大， 胆汁黏稠，肺部充血肿胀，膨隆有大量出血点，并有脓样小结节，间质性肺炎，支气管纤维素性炎症，气管内有黏液性分泌物。4. 试验室诊断依据流行特点、临床诊断和病理剖解，以及以往流行病史，初步确定为链球菌。为进一步确诊，采集肺、

6、心、肝、血液等病料，染色镜检，可见单个、成对、长串链状的革兰氏阳性球菌，并进展了细菌分别、培育鉴定和生化试验。为有针对性选择药物、进展了药敏试验。4.1 染色镜检依据不同的病型实行不同的病料。败血型病猪，无菌 操作采集颖的病死猪的心、肝、脾、肾和肺等病料， 1-2 厘米见方大小，放入干净自封袋或容器内，无泄漏包 装，尽快冷藏运送到试验室。淋巴结脓肿型病猪，可用 无菌注射器吸取未破溃的淋巴结脓肿内的脓汁。脑膜炎型 病猪，无菌实行脑脊髓液及少量脑组织。试验室诊断可用采集的病料直接涂片染色镜检，即用病猪的组织或血液或脓汁直接涂片，姬姆萨染色镜检：心血涂片可见单个或成对的圆或椭圆形球菌，有的形成短链,

7、有的 形成长链。肝、脾或脑组织等脏器组织的触片中， 镜检 可见以单球菌与双球菌居多，短链较少。姬姆萨染色：涂片或触片置于空气中 自然枯燥后，滴数滴姬姆萨染色液于片 上， 经 1-2 分钟后，再加与染液等量 的蒸馏水，使与染液混匀，5 分钟后用 水冲洗，自然枯燥后镜检。4.2 细菌分别培育无菌实行疑似链球菌病死猪肝、肾或关节囊液(关节炎 型)或化脓组织分别在鲜血琼脂平板上划线分别培育,37培 养 24 小时。涂片,经革兰染色后镜检，可见紫色短链球 形或卵圆型细菌，单个或成对排列，无芽孢，有的有荚 膜。革兰染色：1涂片:在载玻片上滴一滴生理盐水，然后左手拿平板右手持接种环，挑取当个菌落涂片。2枯燥

8、:涂片后在室温下自然枯燥，也可在酒精灯上略加温，使之快速枯燥，但勿靠近火焰。3固定:常用高温进展固定。即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动34 次，共约 34 秒。要求玻片温度不超过60，以玻片反面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。4 染色: a.初染: 加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。b.媒染: 滴加碘液冲去残水，并掩盖约一分钟，水洗。c.脱色: 将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不消灭紫色时为止，约 20-30 秒，马上用水冲净酒精。d.复染: 用番红液染 1-2 分钟，水洗。e. 镜检: 枯燥后，置油镜观看。4.3 生化鉴定以

9、无菌操作将分别菌于生化糖发酵管做穿刺接种， 37 培育 2428 h 后观看结果。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、水杨苷、精氨酸试验阳性，甘露醇、阿拉伯糖、菊糖、木糖、山梨糖、鼠李 糖、肌醇、6.5%氯化钠、淀粉、甘油试验阴性。与链球 菌的生化特性相符，说明该分别菌为链球菌。4.4 ELISA 法（1） 采样方法 承受前腔静脉采血，采血部位位 于左右两侧的颈静脉与腋静脉至第 1 对肋骨间的胸 骨柄集合处。首先对猪采血部位进展剪毛，用5%碘 酒消毒后再用 75%的酒精消毒，待皮肤枯燥后采 血，整个采血过程均为无菌操作，承受未添加抗凝剂的一般采血管进展采集。（2） 血清样品制备 对于采集好的血液，在环

10、境 温度较高的采样地区， 静置于室温 68 h；在环境温 度较低的采样地区，于 37 培育 68 h。待血清析 出后再于 3 000 r/min 离心 510 min，无菌操作将血 清分别分装于 1.5 mL 已灭菌的离心管内，-20 保 存待检。（3） 血清 ELISA 抗体检测a. 试验预备。分别将待检血清和检测试剂盒从 冰箱内取出置于室温预热， 待血清完全溶化后，用混 样仪将血清充分混合均匀。洗涤液和稀释液依据检 测试剂盒说明书要求配好备用。b. 加样。依据样本数量，取所需板条。每板设 阴、阳性各 2 孔，分别参与阴、阳性比照血清 100 L。其余孔参与 99 L 样本稀释液，设 2 孔

11、为空白比照，参与 已灭菌的超纯水；其它为样品孔参与 1 L 样品。c. 温育。加样后，盖板膜，猪链球菌病检测反 应板置于 37 温育 30 min。d. 洗板。甩去孔内液体，依据说明书要求设定 好程序进展洗涤。e. 加酶。洗涤完成后，拍干净孔内剩余液体， 每孔加酶标记物 100 L。f. 温育。检测反响板置于 37 温育 30 min。g. 洗板。甩去孔内液体，依据说明书要求设定 好程序进展洗涤。h. 显色。每孔加显色剂 A、 B 各 50 L，振荡混 匀，检测反响板置于37 避光反响 15 min。i. 终止。显色完成后，每孔加终止液 50 L，充 分振荡混匀，终止后即读数。j. 读数。猪链

12、球菌病抗体检测反响板于 450 nm/630 nm 双波长检测，读取各孔吸光度值OD 值。 2.4 结果判定 依据试剂盒说明书推断标准要求， 当样品 OD 值0.35 时判为阳性，样品 OD 值0.3 时判为阴性， 当0.3OD 值0.35 时为可疑。4.5 溶血试验将菌落接种于 5%兔鲜血平板， 37 培育 24 h 后观看。 溶血:细菌在血平板上培育时，菌落四周形成的狭小(12mm)、草绿色溶血环。 溶血环中的红细胞未完全溶解。可形成 溶血环的细菌如甲型溶血性链球菌、肺炎链球菌。 溶血:细菌在血平板上培育时，菌落四周形成的宽大(24mm)、界限清楚、完全透亮的溶血环。 溶血环中的红细胞完全

13、溶解。可形成 溶血环的细菌如乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等。 溶血:就是不溶血。溶血试验可以进一步确定链球菌的致病性强弱。4.6 药敏试验1将分别菌株大量接种于鲜血琼脂平板上,用灭菌的镊子夹取直径为 6mm 浸有以下药物的枯燥滤纸片 分别贴于平皿培育基的外表,各纸片中心相距约 24mm,纸片距平皿边缘约 15mm,置 37温箱内培育 24 小时，分别测定抑菌环大小。判定标准为抑菌环直径在 15 mm 以上为高度敏感、1015 mm 为中度敏感、10 mm 以下为低度敏感，无抑菌环为不敏感。4.5 PCR 鉴定2（1） DNA 的提取从鲜血琼脂平板上挑取链球菌单菌落接种于含 5%生牛血清的

14、THB 培育基，37”C 摇床培育 18-24h。取细菌培育物 1.5 mL 于 EP 管中， 12023rpm 离心 2 min,浓缩菌液 2-3 次。沉淀用 TE 缓冲液 567 L 重悬，加 10%SDS 30uL 和 20 mg/ml 蛋白酶 K35uL,混匀，37C 水浴 1h, 加人 5mol/L NaCl 100uL充分混匀，再加人 CTAB/NaCI 溶液 80uL 混匀，65C 水浴 10 min,加 等体积的酚/氯仿/异戊醇(25: 24: 1),混匀， 12023rpm 离心 5min,吸上清，转移到 EP 管中， 加 0.6 体积的异丙醇，12023rpm 离心 10m

15、in,弃上 清，沉淀用 70%乙醇 1 mL 洗两次， 弃上清，室温 放置使乙醇挥发干净，加 100uLddH2O 溶解沉淀， 所得溶液即为 DNA 模板。（2） PCR 反响PCR 反响体系为 25uL: 10xPCR buffer (含 Mg2*) 2.5uL, 10pMdNTP 1 L,模板 1 L, Taq DNA 聚合酶 0.25uL (1 U)，上下游引物(50umol/L)各 0.5uL,加ddH2O 定容至 25uL.反响条件为 94C 预变性 5 min; 94C 60s, 52.5“C60s, 72C 90s, 30 个循环，最终72C 延长10min。（3） PCR 产物

16、电泳a. 50TAE 取 10ml 稀释成 500ml，取 50ml 溶解 0.5g 琼脂糖。电炉上煮沸后参与 EB 5ul。另外 450ml TAE 倒入电泳槽中。b. 用透亮胶封闭电泳板，琼脂糖溶液冷却至温热时，倒入带梳子的电泳板中，冷却后，拔出梳子，放入电泳槽中。c. 加样：PCR Marker：1ul Marker+1ul Loading Buffer+4ul TAE 混匀于塑料膜上，参与孔中。PCR 样品：5ul 样品 DNA+1ul Loading Buffer 混匀后依次参与孔中。d. 接上电源，电压 120V，电流 50mA 进展电泳。e. 电泳约 1 小时后，紫外灯检测。4.

17、6 多重 PCR 反响2参考上述 PCR 反响 体系中 PCR buffer (含 Mg2+)、Taq DNA 聚合酶的 用量，将 dNTP 和模板的量适当提高，重点优化 3 种引物之间的比例和退火温度。先建立并优化单个 靶基因 PCR 检测体系，继而进展多重PCR 体系组 合和条件优化。固定 EF 引物的用量，转变另外两引物的比例。优化的PCR 反响体系为: 10xPCR buffer (含Mg*) 5uL, 2.5 mmol/L dNTP 3uL, 10 umol/L 上下游引物Sly 0.6uL, MRP、EFL|物各 1.0uL, DNA 模板 1.5pL, Taq DNA 聚合酶 0

18、.25uL (1 U),加 ddH2O 定容至 50uL.扩增参数: 94C 预变性 5 min, 94C50s, 50.3C 60s, 72C 90s, 35 个循环，最终 72C 延长 10 min. 此条件下，三种毒力基因均可获得有效特异的扩增。5. 治疗对于败血型的猪链球菌病病猪， 承受药物进展治疗，药物选择 3104U 的青霉素、30 mg 磺胺类,2 次/d， 连续 治疗 4 d；对于关节炎型猪链球菌病病 猪，将青霉素、庆大霉素和适量的氨基 比林加以混合之后注射，2 次/d； 对于脑膜炎型病猪， 用磺胺类药物进展治疗，同时赐予强心和补液； 对于重症的病猪，可静脉注射生理盐水、葡萄糖

19、和 VC，1 次/d，连续治疗 3 d。 在初次注射 时，可以适当增加剂量，待病猪病情好 转之后再将剂量削减。 对于生的仔 猪， 用小诺霉素与柴胡混合药物进展 注射治疗；假设仔猪存在神经病症，依据 11 的比例利用等渗盐水将增效磺胺 钠稀释后注射； 假设病猪处于刚刚断奶的阶段， 可用氯丙嗪或者恩诺沙星和 柴胡的混合药物进展注射治疗3。6. 预防措施(1) 隔离病猪治疗、对疑是患病猪也进展隔离治疗。淘汰治不好的染病猪。对病死猪进展深埋、发酵、燃烧等无害化处理”。(2) 加强饲养治理，降低饲养密度，保证饲料和饮水的质量。饲料要做到不发霉，饮水要做到清洁。改善饲养环境加强猪舍内通风换气保持 舍内环境

20、温温度在猪只适宜范围之内。准时去除积粪和清扫圈舍，保持圈舍地面的干净。并定期进展驱虫、灭蚊。灭鼠的工作。(3) 去除养猪环境中易引起损伤的因素如针头、碎玻璃、铁片等。削减对猪的各类应激。(4) 去除传染源。对患病猪舍加强消毒工作，用卫可，百胜进展消毒。对于发病期间猪所使用的食槽及饲养治理用具以及病猪和带菌猪的排 泄物、分泌物进展严格的消毒，切断病毒的传播途径，防止病毒的进一步传染与集中。(5) 药物预防。可在饲料中适当添加一些抗菌素药物，如青霉素、氯霉素、红霉素、磺胺类和头孢类药物。(6) 加强检疫监视，严格引种。坚持自繁自养和“全进全出”的饲养方式。完善繁育体系，建立良种生殖场，解决猪源缺乏

21、问题。假设必需引种 -定要从正规的种猪场引种，并经检疫合格前方可引进。(7) 科学的免疫程序，种猪在 60 日龄首次免疫接种猪链球菌病氢氧化铝胶苗， 以后每年春秋各免疫1 次，不管大小猪一律机内成皮下注制5 m L/(kg 体重)， 浓缩菌苗注射 3 mL/kg 体重，注射后 21 d 产生免疫力，免疫期约 6 个月 或选用链球弱，猪肌内或皮下注射 1mL/头即可产生免疫力。母猪于产前接种，种公猪接种 2 次/年,仔猪在 1-2 月龄进展首次免疫,注射后 14 d 产生免疫力,免疫期 6 个月。7. 小结可对当地猪场进展血清学普查，确定当地流行的血清型，使免疫预防有针对性，并组织开展猪链球菌疫

22、情监测，准时把握本地疫情状况。对于阳性猪场应定期对猪群进展血清学监测，一旦觉察阳性猪则应准时实行检疫、注苗以及淘汰净化。假设觉察的病原血清型,必需进展病原菌的分别鉴定。加强屠宰检疫，产地检疫， 加强市场及流通环节的检疫监管工作，严禁未经动物防疫监 督机构检疫的动物及其产品上市。对觉察的病死动物，病害肉一律进展无害化处理，对其污染的环境进展彻底消毒。应建立安全快速的病料运输效劳,使疫情得到准时诊断,削减经济损失， 结合细菌分别与鉴定，对 疫情进展准时确诊，觉察猪链球菌病等人畜共患病，准时向有关部门通报，并实行相应的防治措施加强猪链球菌病防治的技术指导和宣传，通过对猪 链球菌病防治技术的宣传组织工作，让宽阔养殖者准时了解 猪链球菌病防治根本常识，提高群众防病意识及技术人员的 动物疫病防治水平。建立有效的兽医效劳体系和网络，同时 协作高质量的饲料和卫生治理。1 猪链球菌病的试验室诊断及其综合把握 王传清，李星山东省畜牧兽医总站，山东 济南 2500222 猪链球菌的鉴定及其主要毒力基因的多重 PCR 检测聂小想，沈志强，管字， 李建亮，逄媛,崔言顺，刘吉山，王艳3 赖少青.猪链球菌病诊断与治疗.畜牧兽 医科技信息,2023(01):84