实验8-9 脯氨酸含量、电导率的测定.ppt

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1、抗性生理植物对胁迫的响应机制 渗透调节（脯氨酸、甘氨酸甜菜碱、可溶性糖）活性氧代谢（抗氧化酶、抗氧化小分子）胁迫蛋白（热激蛋白、抗冻蛋白等）离子平衡和区域化（盐胁迫）水通道蛋白（盐胁迫）类黄酮、苯丙氨酸（紫外胁迫）脯氨酸含量的测定前 言 逆境条件下（干旱、盐碱、热、冷害、冻害）,植物体内脯氨酸（proline,Pro）含量会显著增加，并且积累指数与植物的抗逆性有关，因此脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。酸性条件下,茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物,产物在520nm 波长下具有最大吸收峰。用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成

2、红色,再用甲苯萃取，则色素全部转移至甲苯中,颜色的深浅即表示脯氨酸含量的高低。实验原理材料、仪器及试剂（一）、实验材料小麦幼苗：对照、100mM、200mM NaCl处理48h；5%、15%PEG-6000处理48h（二）、仪器设备天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅主要试剂1.3%磺基水杨酸；2.冰醋酸；3.甲苯；4.2.5%酸性茚三酮溶液（60 ml冰醋酸、16.4 ml磷酸加蒸馏水定容至100 ml，再加入2.5 g茚三酮，溶解后避光保存）；5.脯氨酸标准母液：精确称取25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入500 ml容量瓶中，加蒸

3、馏水定容至刻度，此标准液中脯氨酸浓度50 g/ml。方法及步骤（一）样品的测定 1称取不同处理的小麦叶片各0.5 g，于2.5 ml 3%磺基水杨酸试管中，沸水浴中提取10 min。2吸取1ml上清于另一试管中，加入1 ml水、1 ml冰乙酸、2 ml 2.5的酸性茚三酮，混合液于沸水中显色30 min。3.冷却后加入4 ml甲苯，摇荡30S，萃取完全后用吸管轻轻吸取上层红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在520nm比色。4.用0.5-5g/ml L-脯氨酸作标准曲线。（二）标准曲线的绘制1标准液中脯氨酸浓度50g/ml。2取6个50 ml容量瓶，分别加入脯氨酸原液 0.5、1.0、1

4、.5、2.0、2.5、3.0 ml，用蒸馏水定容至刻度并摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 g/ml。3分别吸取1ml系列标准浓度的脯氨酸溶液于6个试管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml 2.5的酸性茚三酮,于沸水浴中加热30min。4冷却后准确加入4ml甲苯,振荡30S,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液。5轻轻吸取各管上层甲苯溶液至比色杯中,以甲苯为空白对照,于520nm进行比色。五、结果计算 根据标准曲线计算出脯氨酸的浓度,然后换算出样品中脯氨酸的含量（g脯氨酸/gFW）。脯氨酸含量（g.g-1）c(va)wC为由标准曲线查得脯氨酸含量 g；V为

5、提取液总体积ml;a为测定液体积ml；W为样品质量g逆境胁迫对植物质膜透性的影响 电导率法原 理 植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。当植物受到逆境影响时，如高温或低温，干旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。实验步骤 1、取0.2 g对照和盐或PEG6000处理的小麦叶片，切成约1cm小段；2、用双蒸水冲洗 3 遍以除去表面粘附的电解质；3、加10 ml双蒸水，25振荡温育1小时，期间经常摇动，测定此时的电导率为C1；4、将盛有根的试管100煮沸 15 min，冷却到室温后，测定此时的电导率为C2；5、相对电导率根据公式计算得出：Relative ion leakage=(C1-C0)/(C2-C0)*100（注C0为双蒸水的电导率）