XXXXXXX片检验方法验证方案.docx

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1、XXXXXXX片检验方法验证方案制定：质量部QC签名：日期：审核：质量部QC主管签名：日期：批准：质量部经理签名：日期：目录1概述22目的23验证范围和时间计划24职责25详述26偏差漏项分析127验证结果评价与建议128再验证周期129附录12第1页共13页1概述XXXXXXX片适用于敏感菌引起的泌尿生殖系统感染，包括单纯性、复杂性尿路感染、细菌性前列腺炎、淋病奈瑟菌尿道炎或宫颈炎（包括产酶株所致者）。呼吸道感染，包括敏感革兰阴性杆菌所致支气管感染急性发作及肺部感染。胃肠道感染，由志贺菌属、沙门菌属、产肠毒素大肠杆菌、亲水气单胞菌、副溶血弧菌等所致。另可治疗伤寒，骨和关节感染，皮肤软组织感染

2、和败血症等全身感染。我公司原执行标准为中国药典2010年版，中国药典2015年版实施后，中国药典2010年版XXXXXXX片标准同时停止使用。与原执行标准对比，中国药典2015年版（893页）中鉴别、溶出度、有关物质和含量测定项目检验条件略有变化，具体标准见附录2o2目的通过一系列实验证明中国药典2015年版（二部893页）检验方法，以及按此制定的公司质量标准和检验规程具有准确性和重现性，按此方法在我公司QC实验室检验能始终如一地获得符合客观实际的数据和结果，确保检验结果真实可信。3验证范围和时间计划验证预计执行日期：2015年12月01日2015年12月04日2015年12月07日2016年

3、01月23日2016年01月25日2016年01月29日适用于中国药典2015年版（二部893页）中制定的检验方法的验证。验证前准备及确认工作（文件、仪器、对照品、试剂等）开始三次验证；数据汇总、完成验证报告：4职责验证组长QC主管，负责起草方案、人员培训、组织验证实施、收集验证数据、评价验证结果、起草验证报告。验证组员QC,负责验证中的试验工作。QA,负责验证实施过程中的质量监控和验证文件归档。质量部经理批准检验方法验证方案，批准最后的检验方法验证报告。5详述5.1 验证培训在方案实施前，对参加方案实施的人员进行本验证方案的培训，做好培训记录，并将培训记录附于验证报告后。培训记录见附录1。5

4、.2 验证原则依据中国药典2015年版第四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则与药品生产质量管理规范（2010年修订）第二百二十三条规定，应通过方法确认来证明该标准方法在本实验室条件下的适用性。按照中国药典2015年版（二部893页）标准内容，现对标准中发生变更的液相鉴别【专属第2页共13页性】、溶出度【专属性、线性范围（40%160%）、溶液稳定性、溶出曲线】、有关物质【专属性、杂质A定量限、杂质A精密度、杂质A准确度、杂质A标准曲线（0.006%0.45%）、溶液稳定性】、含量测定【专属性、定量限、精密度、线性范围（0.03%125%）、准确度、重复性、精密度】进行检验方法确认。溶出

5、度采用紫外-可见分光光度法测定，鉴别、有关物质和含量测定采用高效液相色谱法测定。5.3 确认工作确认目的:确认实验所要使用和涉及的仪器设备符合要求，并在有效期内：确认实验所要使用和涉及的对照品符合要求，并在有效期内；确认实验所要使用和涉及的容器和试剂符合要求。确认步骤及结果:分别检查以上仪器设备、对照品以及容器试剂，将检查结果填写入附录3、附录4。合格标准:实验所需使用的仪器设备均完好正常，校验合格并在有效期内：实验所需使用的对照品来源于法定机构，并在有效期内：实验所需使用的容器和试剂符合实验要求，不会对实验造成污染。5.4 验证步骤5.4.1 待确认液相鉴别测定方法取本品的细粉适量，用0.1

6、mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星（按Ci8H20FN3O4计）0.1mg的溶液，滤过，取滤液适量，用流动相稀释制成每1ml中含左氧氟沙星（按G8H2oFN304计）0.01mg的溶液，作为供试品溶液；另取氧氟沙星对照品，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取适量，用流动相稀释制成每1ml中约0.02mg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）测定。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以硫酸铜D-苯丙氨酸溶液（取D-苯丙氨酸1.32g与硫酸铜1g,加水1000ml溶解后，用氢氧化钠试液调节pH值至3

7、.5）-甲醇（82:18）为流动相：柱温40,检测波长为294nm。精密量取供试品溶液和对照品溶液各203，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液中左氧氟沙星峰（后）的保留时间一致。验证项目1：专属性试验方法:溶剂空白溶液：量取0.1mol/L盐酸溶液5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为溶剂空白溶液。辅料空白溶液：按照按处方比例取空白辅料8mg,置200ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，混匀，滤过，精密量取续滤液5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，滤过作为辅料空白溶液。对照品溶液：取氧氟沙星对照品10mg（按净含量折算），置1

8、00ml量瓶中，加0.1mol/l盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，滤过，精密量取续滤液5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照品溶液（0.02mg/ml）（供试品溶液：取本品细粉14mg（约相当于左氧氟沙星10mg）,置100ml量瓶中，加盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，滤过，精密量取续滤液5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为第3页共13页供试品溶液（0.01mg/ml）o照SOP-QTY006高效液相色谱法，精密量取上述溶液各203，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，溶剂在在2.5min之前出峰，辅料空白溶液中除溶剂峰外无其他峰，因此溶剂和辅料对检查结果无影响

9、，供试品溶液主峰保留时间与对照品溶液中左氧氟沙星峰（后）的保留时间一致。结果:将结果填入附录5合格标准:溶剂空白溶液和辅料空白溶液在主峰位置应无色谱峰，供试品溶液主峰保留时间与对照品溶液中左氧氟沙星峰（后）的保留时间应一致。5.4.2 待确认溶出度测定方法取本品，照溶出度与释放度测定法（中国药典2015年版通则0931第一法），以盐酸溶液（9-1000）900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml,滤过，精密量取续滤液适量，用盐酸溶液（9-1000）定量稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星（按Ci8H20FN3O4计）5.5pg的溶液，照紫外-可见分光光度法（中

10、国药典2015年版通则0401）,在294nm的波长处测定吸光度，另精密称取左氧氟沙星对照品适量，加盐酸溶液（9-1000）溶解并定量稀释制成每1ml中约含5.5四的溶液，同法测定，计算每片的溶出量。限度为标示量80%,应符合规定。验证项目1：专属性方法:按处方比例取空白辅料13mg,置100ml量瓶中用盐酸溶液（9-1000）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml,置100ml量瓶中，用盐酸溶液（9-1000）溶解稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。取XXXXXXX片细粉78mg,置100ml量瓶中用盐酸溶液（9-1000）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过,精密量取续滤液1ml,置100

11、ml量瓶中，用盐酸溶液（9-1000）溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取左氧氟沙星对照品约11mg,置100ml量瓶中，加用盐酸溶液（9-1000）溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置100ml量瓶中，加用盐酸溶液（9-1000）稀释至刻度，混匀，作为对照品溶液。取上述三种溶液，照SOP-QTY002紫外-可见分光光度法，在190-400nm范围内扫描。（附紫外扫描图谱）结果:将结果填入附录6合格标准:供试品溶液与对照品溶液在294nm波长处应有最大吸收，空白溶液在294nm波长处应无吸收或吸收度与对照品溶液吸收度比值小3.0%。验证项目2：线性范围方法:精密称定取左氧氟沙星对照品约

12、11mg,置100ml量瓶中，加用盐酸溶液（9-1000）溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml,分别置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9-1000）稀释至刻度，混匀，制成2.2|jg/ml、3.3pg/ml、4.4pg/ml5.5pg/ml6.6pg/mk7.7Rg/mU8.8pg/ml的溶液，照SOP-QTY002紫外-可见分光光度法，在294nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标（Y）,对照品浓度（pg/ml）为横坐标（X）,绘制标准曲线。第#页共13页结果:将结果填入附录7合格标准:吸光度与浓度应呈线性关系，即R20.999。验证项目3：

13、溶液稳定性方法、取XXXXXXX片细粉78mg,置100ml量瓶中用盐酸溶液（9T000）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过,精密量取续滤液1ml,置100ml量瓶中，用盐酸溶液（9-1000）溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。室温下，放置0时、2h、4h、6h、8h测定溶液吸光度。照SOP-QTY002紫外-可见分光光度法，分别于室温下放置0、2、4、6、8和12小时，在294nm处测定吸光度。以吸光度计算相对标准差。结果:将结果填入附录8.合格标准:计算0、2、4、6、8和12小时供试品吸光度RSD42.0%。验证项目4：溶出曲线方法,取12片，依法操作，经5、10、15、20、30分钟时，

14、取溶液10ml,滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液适量，用盐酸溶液（9-1000）定量稀释制成每1ml中约含左氧氨沙星（按Ci8H20FN3O4计）5.5pg的溶液，同时补充溶出介质10ml；另精密称取左氧氟沙星对照品适量，加盐酸溶液（9-1000）溶解并定量稀释制成每1ml中约含5.5用的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液，在294nm波长处分别测定吸收度，计算各取样点每片的溶出量。取样品3批，对其溶出行为进行研究。结果:将结果填入附录9o合格标准:计算样品溶出曲线间的f2因子，f2不小于50,即表示样品溶出行为相似。5.4.3 待确认有关物质测定方法十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱：以醋酸镇高

15、氯酸钠溶液（取醋酸镂4.0g和高氯酸钠7.0g,加水1300ml使溶解，用磷酸调节PH值至2.2）-乙睛（85：15）为流动相A；以乙睛为流动相B；按下表按下表进行线性梯度洗脱。柱温为40；流速为1.0ml/min。取本品细粉适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星（按G8H20FN3O4计）1.0mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取适量，用0.1mol/L盐酸溶液定量稀释制成每1ml中含2Pg的溶液，作为对照溶液。精密量取对照溶液适量，用0.1mol/L盐酸溶液定量稀释制成每1ml中含0,2用的溶液，作为灵敏度溶液。另精密称取杂质A对照品约15mg

16、,置100ml量瓶中，加6moi/L的氨溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为杂质A对照品溶液。称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E对照品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星1.0mg、环丙沙星和杂质E各5Pg的混合溶液，量取10pl注入液相色谱仪,以294nm为检测波长，记录色谱图，左氧氟沙星出峰时间约为15分钟。左氧筑沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星与环丙沙星峰的分离度应分别大于2.0与2.5。量取灵敏度溶液10pl注入液相色谱仪，以第5页共13页294nm为检测波长，主成分色谱

17、峰峰高的信噪比大于10。再精密量取供试品溶液、对照溶液和杂质A对照品溶液各103，分别注入液相色谱仪，以294nm和238nm为检测波长，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质A(238nm检测)按外标法以峰面积计算，不得过标示量的0.3%。其他单个杂质(294nm检测)峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(0.3%),其他各杂质(294nm检测)峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3.5倍(0.7%)o时间(min)流动相A(%)流动相B(%)01000181000257030397030401000501000验证项目1：专属性方法、溶剂空白溶液：取用0.1mol/L盐酸溶液作

18、为溶剂空白溶液。辅料空白溶液：按照XXXXXXX片工艺规程，取空白辅料30mg,置100ml量瓶中加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，滤过作为辅料空白溶液。对照品溶液：取左氧氟沙星对照品25mg,精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置25量瓶中(0.12mg/ml),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作对照品溶液。供试品溶液：取本品细粉140mg,精密称定，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液(1.0mg/ml)系统适用性溶液：称取环丙沙星对照品和杂质E对照

19、品各25mg置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取1ml置50ml量瓶中(5|jg/ml),另称取左氧氟沙星对照品50mg置上述同一50ml量瓶中(1.0mg/ml),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液。取上述各溶液，照SOP-QTY006高效液相色谱法，量取103注入液相色谱仪，以294nm为检测波长，记录色谱图。测定1)未破坏样品：精密量取溶剂空白溶液、辅料空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各10川注入液相色谱仪，记录色谱图。2)高温破坏试验：取XXXXXXX片细粉140mg,精密称定，置烧杯中，放置在200条件下破坏

20、3h后，放冷后，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并转移100ml量瓶中，稀释至刻度，混匀，滤过作为供试品溶液。另取空白辅料同法制备。3)强碱破坏试验：XXXXXXX片细粉140mg,精密称定，至100ml量瓶中，加入2moi/L的NaOH溶液5mL，置沸水浴中8h后，取出放冷至室温，用2mol/L的HCI溶液中和至溶液的pH值为7,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，滤过，作为供试品溶液。另取溶剂和空白辅料同法制备。4）强酸破坏试验：取XXXXXXX片细粉140mg,精密称定，至100ml量瓶中，加入2moi/L的HCI溶液5mL,置沸水浴上破坏6h后，取出放冷至室温，用2moi/

21、L的NaOH溶液中和至溶液pH值为7,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，滤过，作为供试品溶液。另取溶剂和空白辅料同法制备。5）强氧化破坏试验：XXXXXXX片细粉140mg,精密称定，至100ml量瓶中，加入H2O2溶液5mL,置60c水浴中放置6h后，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，滤过，作为供试品溶液。另取溶剂和空白辅料同法制备。6）强光照射破坏试验：XXXXXXX片细粉140mg,精密称定，至100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，置于光照仪下，照度为4500500LX,照射48h后，取出，补力10.1mol/L盐酸溶液至刻度

22、，摇匀，滤过，作为供试品溶液。另取空白辅料同法制备。结果将结果填入附录1015。合格标准:空白溶剂、空白辅料在主峰位置无干扰，系统适用性溶液左氧氟沙星出峰时间约为15min,左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星与环丙沙星峰的分离度应分别大于2.0与2.5o各条件下以主成分计算，一般降解为520%左右，要求主峰与杂质、杂质之间分离度符合要求。验证项目2：杂质A定量限方法、精密称取杂质A对照品约15mg,置100ml量瓶中，加6moi/L的氨溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，制成浓度为每1ml中含0.18mg的溶液，再分别倍倍稀释，照SOP-QTY006高效液相色谱法，按上述色谱条件（

23、按238nm检测）进样测定，进样体积为103。分别配制最低定量限浓度的溶液6份，记录色谱图，计算峰面积和保留时间的相对标准差。结果:将结果填入附录16。合格标准:信噪比为10:1时的样品浓度即为最低定量限。所测6份最低定量限溶液主峰的保留时间的相对标准差（RSD）应不大于2.0%,主峰面积的相对标准差（RSD）应不大于5.0%。验证项目3：杂质A精密度左氧氟沙星杂质A对照品溶液：精密称取杂质A对照品约15mg,置100ml量瓶中，加6moi/L的氨溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2mI,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，作为杂质A对照品溶液（3.0pg/ml）照S

24、OP-QTY006高效液相色谱法，分别量取103注入液相色谱仪，记录色谱图。结果:将结果填入附录17。合格标准:连续进样6次，以峰面积计算RSDW5.0%。验证项目4：准确度试验（杂质A）方法:取左氧氟沙星杂质A对照品15mg,置100ml量瓶中，加6mol/L的氨溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作左氧氟沙星杂质A对照品贮备溶液。称取空白辅料40mg至100ml量瓶中。精密量取1ml、2ml、3ml,分别置同一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，平行配制3份。分别作为浓度水平为50%、100%,150%的供试品溶液。照SOP-QTY006高效液相色谱法，精密量取供试品溶液和杂质A

25、对照品溶液各10川，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算供试品溶液杂质A含量。结果:将结果填入附录18。合格标准:各浓度下的平均回收率均应在92%-105%之间，9个回收率数据的相对标准差(RSD)应不大于10%验证项目5：杂质A标准曲线方法:杂质A对照品约15mg,置100ml量瓶中，加6mol/L的氨溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度,摇匀，作为杂质A对照品贮备液溶液(0.15mg/ml)精密量取2mL置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，作左氧氟沙星杂质A对照品溶液(3.0|jg/ml)。再精密量取对照品溶液2ml置100ml、5ml置100mL5ml置50ml、5m

26、l置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成浓度为0.06pg/ml,0.15pg/ml,0.30pg/ml,0.60pg/ml的溶液，再精密量取对照品贮备溶液3ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成浓度为4.5pg/ml的溶液。照SOP-QTY006高效液相色谱法，分别吸取103注入色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标(Y),对照品浓度(pg/ml)为横坐标(X),绘制标准曲线。结果:将结果填写入附录19。合格标准:峰面积与浓度应呈线性关系，即RN0.999。验证项目6：溶液稳定性方法、左氧氟沙星杂质A对照品溶液：精密称取杂质A对照品约15mg,置100ml量瓶中，加6moi/L的

27、氨溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度,摇匀，作为杂质A对照品溶液(3.0pg/ml)。供试品溶液:取本品细粉140mg(约相当于XXXXXXX1OOmg),精密称定，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液(1.0mg/ml)o对照溶液：精密量取供试品溶液2ml,置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为对照溶液(2.0pg/ml)o灵敏度溶液：精密量取对照溶液适量，用0.1

28、mol/L盐酸溶液定量稀释制成每1ml中含0.2四的溶液，作为灵敏度溶液。系统适用性溶液：称取环丙沙星对照品和杂质E对照品各25mg置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取1ml置50ml量瓶中(5的/ml),另称取左氧氟沙星对照品50mg置上述同一50ml量瓶中(1.0mg/ml),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液。照SOP-QTY006高效液相色谱法，精密量取系统适用性溶液10川注入液相色谱仪，以294nm为检测波长，记录色谱图，左氧氟沙星出峰时间约为15min左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星与环丙沙星峰的分离度应

29、分别大于2.0与2.5。量取灵敏度溶液103注入液相色谱仪，以294nm为检测波长，主成分色谱峰峰高的信噪比大于10。再精密量取供试品溶液、对照溶液和杂质A对照品溶液各10pl,分别注入液相色谱仪，以294nm和238nm为检测波长，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质A（238nm检测）按外标法以峰面积计算，不得过标示量的0.3%。其他单个杂质（294nm检测）峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（0.3%）,其他各杂质（294nm检测）峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3.5倍（0.7%）,分别于室温下放置0、3、6、9、12和24小时，分别精密量取上述溶液各10pl注入液

30、相色谱仪，记录色谱图。结果:将结果填入附录20。合格标准:计算0、3、6、9、12和24h小时杂质含量，杂质变化不超过0.05%。5.4.4 待确认含量测定方法色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱：以醋酸铁高氯酸钠溶液（取醋酸铁4.0g和高氯酸钠7.0g,加水1300ml使溶解，用磷酸调节PH值至2.2）-乙精（85：15）为流动相；检测波长为294nm。称取左氧氨沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E对照品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星0.1mg、环丙沙星和杂质E各5Pg的混合溶液，取10pl注入液相色谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰保留

31、时间约为15分钟。左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星与环丙沙星峰之间的分离度应分别大于2.0与2.5o测定法取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于左氧氟沙星，按G8H20FN3O4计0.1g）,置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml,置50ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取103注入液相色谱仪，记录色谱图：另取左氧氟沙星对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算。验证项目1：专属性方法:辅料空白溶液：按照XXXXXXX片工艺规程，取空白辅料30mg,置100ml量瓶中加0.1m

32、ol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，滤过作为辅料空白溶液。溶剂空白溶液：取用0.1mol/L盐酸溶液作为溶剂空白溶液。对照品溶液：取左氧氟沙星对照品25mg,精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置25量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作左氧氟沙星对照品溶液（0.1mg/ml）,供试品溶液：取本品细粉140mg,精密称定，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置50量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（0.1mg/ml）。系统适

33、用性溶液：称取环丙沙星对照品和杂质E对照品各25mg置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取2ml置100ml量瓶中（5pg/ml）,另称取左氧氟沙星对照品10mg置上述同一100ml量瓶中（0.1mg/ml）,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液。第9页共13页环丙沙星对照品溶液：称取环丙沙星对照品和杂质E对照品各25mg置100ml量瓶中，加O.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取2ml置100ml量瓶中（5pg/ml）,作为环丙沙星对照品溶液。取上述各溶液，照SOP-QTY006高效液相色谱法，量取10

34、3注入液相色谱仪，以294nm为检测波长，记录色谱图。结果将结果填入附录21。合格标准:空白溶剂、空白辅料在主峰位置无干扰，系统适用性溶液左氧氟沙星出峰时间约为15min,左氧氨沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星与环丙沙星峰的分离度应分别大于2.0与2.5。验证项目2：定量限方法、取左氧氟沙星对照品约25mg,精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置25量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为每1ml中含0.1mg的溶液，再分别倍倍稀释，照SOP-QTY006高效液相色谱法，按上述色谱条件进样测定，进样体积为103。分

35、别配制最低定量限浓度的溶液6份，记录色谱图，计算峰面积和保留时间的相对标准差。结果:将结果填入附录22。合格标准:信噪比为10:1时的样品浓度即为最低定量限。所测6份最低定量限溶液主峰的保留时间的相对标准差（RSD）应不大于2.0%,主峰面积的相对标准差（RSD）应不大于10.0%。验证项目3：线性范围方法:取左氧氟沙星对照品25mg,精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为对照品贮备溶液（0.5mg/ml）精密量取5ml置25量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（0.1mg/ml）再精密量取对照品溶液1ml置100

36、ml、1ml置10ml、5ml置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，制成浓度为1.0pg/ml、10pg/ml、50pg/ml对照品溶液；再量取1.0pg/ml溶液3ml置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，制成浓度为0.03|jg/ml溶液；再量取对照品贮备液5ml置20ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，制成浓度为125pg/ml对照品溶液。照SOP-QTY006高效液相色谱法，分别吸取以上各浓度的溶液10川注入色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标（Y）,对照品浓度（mg/ml）为横坐标（X）,绘制标准曲线。结果:将结果填入附录23。合格

37、标准:峰面积与浓度应呈线性关系，即R20.999。验证项目3：准确度（回收率）方法:色谱条件与系统适用性试验色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱4.6x250mm,5.0pm；流动相：醋酸钱高氯酸钠溶液（取醋酸钱4.0g和高氯酸钠7.0g,加水1300ml使溶解，用磷酸调节PH值至2.2）-乙睛（85：15）；柱温：40；检测波长：294nm。左氧氟沙星出峰时间：约15min；分离度：左氧第10页共13页氟沙星与杂质E和左氧氟沙星与环丙沙星峰的分离度应分别大于2.0与2.5。对照品溶液：取左氧氟沙星对照品25mg,精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密

38、量取5ml置25量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作对照品溶液(O.lmg/ml).系统适用性溶液：称取环丙沙星对照品和杂质E对照品各25mg置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取2ml置100ml量瓶中(5pg/ml),另称取左氧氟沙星对照品10mg置上述同一100ml量瓶中(0.1mg/ml),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液。取XXXXXXX原料适量，各按处方量分别配制含XXXXXXX浓度标示量为80%、100%和120%的供试品溶液各3份，照SOP-QTY006高效液相色谱法精密量取

39、对照品溶液与供试品溶液各20川，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。结果:将结果填入附录24。合格标准:各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差(RSD)应不大于2.0%。验证项目3：精密度方法:色谱条件与系统适用性试验色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱4.6x250mm,5.0pm；流动相：醋酸铉高氯酸钠溶液(取醋酸铉4.0g和高氯酸钠7.0g,加水1300ml使溶解，用磷酸调节PH值至2.2)-乙月青(85：15)；柱温：40；检测波长：294nm。左氧氟沙星出峰时间：约15min；分离度：左氧叙沙星与杂质E和左氧氟沙星与环丙沙星

40、峰的分离度应分别大于2.0与2.5o供试品溶液：取本品细粉140mg,精密称定，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置50量瓶中(0.1mg/ml),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(0.1mg/ml)o对照品溶液：取左氧氟沙星对照品25mg,精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取5ml置25量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作对照品溶液(0.10mg/ml)系统适用性溶液：称取环丙沙星对照品和杂质E对照品各25mg置100ml量瓶中，加0

41、.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，精密量取2ml置100ml量瓶中(5pg/ml),另称取左氧氟沙星对照品10mg置上述同一100ml量瓶中(0.1mg/ml),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10M按照SOP-QTY006高效液相色谱法分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算峰供试品含量。1)重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，由不同人员，在不同时间，使用不同仪器进

42、行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。结果:将结果填入附录25、26o合格标准:重复性：相对标准差应不大于2.0%；中间精密度：相对标准差应不大于2.0%。5.4.5 三批样品全检取按原标准检验合格的三批样品，按照中国药典2015年版（二部893页）标准进行三批XXXXXXX片样品全检，附全检报告。结果:将结果填入附录27。合格标准;应符合中国药典2015年版（二部893页）标准要求。6偏差漏项分析如有偏差，应附偏差记录。对验证实施的过程进行总结，统计有无遗漏项目、更改项目或偏差情况，并说明原因和采取措施，并给出判断。建议采用表格形式进行总结。7验证结果评价与建议验证结束后，

43、验证小组组长根据验证结果进行评价并给出相应建议。8再验证周期检验方法进行了重大修订时应进行再验证。检验条件进行了重大变更时应进行再验证。9附录附录1：验证方案培训记录附录2：XXXXXXX片新旧标准对比附录3：仪器设备校验确认记录附录4：对照品、试剂确认记录附录5：液相鉴别试验记录附录6：溶出度专属性试验记录附录7：溶出度线性范围试验记录附录8：溶出度溶液稳定性试验记录附录9：溶出度溶出曲线试验记录附录10：有关物质专属性试验记录附录11：有关物质高温破坏试验记录附录12：有关物质碱破坏试验记录附录13：有关物质酸破坏试验记录附录14：有关物质氧化破坏试验记录附录15：有关物质光破坏试验记录附

44、录16：有关物质杂质A定量限试验记录附录17：有关物质杂质A精密度试验记录附录18：有关物质杂质A准确度试验记录附录19：有关物质杂质A标准曲线试验记录附录20：有关物质溶液稳定性试验记录附录21：含量方法学专属性试验记录附录22：含量方法学定量限试验记录附录23：含量方法学线性试验记录附录24：含量方法学准确度（回收率）试验记录附录25：含量方法学重复性试验记录附录26：含量方法学精密度试验记录附录27：三批样品全检报告第13页共13页正科医药ZENKOM PMAFMACEUTICALVPI-QQC 001.01附录1验证方案培训记录培训主题XXXXXXX片检验方法验证方案实施培训授课人培训

45、时间培训内容VPI-QQC001XXXXXXX片检验方法验证方案XXXXXXX片质量标准受训人LiU/JL.岗位主要验证职责签字QC进行试验、填写记录、复核QA确认复核、监控、文件管理附录2XXXXXXX片新旧标准对比I中国药典2010年版（二部652页）中国药典2015年版（二部893页）性状本品为类白色至淡黄色片或薄膜包衣，除去包衣后显类白色至淡黄色。本品为类白色至淡黄色片或薄膜包衣，除去包衣后显类白色至淡黄色。鉴别（1）取本品的细粉适量（约相当于XXXXXXXWmg）,置干燥具塞试管中，加丙二酸约10mg与醋酸酊0.5ml,在水浴中加热510分钟，溶液显红棕色。（1）取本品细粉适量（约相

46、当于左氧氟沙星，按Ci8H2oFN304计10mg）,置干燥具塞试管中，加丙二酸约10mg与醋酊0.5ml,在水浴中加热510分钟，溶液应显红棕色。（2）取本品的细粉适量，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星0.1mg的溶液，滤过，取滤液适量，用流动相稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星0.02mg的溶液，作为供试品溶液；另取氧氟沙星对照品，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含氧氟沙星0.1mg的溶液，精密量取适量，用流动相稀释制成每1ml中约含氧氟沙星0.04mg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版附录VD）测定。用十八烷基

47、硅烷键合硅胶为填充剂；以硫酸铜D-苯丙氨酸溶液（取D-苯丙氨酸1.32g与硫酸铜1g,加水1000ml溶解后，用氢氧化钠试液调节pH值至3.5）-甲醇（82:18）为流动相；柱温40,检测波长为294nm。取氧氟沙星对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，取20pl注入液相色谱仪，记录色谱图，右氧嬴沙星与左氧氟沙星依次流出，右、左旋异构体峰间的分离度应符合要求。取对照溶液203注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满程量的25%,在精密量取供试品溶液和对照溶液各203，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液中左氧叙沙星峰（后）的保留时间一致。取本品的细粉适量，用O.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星（按Ci8H20FN3CU计）0.1mg的溶液，滤过，取滤液适量，用流动相稀释制成每1ml中含左氧氨沙星（按G8H20FN3O4计）O.OIm