药物分析04药物的含量测定方法与验证.ppt

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1、LOGO药物分析药物分析第四章第四章 药物的含量测定方法药物的含量测定方法主讲主讲:秦大伟秦大伟前言药物的含量测定定义 Company Logo Company Logo前言药物的含量测定基础 在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是某些生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农药等。常使用的有液体稀释法和固体平板扩散法。Company Logo Company Logo前言药物的含量测定分两类基础目标 Company Logo Company Logo前言药物的含量测定三种分析方法特点 特点特点 Company Logo Company

2、 Logo第一节 定量分析方法的分类与特点容量分析法定义亦称滴定法特点适用范围 Company Logo Company Logo第一节 定量分析方法的分类与特点容量分析法有关计算滴定度例如用碘量法测定维生素C的含量时，中国药典规定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的维生素C（C2H8O6）Company Logo Company Logo第一节 定量分析方法的分类与特点被测药物 滴定液容量分析法有关计算滴定度计算用B来滴定A滴定液反应的质量 被测药物反应的质量被测药物的摩尔质量滴定液的摩尔质量 Company Logo Company Logo第一节 定量分析方法的

3、分类与特点容量分析法有关计算滴定度计算用B来滴定A滴定液待测液等于1ml浓度乘体积=nB计算有一个从质量到物质的量，再到浓度再到滴定度的转变过程浓度mB Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点示例一 计算Vc的滴定度T碘量法测定Vc含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LMb=0.05mol/L11MA=Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点示例二 异烟肼的滴定度溴酸钾法测定异烟肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸钾=0.01667mol/L Company Logo Compa

4、ny Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点直接读取药典规定 自己标定取样量 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点示例三 葡萄糖酸锑钠的含量测定0.3g供试品水100ml盐酸15ml碘化钾试液10ml密塞，振摇后暗处放置10min碘量法Sb5+2S2O32-Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的

5、特点请读取请校正 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点没有药物存在时，滴定液A全部与滴定液B反应药物存在时，剩余滴定液A全部与滴定液B反应浓度校正作用 Company Logo Company Logo示例四 司可巴比妥钠的含量测定第二节 定量分析方法的特点 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml，再加盐酸5ml，立即密塞

6、，并振摇1min，在暗处放置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定得的结果用空白试验校正。Company Logo Company Logo示例四 司可巴比妥钠的含量测定第二节 定量分析方法的特点已知：司可巴比妥钠M=260.23;司可巴比妥钠与溴反应摩尔=1:1；W=0.1022 g；硫代硫酸钠浓度校正因子=1.038；供试品滴定Vs=15.73ml;空白试验滴定V0=23.21ml;Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Com

7、pany Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点习题一 剩余碘量法测定异烟肼含量 异烟肼在弱碱性溶液中，加定量过量的碘滴定液(0.1mol/L)氧化，反应完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定(以淀粉为指示剂)。Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点习题二 非那西丁含量测定 精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷，用亚硝酸钠液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于17.92mg的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。Company

8、 Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点光谱分析法药典收载本章讲叙 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点1.对照品比较法P16:将Cx用上述公式替代，即可通过实验求出各种含量。见书例。对应于稀释体积浓度 Company Log

9、o Company Logo第二节 定量分析方法的特点1.对照品比较法P16:制剂的标示量:系指每一支、片或每一个单位制剂中含有主药的重量(或效价）或含量或装量。P16:将Cx用上述公式替代，即可通过实验求出各种含量。见书例。Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点溶液溶液片剂片剂g/mlMg转化单位 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点示例：盐酸氯丙嗪注射液的含量测定：精密量取本品适量（约相当于盐酸氯丙嗪50mg），置200ml量瓶中，加盐

10、酸溶液（91000)稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用盐酸（91000)稀释至刻度，摇匀；在254nm下测定吸光度，按盐酸氯丙嗪的吸收百分系数计算，即得。Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点3.计算分光光度法4.比色法（可能有实验，Its very simple）看书！Company Logo Comp

11、any Logo特点：灵敏度高，可达10-1010-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定第二节 定量分析方法的特点(二)荧光分析法 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点(三)色谱分析法1.HPLC1.1 内标法 As：内标物质峰面积或者峰高AR:对照品的峰面积或者峰高Cs:内标物质浓度CR：对照品浓度 Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点As：内标物质峰面积或者峰高Ax:供试品的峰面积或者峰高Cs:内标物质浓度f：校正因子 Company Logo Company Logo第二节

12、 定量分析方法的特点(三)色谱分析法1.HPLC示例一 炔诺酮的含量测定 照高效液相色谱法(附录D测定)色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(65:35)为流动相，检测波长为244nm。理论塔板数按炔诺酮峰计算不低于1500，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符合要求。内标溶液的制备 取黄体酮约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点测定法 取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液

13、2ml与内标溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取20l注入液相色谱仪，记录色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。Company Logo Company Logo2.GC第二节 定量分析方法的特点示例 松节油的含量测定 照气相色谱法(附录 E测定)色谱条件与系统适用性试验 用聚乙二醇(PEG)-20M为固定相，涂布密度为20%；柱温为90C。理论塔板数按-蒎烯峰计算应低于1500。校正因子测定 取正丁醇适量，精密称定，加石油醚(3060C)制成每1ml含20mg的溶液，作为内标溶液。另取-蒎烯对照品约30mg，精密称定，置

14、10ml棕色量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加石油醚(3060C)至刻度，摇匀，吸取1l注入气相色谱仪，计算校正因子。Company Logo Company Logo第二节 定量分析方法的特点测定法 取本品约35mg，精密称定，置10ml棕色量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用石油醚(3060C)溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1l注入气相色谱仪，测定，即得。本品含-蒎烯(C10H16)不得少于70%。Company Logo Company Logov外标法:v标准加入法:Company Logo Company Logo第二节 定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧

15、化还原滴定法水解后测定酸水解碱水解经还原分解后测定湿法破坏凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法 Company Logo Company Logo第二节 定量分析样品的前处理方法(一)、直接测定法 葡萄糖酸钙 EDTA配位滴定 富马酸亚铁 邻二氮菲-硫酸铈滴定 葡萄酸锑钠 间接碘量法(二)、经水解后测定法适用范围：金属原子不直接于碳原子相连或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。Company Logo Company Logo第二节 定量分析样品的前处理方法1、碱水解法三氯叔丁醇银量法返滴定2、酸水解法适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。EDTA配位滴定 Company

16、 Logo Company Logo第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法(三)、经还原分解后测定法适用范围：碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。碘他那酸 Company Logo Company Logo第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法三、经有机破坏的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。u H2SO4-HNO3u H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结构的药物结构(一)湿

17、法破坏 Company Logo Company Logo第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法原 理 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 Company Logo Company Logo第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)CuSO4(加快消解速度)硫酸碱液硼酸(吸收

18、液)甲基红-溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正先用强酸水解再用含碱硫代硫酸钠中和最后用碱释放出氨气，并蒸馏出之 Company Logo Company Logo(二)干法破坏1.高温灼烧法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。2.氧瓶燃烧法第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。Company L

19、ogo Company Logo第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法燃烧时待测物转化成不同价态的无机物以供测定 滤纸包装样品 Company Logo Company Logo第三节 药品分析方法的验证药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则药物稳定性试验指导原则缓释、控释制剂指导原则微囊、微球与脂质体制剂指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标：评价分析方法的尺度 效能指标包括:精密度,准确度,检测限,定量限,选择性,线性与范围,耐用性 Company Logo Company Logo第三节 药品分析方法的验

20、证一、准确度（accuracy）系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。(一)含量测定方法回收率(Recovery)回收试验加样回收试验33，至少9个测定结果 Company Logo Company Logo第三节 药品分析方法的验证二、精密度(Precision)系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。表示：偏差(d)、标准偏差(s),、相对标准偏差(RSD)重复性:同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度:同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性:不同实验室，不同人测定的精密度 Company Logo Company Logo

21、第三节 药品分析方法的验证三、专属性(Specificity)v 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。目视法信噪比法 S/N=3四、检测限(Limit of Detection,LOD)药物能被检出的最低浓度(g/ml)五、定量限(Limit of Quantitation,LOQ)药物能被定量测定的最低浓度(g/ml)信噪比法 S/N=Company Logo Company Logo第三节 药品分析方法的验证影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等六、线性与范围(Linearity And Range)v待测结果

22、(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比关系的程度。Y=a+bx（r=0.9999)七、耐用性(Robustness)测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度 Company Logo Company Logo第三节 药品分析方法的验证已有重现性验证，不需验证中间精密度如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充视具体情况予以验证 Company Logo Company Logo第三节 药品分析方法的验证各种含量测定方法对效能指标的要求1.容量分析法 用原料药精制品(含量99.5%)或对照品考察方法的精密度，RSD 0.2%；回收率一般在99.7100.3%之间。2.UV法 用适当浓度的精制品进行测定，其RSD1%。制剂的测定，回收率一般应在98102之间。3.HPLC法 要求RSD2，回收率98102%之间。Company Logo Company Logo