DNA的粗提取与鉴定(学案)_医学心理学-烧伤科.pdf
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1、 【学习目标】(一)知识目标 知识与技能:1、通过尝试对植物或动物组织中的 DNA 进行粗提取,了解 DNA 的物理化学性质。2、理解 DNA 粗提取与鉴定的原理 过程与方法:掌握 DNA 如提取计数,能利用 DNA 的性质进行实验设计和操作 情感态度与价值观:通过对 DNA 的粗提取的实验过程的设计及操作,锻炼科学的思维方法,培养实事求是的科学态度。(二)重点和难点:重点:DNA 的粗提取和鉴定方法 难点:DNA 的粗提取和鉴定方法【课前预习】(一)实验原理:1提取 DNA 的方法 提取生物大分子的基本思路是 。对于 DNA 的粗提取而言,就是要利用 、等在物理和化学性质方面的差异,提取 D
2、NA,去除其他成分。1)DNA 的溶解性 DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使 充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。2)DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解 ,但是对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受 6080oC 的高温,而 DNA 在 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ,但对 DNA 没有影响。3)DNA 不溶于 ,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的 DNA。2.DNA的鉴定:DNA 遇 (沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定 DNA 的试剂。(二)实验设计 1
3、、实验材料的选取 凡是含有 的生物材料都可以考虑,但是使用 的生物组织,成功的可能性更大。2、破碎细胞,获取含 DNA 的滤液 1)制备和提取细胞核物质:动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例。在鸡血细胞液中加入一定量的 ,同时用 搅拌,得到鸡血细胞液。过滤后收集研磨液;如果实验材料是植物细胞,需要先用 溶解细胞膜。例如,提取洋葱的 DNA 时,在切碎的洋葱中加入一定的 和食盐,进行充分的搅拌和研磨。过滤后收集研磨液。思考:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?2)溶解细胞核的 D
4、NA:向收集的滤液中加入 的溶液,搅拌使 DNA 呈溶解状态。3、去除滤液中的杂质 方案一的原理是 DNA 在不同浓度 溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解 ,但不分解 ;方案三的原理是 和 的变性温度不同。思考:为什么反复地溶解与析出 DNA,能够去除杂质?方案二与方案三的原理有什么不同?4、DNA 的析出与鉴定 将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积 、冷却的 ,静置 ,溶液中会出现 ,这就是粗提取的 DNA。用玻璃棒 搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分。取两支 20ml 的试管,各加入物质的量浓度为 的 NaCl 溶液 5ml,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶
5、解。然后,向两支试管中各加入 4ml 的 。混合均匀后,将试管置于 中加热 5min,待试管冷却后,比较两支试管溶液颜色的变化,看看溶解有 DNA 的溶液是否变 。【课内探究】以鸡血细胞 DNA 的提取和鉴定为例 1制备鸡血细胞液:在鸡血中加入质量浓度为 01g/mL 的柠檬酸钠溶液,离心处理;2提取鸡血细胞的细胞核物质:向鸡血细胞液中加入蒸馏水,搅拌、过滤;讨论 1:加入蒸馏水的目的是什么?为什么能达到此目的?3溶解细胞核内的 DNA:加入 2mol/L 的氯化钠溶液,搅拌,使 DNA 呈溶解状态;4析出含 DNA 的黏稠物:加入蒸馏水,用玻璃棒搅拌;讨论 2:此时加入蒸馏水的目的是什么?5
6、滤取含 DNA 的黏稠物:过滤;讨论 3:这次过滤与上次过滤的目的一样吗?为什么?6将 DNA 的黏稠物再溶解:加入 2mol/L 的氯化钠溶液,搅拌,使 DNA 呈溶解状态;7过滤含有 DNA 的氯化钠溶液:过滤;讨论 4:这一步骤的目的是什么?讨论 5:为什么反复地溶解与析出 DNA,能够去除杂质?8提取含杂质较少的 DNA:加入冷却的 95%的酒精,搅拌;高二年级生物科导学案 学案类型:新授课导学案 材料序号:编稿教师:审稿教师:5.1 DNA 的粗提取与鉴定 欢迎下载 2 讨论 6:这一步骤的目的是什么?讨论 7:为什么加入的酒精需要冷却的?讨论 8:本实验中有三次过滤:过滤用蒸馏水稀
7、释过的鸡血细胞液过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl 溶液 过滤溶解有 DNA 的 2mol/LNaCl 溶液 以上三次过滤分别为了获得()A含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含 DNA 的滤液 B含核物质的滤液、滤液中 DNA 粘稠物、含 DNA 的滤液 C含核物质的滤液、滤液中 DNA 粘稠物、纱布上的 DNA D含较纯的 DNA 滤液、纱布上的粘稠物、含 DNA 的滤液【突破训练】1下列图示中能反映 DNA 溶解度与 NaCl 溶液浓度之间关系的是 ()2在 DNA 的粗提取和鉴定的实验中,提取鸡血细胞的核物质和析出含 DNA 的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水,其作用在于 ()A前者用
8、来溶解血细胞,后者用来溶解 DNA B前者使血细胞吸水破裂,后者用来稀释 NaCl 溶液 C前者用来分离细胞核与细胞质,后者用来提取 DNA D前者使 DNA 从核中分离出来,后者使 DNA 析出 3在 DNA 的粗提取和鉴定的实验中,提取含杂质较少的 DNA 时必须用()A0.14 mol/L的 NaCl 溶液 B玻璃棒充分搅拌直至丝状物溶解 C经充分预冷的 95的酒精溶液 D 0.lg/mL 的柠檬酸钠溶液 4在“DNA 的粗提取与鉴定”实验中,有两次 DNA 的沉淀析出,其依据的原理()DNA 在氯化钠的物质的量浓度为 0.14mol/L 时溶解度最低 DNA 在冷却的体积分数为 95%
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- 关 键 词:
- DNA 提取 鉴定 医学心理学 烧伤
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