常用缓冲液配置_研究报告-制药行业.pdf

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1、.-.word.zl-实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：1.称量 121.1 g Tris置于 1 L 烧杯中。2.参加约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量参加浓盐酸调节所需要的 pH 值。PH 值 浓 HCl 7.4 约 70ml 7.6 约 60ml 8.0 约 42ml 4.将溶液定容至 1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高 1，溶液的 pH 值大约降

2、低 0.03个单位。2)10TE Buffer(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法：1.量取以下溶液，置于 1 L 烧杯中。1M TrisHCl BufferPH7.4，7.6，8.0 100ml 500mM EDTA(PH8.0)20ml 2.向烧杯中参加约 800 ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至 1 L 后，高温高压灭菌。4.室温保存。3)1.5 M Tris-HCl(pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：1.称量 181.7 g Tris置于 1 L 烧杯

3、中。2.参加约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节 pH 值至 8.8。4.将溶液定容至 1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高 1，溶液的 pH 值大约降低 0.03个单位。4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml 配制方法：1.称量 40.8g NaAc3H2O 置于 100-200ml烧杯中，参加月 40ml 的去离子水搅拌溶解 2.参加冰醋酸调节 pH 值至 5.2 3.加去离子水将溶液定容至 100ml 4 高温高压灭菌后，室

4、温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl,2.7 mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法：.-.word.zl-1.称量以下试剂，置于 1 L 烧杯中。NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42g KH2PO4 0.27g 2.向烧杯中参加约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将 pH 值调节至 7.4，然后参加去离子水将溶液定容至 1 L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1 mM CaCl2 和 0.5 mM M

5、gCl2。6)10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵 配制量：100 ml 配制方法：1.称量 77.1 g醋酸铵置于 100200 ml烧杯中，参加约 30 ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至 100 ml。3.使用 0.22 mm 滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7)苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法：1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的别离，而异戊醇那么有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法：将 Tris-HCl平衡苯酚

6、与等体积的氯仿/异戊醇24:1混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中 4保存。810(W/V)SDS组份浓度：10(W/V)SDS 配制量：100ml 配制方法：1.称量 10g高纯度的 SDS 置于 100-200ml烧杯中，参加约 80ml 的去离子水，68参加溶解 2.滴加浓盐酸调节 pH 值至 7.2 3.将溶液定容至 100ml后，室温保存。92 N NaOH组份浓度：2 N NaOH 配制量：100 ml 配制方法：1.量取 80 ml去离子水置于 100200 ml塑料烧杯中NaOH 溶解过程量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2.称取 8 g NaOH 小心地逐渐参加到烧杯中，边加边搅拌。3

7、.待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至 100 ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。102.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl 配制量：100 ml 加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温

8、保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-配制方法：1.在 78.4 ml的去离子水中参加 21.6 ml的浓盐酸11.6 N)，均匀混合。2.室温保存。115 M NaCl组份浓度：5 M NaCl 配制量：1 L 配制方法：1.称取 292.2 g NaCl置于 1 L 烧杯中，参加约 800 ml的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至 1 L 后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4保存。1120(W/V)Gl

9、ucose组份浓度：20(W/V)Glucose 配制量：100 ml 配制方法：1.称取 20 g Glucose 置于 100200 ml烧杯中，参加约 80 ml的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至 100 ml。3.高温高压灭菌后，4保存。12Solution I(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl pH8.0),10 mM EDTA,50 mM Glucose 配制量：1 L 配制方法：1.量取以下溶液，置于 1 L 烧杯中。1M Tris-HClPH8.0 25ml 0.5M EDTA PH8.0 20ml 20Glucose1.11M 45ml dH

10、2O 910ml 2.高温高压灭菌后，4保存。3.使用前每 50 ml 的 Solution I 中参加 2 ml 的 RNase A20 mg/ml)。13Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1(W/V)SDS 配制量：500ml 配制方法：1.量取以下溶液，置于 500ml烧杯中 10 SDS 50ml 2N NaOH 50ml 2.加灭菌水定容至 500ml，充分混匀 3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌 14Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc,5 M CH3COOH 加浓盐酸调

11、节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-

12、.word.zl-配制量：500 ml 配制方法：1.称量以下试剂，置于 500 ml烧杯中。KOAc 147g CH3COOH 57.5ml 2.参加 300 ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至 500 ml。4.高温高压灭菌后，4保存。150.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA 配制量：1 L 配制方法：称取 186.1 g Na2EDTA2H2O，置于 1 L 烧杯中。2.参加约 800 ml的去离子水，充分搅拌。3.用 NaOH 调节 pH 值至 8.0 约 20 g NaOH)。注意：pH 值至 8.0时，EDTA 才能完全溶解。4.加去离子

13、水将溶液定容至 1 L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。161 M DTT 组份浓度：1 M DTT 配制量：20 ml 配制方法：1.称取 3.09 g DTT，参加到 50 ml塑料离心管。2.加 20 ml的 0.01 M NaOAcpH5.2)，溶解后使用 0.22 mm 滤器过滤除菌。3.适量分成小份后，-20 保存。1710 mM ATP 组份浓度：10 mM ATP 配制量：20 ml 配制方法：1.称取 121 mg Na2ATP3H2O，参加到 50 ml 塑料离心管。2.加 20 ml的 25 mM Tris-HClpH8.0)，搅拌溶解。3.适量分成小份后

14、，-20 保存。一.常用贮液与溶液 1mol/L 亚精胺Spermidine:溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L 精胺Spermine：溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L 乙酸胺 ammonium acetate：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制

15、方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-10mg/ml 牛血清蛋白(BSA：加 100mg 的牛血清蛋白 组分 V 或分子生物学试剂级，无 DNA酶于 9.5ml 水中为减少变性，须将蛋白参加

16、水中，而不是将水参加蛋白，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L 二硫糖醇DTT ：在二硫糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移 100mg 的二硫糖醇至微量离心管，加 0.65ml的水配制成 1mol/L 二硫糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾potassium acetate：溶解 78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯化钾KCl：溶解 7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到 100ml。3mol/L 乙酸钠sodium acetate：溶解

17、40.8g的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液0.5mol/L ，混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g的 Na2EDTA2H2O 和 20g的 NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml的水中，用 NaOH 调 pH6.8-8.2 ，然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加 8.6ml的浓盐酸至 91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解 250mg 的 IPGT

18、异丙基硫代-D-半乳糖苷于 10ml 水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl26H2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF：溶解 174mg 的 PMSF苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml 蛋白酶 Kproteinase K：将 200mg 的蛋白酶 L 参加到 9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase无 DNase DNasefree RNase：溶解 1

19、0mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的10mmol/L 的乙酸钠水溶液中pH 5.0。溶解后于水浴中煮沸 15min，使 DNA 酶失活。用1mol/L 的 TrisHCl 调 pH 至 7.5，于-20 贮存。配制过程中要戴手套 5mol/L 氯化钠NaCl：溶解 29.2g氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N 氢氧化钠NaOH ：溶解 400g氢氧化钠颗粒于约 0.9L水的烧杯中磁力搅拌器搅拌，氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10SDS十二烷基硫酸钠：称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L

20、山梨糖醇Sorbitol：溶解 36.4g山梨糖醇于足量水中使终体积为 100ml。100三氯乙酸TCA:在装有 500gTCA 的试剂瓶中参加 100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。稀释液应在临用前配制 2.5 Xgal5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷：溶解 25mg 的 Xgal于 1ml 的二甲基甲酰胺DMF,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100Denhardt 试剂Denhardts regent 成分及终浓度 配制 100ml溶液各成分的用量 2聚蔗糖Ficoll，400型 2聚乙烯吡咯烷酮PVP-40 2BSA组分 V水 2g2g2g加水至总体积为 100ml 依照上表称

21、取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 贮存。10标准DNA 连接酶缓冲液standard DNA ligase buffer 粘端、平端连接 加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配

22、制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 盐酸亚精胺可选 0.5mg/ml BSA 组分 V 可选水 5ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5

23、ml 10 mg/mL 贮液 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20。100 mmol/L dNTP 溶液dNTP solutions 可以购置到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液，-80 可贮存至少 6 个月。10mmol/L dNTP 混合液 成分及终浓度 配制 20ul溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L

24、 dTTP 贮液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量 质量浓度为 20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠或 14.6g固体氯化钠补足 100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠二水 3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足 1L 溶解柠檬酸三钠二水和氯化钠于约 0.9L水中，加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为 7.0，用水补足体积至 1

25、L。DEPC 焦碳酸二乙酯 处理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1。在 37温浴至少 12h，然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使剩余的 DEPC 失活。DEPC会与胺起反响，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺 deionized formamide 直接购置或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 贮存防止氧化。磷酸缓冲液phosphate buffer按照下表所给定的体积，

26、混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠 单碱 和 1mol/L 磷酸氢二钠 双碱 贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢钠NaH2PO4H2O贮液：溶解 138g于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液

27、的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-酸氢二钠Na2HPO4贮液:溶解 142g于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠ml 1mol/L 磷酸氢二钠ml 最终 pH 值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610

28、670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE用于悬浮和贮存 DNA 成分及终浓度 配制 100ml溶液各成分的用量 10mmol/L Tris HCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HClpH7.4-8.0，25 200ul 0.5 mol/L EDTA pH 8.0 98.8ml Tris 缓冲液Tris-HCl buffer将 121g的 Tris 碱溶解于约 0.9L水中，再根据所要求的 pH25下加一定量的浓盐酸11.6N，用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积ml pH 8.

29、6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭

30、菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-50Tris-乙酸TAE缓冲液 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 2mol/L Tris 碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸17.4 mol/L 200ml的 0.5 mol/L EDTA pH 8.0补足1L 5Tris-硼酸TBE缓冲液 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tr

31、is 碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g27.5g硼酸 20 ml 的 0.5 mol/L EDTA pH 8.0补足1L 染料 1溴酚蓝bromophenol blue加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FFxylene cyanole FF溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭 ethidium bromide小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4贮存。凝胶上样液gel load

32、ing solutions6碱性凝胶上样液室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18聚蔗糖400型 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青 FF 水 300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA pH8.01.8g 15mg 25mg 补足到 10ml 6聚蔗糖凝胶上样液室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 15聚蔗糖400型水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA p

33、H8.01.5g补足到 10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青 FF 2.5ml 1溴酚蓝 2.5ml 1二甲苯青 FF 加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单

34、位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-15聚蔗糖400型水 1.5g补足到 10ml 6甘油凝胶上样液4贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 50甘油水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA pH8.0 3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液室温贮存 成分及

35、终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 40聚蔗糖水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA pH8.04g 补足到 10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青 FF 200 mmol/L EDTA 0.1SDS 50甘油水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS 5ml 补足到 10ml 三.常用培养基 1 LB 培养基将以下组分溶解在

36、 0.9L水中：蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用 1N NaOH 1ml调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB 培养基将以下组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁。加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶

37、液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-2SOC 培养基成分、方法同 SOB 培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后

38、，除了在每100ml的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁外，再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml，用 0.22um的滤膜过滤除菌。3TB 培养基将以下组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60，再加 100ml灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液2.31g的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中，使终体积为 100ml。高压灭菌或用 0.22um的滤膜过滤除菌。42YT 培养基将以下组分

39、溶解在 0.9L水中：蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用 1N NaOH 1ml调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。5YPD 培养基将以下组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加 1.6g色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前参加 20g琼脂粉。四.常用抗生素 1氨苄青霉素ampicillin 100mg/ml 溶解 1g

40、氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 25ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。2羧苄青霉素carbenicillin 50mg/ml 溶解 0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 25ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。3甲氧西林methicillin 100mg/ml 溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄青霉素一起添加加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至

41、高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方.-.word.zl-于生长培养基。4

42、卡那霉素kanamycin 10mg/ml 溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。5氯霉素chloramphenicol 25mg/ml 溶解 250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 12.5ug/ml25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。6链霉素streptomycin 50mg/ml 溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加

43、于生长培养基。7萘啶酮酸nalidixic acid 5mg/ml 溶解 50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。8四环素tetracyyline 10mg/ml 溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至 10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20 贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。加浓盐酸调节所需要的值值浓约约约将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位组份浓度配制量配制方法量取以下溶液置于烧于烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解用浓盐酸调节值至将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意应使溶液冷却至室温后再调定值因为溶液的值随温度的变化差异很大温度每升高溶液的值大约降低个单位醋酸钠组份浓度醋酸钠压灭菌后室温保存组份浓度配制量配制方法称量以下试剂置于烧杯中向烧杯中参加约的去离子水充分搅拌溶解滴加浓盐酸将值调节至然后参加去离子水将溶液定容至高温高压灭菌后室温保存注意上述中无二价阳离子如需要可在配方