微生物复习知识点_中学教育-高考.pdf
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1、第一章 微生物的特点:1.小(个体微小)m 级:普通细菌(光镜,电镜)nm 级:病毒(电镜)少数较大,肉眼可见 2.简(结构简单)单细胞简单多细胞非细胞 3.低(进化地位低)(1)非细胞:病毒,类病毒,朊病毒 (2)原核类:普通细菌,放线菌,蓝细菌,支原体,立克次氏体,衣原体 (3)真核类:真菌(酵母菌,霉菌,蕈菌)单细胞藻类,原生动物 4.比表面积大 5.分布广,种类多 6.代谢类型多样 7.生长和繁殖快 8.易变异 微生物在生物界中的地位:1969 年 Whittaker 五界系统:原核生物界、原生生物界、菌物界、植物界和动物界 1977 年-1990年 Woese 细胞生命三域学说:细菌
2、域古菌域真核生物域 微生物学的研究内容:微生物的形态结构、生理生化、遗传变异、进化、分类、生态、应用 微生物学的分支学科:基础微生物学 应用微生物学 一.我国古代对微生物的利用 饮食:8000 年前,制曲酿酒工艺 2500 年前,制酱、酿醋农业:春秋战国,有机肥制作 医药:种痘防天花;中药 二.微生物的发现:1676 年,荷兰 Leeuwenhoek 自制显微镜,微生物世界 三.微生物学的奠基时期 1.Pasteur(1822-1895)法国微生物学家、化学家近代微生物学的奠基人法兰西学院院士“进入科学王国的最完美无缺的人”主要贡献:(1)否定“自生说”,证实发酵由微生物引起(2)传染病是微菌
3、在生物体内发展的结果免疫学预防接种(3)建立“巴氏消毒法”Pasteur 的曲颈瓶试验 2.Koch 1)确定了炭疽病、结核病等传染病的病原菌 2)提出了柯赫氏法则 3)建立和改进了微生物学的研究技术和方法 Koch 的助手 Petri 设计玻璃培养皿 Koch 的助手 Hesse 用洋菜作固体培养基的支撑物 五.现代微生物学 微生物学、生物化学、遗传学、分子生物学、计算机科学的综合现代微生物学 重大理论问题的突破:1.1941 年,Beadle 和 Tatum 研究粗糙脉孢霉的营养缺陷株,提出了“一基因一酶”假说。2.1944 年 Avery 在研究细菌的转化因子时发现了 DNA 的作用,揭
4、露了遗传基因的化学本质。3.1953 年,Watson 和 Crick 发现了 DNA 的双螺旋结构,大大促进分子遗传学的发展。4.1961 年 Jacob 和 Monod 提出了大肠杆菌乳糖代谢调控的操纵子学说微生物代谢调控方式。5.1965 年,Nirenberg 破译 DNA 碱基组成的三联密码,揭示了生物同一性的本质。6.1973 年,Cohen 等,不同的质粒 DNA 体外重组,转化大肠杆菌成功(基因工程)7.人干扰素、人白介素 2、人集落刺激因子、重组人乙型肝炎疫苗、基因工程幼畜腹泻疫苗等多种基因工程药物和疫苗进入生产或临床试用阶段。8.DNA 序列分析,DNA 分子杂交,Pr 生
5、物合成,PCR 技术迅速发展 9.“生命三域学说”的提出 10.微生物基因组的研究 1995 年,美国,流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)的全基因组序列。第二章 微生物的纯培养和显微技术 培养物:在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。纯培养物:只有一种微生物的培养物。B:显微技术:包括显微标本的制作、观察、测定、记录及分析等方面的内容。无菌技术:在分离、转接及培养纯培养(物)时防止其被其他微生物污染同时也不污染周围环境的技术。常用的无菌技术:高压蒸气灭菌、高温干热灭菌、超净工作台、棉塞 二、用固体培养基分离纯培养 菌落:单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生
6、长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见、有一定形态结构的子细胞生长群体。菌苔:当固体培养基表面众多菌落连成一片时,便成为菌苔。菌落或菌苔是对微生物进行分类和鉴定的重要依据。用固体培养基分离纯培养技术:稀释倒平板法、涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法(用于分离严格厌氧菌。)用液体培养基分离纯培养:稀释法:经高度稀释后,同一个稀释度的试管中大多数(95%以上)表现不生长,很可能得到的是纯培养。单细胞(单孢子)分离:单细胞分离:采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。选择培养、富集培养:富集条件:物理、化学和生物等。菌种保藏:就是根据菌种特性及保藏目的的不同,给微生物
7、菌株以特定的条件,使其存活而得以延续。菌种保藏方法:连续转接、改变条件(干燥、低温、缺氧、缺乏营养等)在需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力。1、传代培养保藏是微生物保存的基本方法。琼脂斜面、半固体琼脂柱和液体培养等。橡皮塞封口或用石蜡覆盖。放置低温保存。2、冷冻保藏代谢作用停止。会有损伤:低温会使细胞内水分形成冰晶,从而引起细胞(尤其是细胞膜)的损伤。速冻及快速解冻可减少损伤;还可加一些保护剂,如 0.5%左右的甘油或二甲亚砜可透入细胞,并通过降低强烈的脱水作用而保护细胞。3、干燥保藏法 沙土管保存和冷冻真空干燥保藏是最常用的二种微生物干燥保藏技术。沙土管保存:将菌种接种至斜面,培
8、养至长出大量的孢子后,洗下孢子制备孢子悬浮液,加入无菌沙土试管中,减压干燥,直至将水分抽干,最后用石蜡、橡胶塞等封闭管口,置冰箱保存。此法主要适用于产孢子的微生物,如芽孢杆菌、放线菌等,保藏时间相对较长。冷冻真空干燥保藏 将加有保护剂的细胞样品预先冷冻,使其冻结,然后在真空下通过水的升华作用除去水分。达到干燥的样品可在真空或惰性气体的密闭环境中置低温保存,从而使微生物处于干燥、缺氧及低温的状态,生命活动处于休眠,可以达到长期保藏的目的。微生物的保藏 保藏期间微生物不死亡、不污染、不会因变异而丢失重要的生物学性状。许多国家都设有相应的菌种保藏机构:中国微生物菌种保藏委员会 、美国典型菌种保藏中心
9、 、世界菌种保藏联合会等。一、显微镜的种类及原理 普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜、扫描电子显微镜、扫描隧道显微镜 分辨率:重要性能参数。显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数,还与显微镜的分辨率(resolution)有关。分辨率是指显微镜(或人的眼睛距目标 25cm 处)能分辨物体最小间隔的能力。分辨率的大小决定于光的波长和镜口角以及介质的折射率。非细胞低进化地位低非细胞病毒类病毒朊病毒原核类普通细菌放线菌蓝细菌支原体立克次氏体衣原体真核类真菌酵母菌霉菌蕈菌单细胞藻类原生动物比表面积大分布广种类多代谢类型多样生长和繁殖快易变异微生物在生物界中的地物学的研究
10、内容微生物的形态结构生理生化遗传变异进化分类生态应用微生物学的分支学科基础微生物学应用微生物学一我国古代对微生物的利用饮食年前制曲酿酒艺年前制酱酿醋农业春秋战国有机肥制作医药种痘防天花中药二微兰西学院院士进入科学王国的最完美无缺的人主要贡献否定自生说证实发酵由微生物引起传染病是微菌在生物体内发展的结果免疫学预防接种建立巴氏消毒法的曲颈瓶试验确定了炭疽病结核病等传染病的病原菌提出了柯赫氏法则建1、活体观察(1)压滴法:将菌悬液滴于载玻片上,加盖盖玻片后立即进行显微镜观察。(2)悬滴法:在盖玻片中央加一小滴菌悬液后反转置于特制的凹载玻片上后进行显微镜观察,为防止液滴蒸发变干,一般还应在盖玻片四周加
11、封凡士林。(3)菌丝埋片法:将无菌的小块玻璃纸铺于平板表面,涂布放线菌或霉菌孢子悬液,经培养,取下玻璃纸置于载玻片上,用显微镜对菌丝的形态进行观察。2、染色观察固定的目的:杀死细菌。使菌体粘附于坡片上。增加细菌对染料的亲和力。常用的方法有酒精灯火焰加热和化学固定二种。细菌菌落:菌落较小,圆形,光滑,较湿润,透明、半透明或不透明,质地均匀,大多易挑取。孢子丝:当气生菌丝生长发育到一定阶段,气生菌丝上分化出的可形成孢子的菌丝。孢子丝的形状及在气生菌丝上排列的方式随种而异。放线菌的菌落:菌落质地硬而致密,菌落小而不广泛延伸。菌落表面呈紧密的绒状或坚实、干燥多皱。接种针难以挑取,有时可挑碎,有时可将整
12、个菌落挑起。1、霉菌即丝状真菌,指菌丝发达而不产生大型肉质子实体的真菌。菌丝有分枝与不分枝、无隔菌丝(根霉、毛霉)与有隔菌丝(青霉、曲霉)之分。霉菌菌落:菌落通常较大,干燥,不透明,质地疏松,呈绒毛状、蛛网状、棉絮状或毡毯状,由于不同的真菌孢子含有不同的色素,所以菌落表面可呈不同的颜色,且菌落中央与边缘、正面与反面的颜色、构造常不同。霉菌作用:在发酵工业上广泛用来生产酒精、抗生素(青霉素、灰黄霉素)、有机酸(柠檬酸、葡萄糖酸)、维生素等。在农业上用于饲料发酵、植物生长激素(赤霉素)、杀虫农药(白僵菌剂)等。另外,霉菌也是造成物品霉变的主要原因。2、酵母菌 酵母菌是一群以芽殖或裂殖来进行无性繁殖
13、的单细胞真菌,以此与霉菌相区别。极少数种可产生子囊孢子进行有性繁殖。酵母菌在酿造、食品、医药工业等方面占有重要地位。酵母菌细胞蛋白质含量高达细胞干重的 50%以上,并含有人体必需的氨基酸,所以酵母菌可以成为食品和饲料的重要补充。腐生型酵母菌能使食品和其他原料腐败变质;白假丝酵母(白色念珠菌)可引起皮肤、粘膜、呼吸道及泌尿系统等多种疾病,新型隐球酵母还能引起慢性脑膜炎、肺炎等疾病。三、藻类 藻类是指除苔藓植物和维管束植物以外,基本上有叶绿素,可进行光合作用,并伴随放出氧气的一大类真核生物。个体大小差异很大。水华、赤潮 四、原生动物 原生动物是一类缺少真正细胞壁,细胞通常无色,具有运动能力,并进行
14、吞噬营养的单细胞真核生物。原生动物在海水、淡水中大量存在,它们也与各种动植物在不同组织水平上形成共同体,有些对宿主无害,有些对宿主有利,有些对宿主有害。也有一些原生动物能引起人类疾病。第三章 一.细胞壁 细胞最外层厚实、坚韧而有弹性的结构,主要由肽聚糖构成。观察方法:1)鉴别染色 2)质壁分离 3)切片电镜观察 细胞壁功能:1)固定外形,提高机械强度;2)阻止大分子物质(如酶、抗生素)通过;3)协助细胞的生长、分裂和鞭毛运动;4)决定细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的敏感性。两种不同的细胞壁:革兰氏染色反应 非细胞低进化地位低非细胞病毒类病毒朊病毒原核类普通细菌放线菌蓝细菌支原体立克次氏体衣原体
15、真核类真菌酵母菌霉菌蕈菌单细胞藻类原生动物比表面积大分布广种类多代谢类型多样生长和繁殖快易变异微生物在生物界中的地物学的研究内容微生物的形态结构生理生化遗传变异进化分类生态应用微生物学的分支学科基础微生物学应用微生物学一我国古代对微生物的利用饮食年前制曲酿酒艺年前制酱酿醋农业春秋战国有机肥制作医药种痘防天花中药二微兰西学院院士进入科学王国的最完美无缺的人主要贡献否定自生说证实发酵由微生物引起传染病是微菌在生物体内发展的结果免疫学预防接种建立巴氏消毒法的曲颈瓶试验确定了炭疽病结核病等传染病的病原菌提出了柯赫氏法则建染色步骤:(1)结晶紫初染(2 碘液媒染(3)乙醇脱色(4)复红/沙黄复染 染色结
16、果:G+细菌紫红色 G-细菌红色 一)革兰氏阳性细菌的细胞壁厚:2080nm 主要成分:肽聚糖、磷壁酸 1.肽聚糖 1)组成:(1)双糖单位(2)四肽侧链(L-Ala、D-Glu、L-Lys、D-Ala)(3)肽桥(Gly)作用:形成坚硬而有弹性的三维空间网络 2.磷壁酸 G+细菌特有 分为壁磷壁酸、膜磷壁酸 1)组成:为磷酸甘油或磷酸核糖醇多聚体的衍生物 2)作用:提高 Mg 2+浓度和酶的活性;作为某些噬菌体的吸附位点;表面抗原;纵向加强肽聚糖的结构 二)革兰氏阴性细菌的细胞壁结构和主要成分:肽聚糖和外膜 1.革兰氏阴性细菌肽聚糖少数几层有双糖单位、四肽侧链 (L-Lys3 DAP3),甲
17、四肽的 D-Ala4-乙四肽中的 DAP3连接 2.外膜 1)脂多糖 G-细菌外膜层特有:(1)类脂 A(lipid A)细菌内毒素不同 G-细菌骨架一致(2)核心多糖有属特异性(3)O-特异侧链:由 35 个单糖单位所构成的多糖链、菌体抗原,有种特异性。2)脂蛋白:成分与细胞质膜上的脂蛋白相似连接外膜层和肽聚糖 3.外膜蛋白 孔蛋白 亲水性,低分子物质进出细胞壁的通道分为非特异性孔蛋白、特异性孔蛋白 4.周质空间:G-细菌外膜与细胞膜之间的狭窄空间 含有许多参与代谢的蛋白:水解酶、合成酶,结合蛋白(运输养料),受体蛋白(趋化性)G+与 G-细菌细胞壁的主要区别 区别点 G+细菌 G-细菌 结
18、构层次 厚度/nm 肽聚糖 磷壁酸 脂多糖 脂蛋白 蛋白质 青霉素作用 溶菌酶作用 单层 2080 4090交联高+-+或-敏感 敏感 内壁层 18 510交联低-+或-外壁层 810-+不敏感 不敏感 革兰氏染色反应的机制:细胞壁化学成分的差异 G+细菌:壁厚、肽聚糖层次多、交联紧密、无类脂 脱色时失水网孔缩小,初染的结晶紫-碘复合物留在壁内(紫色),复染后呈紫红色。G-细菌:壁薄、肽聚糖层次少、交联疏松,有类脂外膜 脱色时类脂外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖层不能阻挡结晶紫-碘复合物的溶出,脱色后退为无色,复染后呈现红色。三)古菌细胞壁 1.假肽聚糖细胞壁 非细胞低进化地位低非细胞病毒类病毒
19、朊病毒原核类普通细菌放线菌蓝细菌支原体立克次氏体衣原体真核类真菌酵母菌霉菌蕈菌单细胞藻类原生动物比表面积大分布广种类多代谢类型多样生长和繁殖快易变异微生物在生物界中的地物学的研究内容微生物的形态结构生理生化遗传变异进化分类生态应用微生物学的分支学科基础微生物学应用微生物学一我国古代对微生物的利用饮食年前制曲酿酒艺年前制酱酿醋农业春秋战国有机肥制作医药种痘防天花中药二微兰西学院院士进入科学王国的最完美无缺的人主要贡献否定自生说证实发酵由微生物引起传染病是微菌在生物体内发展的结果免疫学预防接种建立巴氏消毒法的曲颈瓶试验确定了炭疽病结核病等传染病的病原菌提出了柯赫氏法则建聚糖骨架:N-乙酰葡糖胺+N
20、-乙酰塔罗糖胺糖醛酸(-1,3 糖苷键)三肽侧链:L-Glu、L-Ala、L-Lys 肽桥:L-Glu 2.独特多糖细胞壁 3.硫酸化多糖细胞壁 4.糖蛋白细胞壁 5.蛋白质细胞壁 二.细胞壁以内的构造(原生质体)一)细胞质膜:位于细胞壁内侧,包围着细胞质,柔软、脆弱、富有弹性的半透膜。质壁分离、鉴别染色或原生质体破裂超薄切片电子显微镜观察 化学组成和结构 1)磷脂磷酸甘油脂的双分子层、磷酸端亲水的头部、烃端疏水的尾部 磷酸上的 R 基团因物种而异;脂肪酸的链长和饱和度也因物种和生长温度而异 2)蛋白质 周边蛋白:在膜的表面,亲水性(改变 pH,离子强度等可分离)跨膜蛋白:镶嵌于磷脂双层中,疏
21、水性(需用表面活性剂或有机溶剂等剧烈条件才能分离)2.功能 1)选择性运送物质;2)维持细胞内正常渗透压;3)含磷酸化酶系,是原核细胞产能场所;4)合成细胞壁和糖被组分的基地;5)着生鞭毛基体的部位。古菌的细胞膜结构特点:1)聚异戊二烯甘油醚类脂 2)醚键双分子层膜 3)单分子层膜(更牢固)单双分子层膜 4)甘油 3C 上有独特的 R 基团,如磷酸酯基 5)膜上含有独特脂类,如菌红素 二)细胞质及其内含物 细胞质:细胞质膜包围的除核区以外的一切半透明、胶状及小颗粒状物质的总称。内含物:细胞质内形状较大的颗粒状结构。细胞质组分:核糖体、酶、中间代谢物、营养物、质粒等。核糖体:核糖核酸+蛋白质 内
22、含物组分 1.颗粒性贮藏物聚-羟基丁酸糖原和淀粉异染粒(磷源、能源)藻青素(氮源、能源)硫滴和硫粒 3.磁小体:某些趋磁细菌中存在的多面体结构,成分为Fe3O4,有膜包裹。功能:趋磁导向 4.气泡某些水生细菌含有蛋白质组成的圆形或梭形结构贮存气体功能:运动工具 三)核区:指原核生物所特有的无核膜包裹、无固定形态的原始细胞核。环状双螺旋DNA 一个细胞正常只含一个核区,有时多个 功能:携带细菌的绝大多数遗传信息,是生长发育、新陈代谢、遗传变异的控制中心。质粒:细菌染色体以外的遗传物质,能独立复制,为共价闭合环状的双螺旋 DNA。在细胞内的拷贝数多少不一分子量小:1106 100106Da 基因少
23、:几个到上百个 genes 功能:携带细菌的部分非必需遗传信息,执行某些特殊的功能,常可转移到其他细菌并具有重组性。四)特殊的休眠构造 1.芽孢:某些细菌在生长发育后期,能在细胞内部形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的壁厚、含水量低、抗逆性强的高度折光的休眠体,称为芽孢。抵抗热、紫外线、电离辐射、干燥、化学药品,存活时间长,产生芽胞的大都是革兰阳性菌:如芽孢杆菌属、梭菌属、生孢八叠球菌属等 1)芽孢的形态:芽胞的形状、大小、位置和表面特征等具有重要的分类鉴别意义。2)芽孢的结构五部分:(1)孢外壁:脂蛋白(2)芽孢衣:蛋白(30-60干重)(3)皮层:特殊肽聚糖、DPA-Ca(4)核心壁:类似细胞质
24、膜(5)核心:含芽孢壁、芽孢质膜、芽孢质和核区等 4)芽孢的萌发:活化出芽生长芽孢出芽时,壁薄或不完整,出现很强的感受态 7)伴孢晶体:少数芽孢杆菌在形成芽孢时,芽孢旁产生菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体,称为伴孢晶体。(1)可毒杀 200 多种昆虫(生物农药)(2 细菌分类鉴定的重要指标(3)有助于细菌长期保藏(4)有助于芽孢菌的筛选(5)衡量消毒灭菌手段的重要指标:肉毒梭菌(肉品灭菌的指标)破伤风梭菌、产气荚膜梭菌(外科手术灭菌指标)嗜热脂肪芽孢杆菌(工业发酵灭菌的指标)特点:不溶于水,对蛋白酶类不敏非细胞低进化地位低非细胞病毒类病毒朊病毒原核类普通细菌放线菌蓝细菌支原体立克次氏体衣原体真核类
25、真菌酵母菌霉菌蕈菌单细胞藻类原生动物比表面积大分布广种类多代谢类型多样生长和繁殖快易变异微生物在生物界中的地物学的研究内容微生物的形态结构生理生化遗传变异进化分类生态应用微生物学的分支学科基础微生物学应用微生物学一我国古代对微生物的利用饮食年前制曲酿酒艺年前制酱酿醋农业春秋战国有机肥制作医药种痘防天花中药二微兰西学院院士进入科学王国的最完美无缺的人主要贡献否定自生说证实发酵由微生物引起传染病是微菌在生物体内发展的结果免疫学预防接种建立巴氏消毒法的曲颈瓶试验确定了炭疽病结核病等传染病的病原菌提出了柯赫氏法则建感;易溶于碱性溶剂。2.细菌的其他休眠构造 孢囊:某些固氮菌等在缺乏营养的条件下,由细胞
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