《环境微生物学》和《大气污染控制工程》实验教案_建筑-环境科学.pdf

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1、三、环境微生物学和大气污染控制工程部分 实验一 水中细菌总数的测定 一、目的要求 l 学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。2了解水源水的平板菌落计数的原则。二、基本原理 本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。三、器材 l 培养基：肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。2.仪器或其他用具：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试

2、管等。3.玻璃器皿的洗涤和灭菌 3.1 玻璃器皿的洗涤 新购置的玻璃器皿，因含游离碱，应先在此2%盐酸中浸泡数小时，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗 1-2 次并沥干。培养细菌的玻璃器皿，应先经高压蒸汽灭菌，趁热倒出培养基，用热肥皂水或洗涤剂洗刷残渍，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1-2 次，沥干。洗涤剂吸管量，可先置 3%来苏液内浸 30min 或高压政策蒸汽灭菌，再用洗涤剂洗涤，用清水及蒸馏水冲洗干净。洗涤染色瓶时，可在 5%漂白粉中浸泡 24h 后，再用常规方法洗涤干净。含油脂的玻璃器皿，应单独高压灭菌洗涤，趁热倒出污物，置 100干燥箱内烘 0.5h，再放入 5%碳酸氢钠水中煮沸，

3、先去脂再行常规洗涤。3.2 玻璃器皿的灭菌（1）高压蒸汽灭菌 这是应用研究最广泛的灭菌方法，灭菌是用高压蒸汽灭菌锅进行。手提式高压蒸汽灭菌器，使用方便，其操作方法主注意事项如下：打开锅盖或从加入口处向锅内加入适量的水。加水后，将待灭菌器皿放入锅内，不要塞得过紧，以使锅内温度均匀，再将锅盖盖好，拧紧螺旋，使其密封。打开放气阀，打开热源加热至水沸腾，让锅内冷空气充分逸出。否则锅内温度达不到压力表所指示的对应温度，灭菌不彻底。当冷空气由排气孔排尽后，再关紧放气活塞。等锅内蒸汽压上升至所需压力时，控制热源，维持所需时间，一般为 0.10343MPa(121)表压，保持 20min。灭菌完毕，关闭热源，

4、必须待压力自然降至“0”时，方可启盖取出灭菌物品，否则易发生危险。（2）干热灭菌 实验室中常用的还有热空气灭菌的方法，即将洗干净的待灭菌器皿均匀放入恒温干燥箱内，便不得与内层底板直接接触。关闭箱门，开户电源开关，用恒温调节器，使温度上升至 160-170，维持 2h，即可达到灭菌目的。灭菌完毕后，需关闭电源开关，待温度降至 50以下时，方可开门取物，否则玻璃器皿可因骤冷而爆裂。4.培养基的制备 配制一般培养基的主要程序可分为：调配、溶化、调节Ph、澄清过滤、分装、灭菌、鉴定等步骤。调配：按培养基配方准确称取各成分，用少量水溶解。对于肉膏之类粘、胶状物，可盛在小烧杯或表面皿中称量，然后加水移入培

5、养基中。此外，也可放在称量纸上称量后直接放入水中，这时如稍微加热，肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨等极易吸潮物质，在称取时动作要迅速。此外，维生素、氨基酸、无机盐等微量成分，可预先配制高深度的贮备液，在配制培养基过程中再按配方比例取一定量加入培养液中即可。融化：将各成分混匀于水中，最好以流通蒸汽融化 0.5h，如在电炉上融化应随时搅拌，如有琼脂成分时，应注意防止外溢。融化后，应注意补充失去的水分，补足至原体积。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均

6、中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合制备大量培养基时，除玻璃器皿外，还可用搪瓷桶、铝锅等容器加热融化，但不可用锅或铁锅，以免金属离子进入培养基中影响细菌生长。调节 pH值：一般细菌用的培养 pH调整在 6.8

7、-7.2 之间，但也有需要酸性或碱性的培养基。培养基高压灭菌后，pH值约降低 0.1-0.2，故调节时应比实际需要的 pH值高 0.1-0.2。但有时也可降低 0.4，因所使用的灭菌器不同而不同。调节 pH值，用盐酸和氢氧化钠，因为在相同 pH值下，有机酸比无机更易抑制微生物生长，因此，除非特殊情况，最好不要用乙酸等有机酸来调节 pH值。一般用精密 pH试纸调节（精确到 0.1pH 单位），必要时也可酸度计。调节时需注意逐步滴加，勿使过酸或过碱而破坏培养基中某些组分。过滤澄清：培养基配成后，一般都有沉渣或混浊，需过滤，使其清晰透明方可使用。液态培养基常用滤纸过滤；固态培养基如琼脂培养基，加热后

8、需趁热用脱脂棉或多层纱布过滤。分装：将调节 pH值后的培养基按需要趁热分装于三角瓶或试管内，以免琼脂冷凝。分装量不宜超过容器的 2/3，以免灭菌时外溢。分装时应注意勿使培养基粘附于管口与瓶口部位，以免沾染棉塞而滋生杂菌。基础培养基一般常分装于三角瓶内，分装的量应根据使用目的和要求决定，但必须定量分装，以便灭菌后使用。琼脂斜面分装量为试管容量的 1/5，灭菌后须趁热放置成斜面，斜面长度约为试管长度的 2/3。半固体培养基分装量约占试管长度的 1/3，灭菌后趁热直立，待冷却凝固。高层琼脂分装量约为试管长度的 1/3，灭菌后直立凝固待用。琼脂平板是将灭菌后的培养基，冷却至 50左右，在无菌条件下倾入

9、灭菌平皿内。内径 9cm的平皿倾注培养基约 15ml 左右，使培养基平铺于皿底部，凝固后即成。倾注培养基时，切勿将皿盖全部启开，以免空气中尘埃及细菌落入。新制成的培养平板，表面水分较多，不利于细菌的分离，通常应将平皿倒扣置于 37培养箱内约 30min，待平板干燥后使用。灭菌：加热配制培养基后，在 2h 内进行了灭菌处理。不要把未灭菌的培养基冷藏或存放。绝大多数培养基都应放在高压灭菌器内于 121灭菌，并应在达到这一温度后持续 15min。糖类液态培养基或含有其他特殊成分的培养基，长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找

10、到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合高压蒸汽灭菌会使其分解，一用滤膜过滤灭菌。或者将不耐热物质用其他方法灭菌（如流通蒸汽灭菌）后，再加入已灭菌的培养基

11、中。保存：配制好的培养基，不宜保存过久，以少量勤配制为宜。每批应注明制作日期。已灭菌的培养基可在 4-10存放 1 个月。存放时应避免阳光直射，并且要避免杂菌浸入和液体蒸发。当发酵管中的液体培养基存放在冰箱或者适中的低温时，可能有空气溶解进去，以致在 37培养时，会在管内形成空气泡。因此，凡存放在低温的发酵管，使用前应先予以培养过夜，弃去有气泡的管子。液态培养基在室温下存放超过一周，可能有水分蒸发，如果管内液体损失10%，应弃去不用。5.各种培养基的成分与制备 为减少配制中的误差，尽量选用市售已配好的综合培养基。（1）营养琼脂培养基 蛋白胨 10 牛肉浸膏 3 氯化钠 5 琼脂 15-20 蒸

12、馏水 1000ml 将上述成分混匀后，调节 pH为 7.4-7.6，过滤去除沉淀，分装于玻璃容器中，经 121高压蒸汽灭菌 15min，贮存于暗处备用。（2）乳糖蛋白胨培养液 蛋白胨 10 牛肉浸膏 3 氯化钠 5 乳糖 5 1.6 溴甲酚紫乙醇溶液 1ml 蒸馏水 1000ml 将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氧化钠加热溶解于 1000ml 蒸馏水中，调节 pH为 7.2-7.4，再加入 1.6 溴甲酚紫乙醇溶液 1ml，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在 115高压蒸汽灭菌 20min，贮于暗处备用。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用

13、个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合此培养基适用于检验大肠菌群时作发酵试验用。根据实际需要，也可按上

14、述配方比例（除蒸馏水外）配成二倍、三倍或五倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。（3）品红亚硫酸钠培养基（多管发酵用）蛋白胨 10 乳糖 10 琼脂 20-30 磷酸氢二钾 3.5 无水亚硫酸钠 5ml 蒸馏水 1000ml 5碱性品红乙醇溶液 20ml 贮备培养基：先将琼脂加至 900ml 蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，渴匀使其溶解，再以蒸馏水补足至 1000ml，调节 pH为 7.2-7.4。趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽器中，在 115高压蒸汽灭菌 20min。贮于暗处备用。平板培养基：将上述贮备培养基加热融化。以无菌操作，根据

15、瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按 1：50 的比例吸取一定量的 5碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中；再按 1：200 的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸 10min 灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡红色为止（不宜多加）。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。立即将此种培养基适量（约 15ml）倾入已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过两周，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。（4）伊红美蓝培养基（ERB培养基

16、）蛋白胨 10 乳糖 10 琼脂 20 磷酸氢二钾 2.0 蒸馏水 1000ml 2伊红（曙红）水溶液 20ml 0.5 美蓝（亚甲基蓝）水溶液 13ml 贮备培养基：先将琼脂加至 900ml 蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，渴匀使其溶解，再以蒸馏水补足至 1000ml，调节 pH为 7.2-7.4。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小

17、表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽器中，在 115高压蒸汽灭菌 20min。贮于暗处备用。平板培养基：将上述贮备培养基加热融化。以无菌操作，根据瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的 2伊红水溶液及 0.5 美蓝水溶液加入已融化的培养

18、基内，并充分混匀（防止产生气泡）。当混合好的培养基冷却至 45，便立即将此种培养基适量（约 15ml）倾入已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。四、操作步骤 l 水样的采取(1)自来水：先将自来水龙头用火焰烧灼 3min 灭菌，再开放水龙头使水流5min 后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。(2)池水、河水或湖水：应取距水面 l0 15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存 2细菌总数测定(1)自来水 用灭菌吸管吸取 lml 水样，注入灭菌培养皿中。共做两

19、个平皿。分别倾注约 15mL己溶化并冷却到 45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15mL作空自对照。培养基凝固后，倒置于 37 温箱中，培养 24h，进行菌落计数。两个平板的平均菌落数即为 lml 水样的细菌总数。(2)池水、河水或湖水等 稀释水样：取 3 个灭菌空试管，分别加入 9ml 灭菌水。取 lml 水样注入第一管 9ml 灭菌水内、摇匀，再自第一管取 1ml 至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为 10-1、10-2 与 10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在

20、30300 个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原

21、乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合一般中等污秽水样，取 10-1、10-2、10-3 三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、10-4 三个连续稀释度。自最后三个稀释度的试管中各取 lmL 稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。各倾注 15ml 已溶化并冷却至 45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。凝固后倒置于 37培养箱中培养 24h。3菌落计数方法(1)先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数

22、。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘 2 以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。(2)首先选择平均菌落数在 30300 之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数。(3)若有两个稀释度的平均菌落数均在 30300 之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于 2，应采取两者的平均数；若大于 2，则取其中较小的菌落总数。(4)若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。(5)若所有稀释度的平均菌落数均小于 30，则应按稀释度最低的平

23、均菌落数乘以稀释倍数。(6)若所有稀释度的平均菌落数均不在 30300 之间，则以最近 300 或 30的平均菌落数乘以稀释倍数。五、实验报告 1结果（1）自来水（2）池水、河水或湖水等 2思考题（1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截

24、小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合（2）你所测的水源水的污秽程度如何？（3）国家对自来水的细菌总数有一标准，那么各地能否自行设计其测定条件（诸如培养温度，培养时间等）来测定水样总数呢？为什么？实验二、实验室环境和人体表面微生物的检查 一、目的要求 1.证明实验室环境与体表存在微生物。2比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。3观察不同类群微生物的菌落形态特征。4体会无菌操作

25、的重要性。二、基本原理 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养 12d 内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。三、器材 l 培养基：肉膏蛋白胨琼脂平板。2仪器或其他用具：无菌水，灭菌棉签(装在试管内)，接种环，试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔，废物缸。四、操作步骤 每组在“实验室”和“人

26、体”两大部分中各选择一个内容做实验，或由教师指定分配，最后结果供全班讨论。l 写标签 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源(如实验室空气或无菌室空气或头发等)，字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均

27、点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。2实验室细菌检查(1)空气：将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。lh 后盖上两个皿盖。(2)实验

28、台和门的旋钮 用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。取棉签：左手拿装有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞(或试管帽)，将其取出，将管口很快地通过煤气灯(或酒精灯)的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。塞回棉塞(或试管帽)，并将空试管放在试管梁上。弄湿棉签：左手取灭菌水试管，如上法拨出棉塞(或试管帽)并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，塞回棉塞(或试管帽)，并将灭菌水试管放在试管梁上。取样：将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约 2cm2的范围。接种：在火焰旁用

29、左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝，再将棉签伸人，在琼脂表面顶端接种，即滚动一下，立即闭合皿盖。并按图 27-2E和 F，将原放棉签的空试管拨出棉塞(或试管帽)，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。划线：另取接种环在火焰上灭菌，按图 33 方法进行划线，整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。3人体细菌的检查（1）手指(洗手前与洗手后)分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后(班级、姓名日期)。移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。长是厘米的正方体拼成一成

30、的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合(2)头发：在揭开皿盖的

31、琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到玻脂平板表面，然后盖上皿盖。A.接种时，用左手将平皿开启一缝；B.棉签伸入平板接种；C.用己灭菌并冷却了的接种环划线；D.第二部分划线；E.最后部分划线(3)咳嗽：将去皿盖的琼脂平板放在离口约 68cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。(4)鼻腔 按照实验台检查法的步骤和，取出棉签，并将其弄湿。用湿棉签在鼻腔内滚动数次。按实验台检查法的步骤和，接种与划线，然后盖上皿盖。4将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，放 37培养箱，培养 12d。五、结果记录方法(1)菌落计数 在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4 面积内的菌落数。

32、不是划线的平板，也一分为四，数l/4 面积的菌落数。(2)根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。菌落特征描写方法如下：大小：大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。颜色：黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。干湿情况：干燥、湿润、粘稠。形态：圆形、不规则等。高度：扁平、隆起、凹下。透明程度：透明、半透明、不透明。边缘：整齐、不整齐。长是厘米的正方体拼成一成的个这

33、表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合六、菌落总数计算方法 3A T

34、N 50000空气中细菌总数（cfu/m）=N式中：平皿菌落数；2A)cm平皿面积（；T平皿暴露时间(分钟)七、实验报告 1结果（1）将你自已的平板结果记录于下表中。（2）与其他同学所做的结果进行比较 2思考题(1)比较各种来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？(2)人多的实验室与无菌室(或无人走动的实验室)相比，平板上的菌落数与菌落类型有什么区别？你能解释一下造成这种区别的原因吗？(3)洗手前后的手指平板，菌落数有无区别？(4)通过本次实验，在防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面，你学到些什么？有什么体会。实验三 大气环境中 TSP 的测定 一、目的要求 大气环境中 TSP 是一

35、种常规的污染物，它们对人体健康、植被生态和能见度等都有着非常重要的直接和间接影响。因此，对 TSP 污染物的浓度监测是环境监测中一项重要的工作。本实验在校园中及附近的工业区、公路傍进行采样分析。通过本实验，应达到以下目的：（）掌握重量量测定大气环境中 TSP 浓度的方法；（）了解 TSP 污染物对人体健康的危害；（）学习环境监测中质量控制和保证的概念。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交

36、换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合二、基本原理 通过具有一定切割特性的采样器，以恒速抽取一定体积的空气，空气中粒径小于 100m的悬浮颗粒物被截留在已恒重的滤膜上。根据采样前、后滤膜质量之差及采样体积，计算总悬浮颗粒物的浓度。滤膜经处理后，可再进行组分分析。本方法适用于大流量或中

37、流量总悬浮颗粒物采样器（简称采样器）进行空气中总悬浮颗粒物的测定。方法的检测限为 0.001mg/m3。总悬浮颗粒物含量过高或雾天采样使滤膜阻力大于 10kPa 时，本方法不适用。三、实验仪器和材料（1）大流量或中流量采样器：1 台，应按1.1-89 总悬浮颗粒物采样器技术要求（暂行）的规定。（2）大流量孔口流量计：1 个，量程 0.7-1.4m3/min，流量分辨率 0.01m3/min，精度优于2。（3）中流量孔口流量计：1 个，量程 70-160L/min，流量分辨率 1L/min，精度优于2。（4）U型管压差计：1 个，最小刻度 0.1hPa。（5）X光看片机：1 台，用于检查滤膜有无

38、缺损。（6）打号机：1 台，用于在滤膜及滤袋上打号。（7）镊子：1 个，用于夹取滤膜。（8）超细玻璃纤维滤膜：10 片，对 0.3 m标准粒子的截留效率不低于 99，在气流速度为 0.45m/s 时，单张滤膜阻力不大于 3.5kPa，在同样气流速度下，抽取经高效过滤器净化的空气 5h，1cm2滤膜失重不大于 0.012mg。（9）滤膜袋：10 个，用于存放采样后对折的采尘滤膜，袋面印有编号、采样日期、采样地点、采样人等项栏目。（10）滤膜保存盒：1 个，用于保存、运送滤膜，保证滤膜在采样前处于平展不受折状态。（11）恒温恒湿箱：1 台，箱内空气温度要求在 15-30范围内可调，控温精度1；箱内

39、空气相对湿度控制在（505），恒温恒湿箱可连续工作。（12）总悬浮颗粒物大盘天平：1 台，用于大流量采样器滤膜称量，称量范围10g，感量 1mg，标准差2mg。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成

40、要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合（13）分析天平：1 台，用于中流量采样滤膜称量，称量范围10g，感量0.1mg，标准差0.2mg。四、实验方法和步骤 1.采样器的流量校准 新购置或维修后的采样器在启用前，须进行流量校准。其校准方法按仪器使用说明书进行。2.总悬浮颗粒物含量测试（1）滤膜准备：每张滤膜均需用 X光看片机进行检查，不得有针孔或任何缺陷。在选中的滤膜光滑表面的两个对角上打印编号。滤膜袋上打印同样编号备用。将滤膜放在恒温恒湿箱中平衡 24h，平衡温度取 15

41、-30中任一点，记录下平衡温度与湿度。在上述平衡长期保持下称量滤膜，大流量采样器滤膜称量精确到 1mg，中流量采样器滤膜称量精确到 0.1mg。记录下滤膜质量 m0(g)。称量好的滤膜平展地放在滤膜保存盒中，采样前不得将滤膜弯曲或折叠。（2）安放滤膜及采样：打开采样头顶盖，取出滤膜夹。用清洁干布擦去采样头内及滤膜夹上的灰尘。将已编号并称量过的滤膜绒面向上，放在滤膜支持网上，放上滤膜夹，对正，拧紧，使不漏气。安装好采样头顶盖，按照采样器使用使用说明，设置采样时间，即可启动采样。样品采完后，打开采样头，用镊子轻轻取下滤膜，采样面向上，将滤膜对折，放入号码相同的滤膜袋中。取滤膜时，如发现滤膜损坏，或

42、滤膜上尘的边缘轮廓不清晰、滤膜安装歪斜（说明漏气），则本次采样作废，需重新采样（记录表格见附录 C）。（3）尘膜的平衡及称量：尘膜在恒温恒湿箱中，与二次滤膜平衡条件相同的温度、湿度下，平衡 24h。在上述平衡条件下称量滤膜，大流量采样器滤膜称量精确到 1mg，中流量采样器滤膜称量精确到 0.1mg。记录下滤膜质量 m1(g)（记录表格见附录 D）。滤膜增重，大流量滤膜不小于 100mg，中流量滤膜不小于 10mg。（4）计算：103/NKmmug mQt总悬浮颗粒物含量（）式中：t 累积采样时间，min；QN采样器平均抽气流量，即式（1-3）或式（1-4）QHN或 QMN的计算值；长是厘米的正

43、方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合K常数，大流

44、量采样器 K=1x 106,中流量采样器 K=1x 109。（5）测试方法的再现性：当两台总悬浮颗粒物采样器安放位置相距不大于4m，不少于 2m时，同时采样测定总悬浮颗粒物含量，相对偏差不大于15。五、数据记录与处理 按下表进行。六、问题分析与讨论 1.大气环境中的 TSP 的主要污染来源有哪些？2.大气环境中的 TSP 有哪些危害？3.如何预防 TSP 的污染？长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适自

45、二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合 实验四 空气中甲醛污染的测定监测 一、目的要求 室内空气污染对人体健康的影响最为显著，与大气环境相比有其特殊性。室内空气污染监测是评价居住环境的一项重要工作。本实验选择刚装修完和装修已久的不同房间，或者在一个刚装修完房间的不同通风条

46、件下，进行采样分析。通过本实验达到以下目的：（1）掌握酚试剂分光光度法测定空气中甲醛浓度的方法；（2）初步了解影响室内空气质量的因素。二、基本原理 甲醛与酚试剂反应生成嗪，在高铁分子存在下，嗪与酚试剂的氧化产物反应生成蓝绿色化合物，在波长 630nm 处，用分光光度法测定。采样体积为 5mL 时，村法检出限为 0.02g/m3，当采样体积为 10L 时，最低检出浓度为 0.01mg/m3。三、实验仪器和试剂 1仪器（1）大型气泡吸收管：10 只，10mL。（2）空气采样器：1 台，流量范围 0-2L/min。（3）具塞比色管：10 只，10mL。（4）分光光度计：1 台。2试剂（1）吸收液：称

47、取 0.10g 酚试剂（3-甲基-苯并噻唑胺，C6H4SN(CH3)C：NNH2.HCl，简称 MBTH），溶于水中，稀释至 100mL，即为吸收原液，贮存于棕色瓶中，在冰箱内可以稳定 3 天。采样时取 5.0mL 原液加入 95mL，即为吸收液。（2）硫酸铁铵溶液（10g/L）：称取 1.0g 硫酸铁铵，用 0.10mol/L 盐酸溶液溶解，并稀释至 100mL。长是厘米的正方体拼成一成的个这表面积是的在零件中有在次有品重些用个这表面积是天平厘米成秤至表长是少就成秤至表定能找到把根绳子均截段每全分数单的位它样减去可以看出据情况定二均中对况定数单错我成秤会判的至表用共整加法交换律结合二均中同适

48、自二均中加法交换律结合二均中然表成最适大段每用质小表同形两小表的条称相于小表二均点小表绕顺小表时顺针称相适点的旋转截小表称相适点的旋转后与原的称相适点来第而只三些或对上下各中用既奇又成大旋转木旋料宽厚锯用增成要旋使倍里填用四走成要旋进计使旋转木绕顺算看或原乐园直接写大得解程题四简小表锯用旋转木旋转用增成?四走成要旋使倍旋转?看对?换?秤写?填锯用?正方旋转使倍第?合（3）硫代硫酸钠标准溶液（0.10mol/L）：称取 26g 硫代硫酸钠（Na2S2O3.5H2O）和 0.2 无水碳酸钠溶于 1000mL 水中，加入 10mL 异戊醇，充分混合，贮存于棕色瓶中。（4）甲醛标准溶液：量取 10mL

49、 浓度为 36-38的甲醛，用水稀释至500mL，用碘量法标定甲醛溶液浓度。使用时，先用水稀释至每毫升含 10.0 g甲醛的溶液，然后立即吸收 10.00 mL 此稀释液于 100 容量瓶中，加 5.0 吸收原液，用水稀释至标线。此溶液每毫升含 1.0 g 甲醛。放置 30min 后，用此溶液配制标准色列，此标准溶液可稳定 24h。标定方法：吸取 5.00mL 甲醛溶液于 250mL碘量瓶中，加入 40.00mL0.10mol/L碘溶液，立即逐滴加入浓度为 30%的氢氧化钠溶液，至颜色褪至淡黄色为止。放置 10min，用 5.0mL 盐酸溶液（1:5）酸化（空白滴定时需多加 2mL）。置暗处放

50、10min，加入 100-150mL水，用 0.1mol/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加1.0mL 新配制的 5%淀粉指标剂，继续滴定至蓝色刚刚褪去。加取 5mL水，同上述方法进行空白滴定。按下式计算甲醛溶液浓度：223015.05.00Na S OfVVc 式中：f被标定的溶液的浓度，g/L；V0、V分别为滴定空白溶液、甲醛溶液所消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积，mL；223Na S Oc硫代硫酸钠标准溶液浓度，；15.0 与 1L 1mol/L的硫代硫酸钠标准溶液等当量的甲醛质量，g。四、采样与测定 1.采样 用内装 5.00mL 吸收液的气泡吸收管，以 0.5l/min流量，采气 1