2023年细胞工程实验总结细胞工程实验设计优质.docx

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1、2023年细胞工程实验总结细胞工程实验设计优质 总结是对过去肯定时期的工作、学习或思想状况进行回顾、分析，并做出客观评价的书面材料，它有助于我们找寻工作和事物发展的规律，从而驾驭并运用这些规律，是时候写一份总结了。优秀的总结都具备一些什么特点呢？又该怎么写呢？下面是我整理的个人今后的总结范文，欢迎阅读共享，希望对大家有所帮助。 细胞工程试验总结 细胞工程试验设计篇一 2了解甲基绿-派洛宁、中性红-詹姆斯绿的染色原理和着色现象。 3.驾驭细胞核、线粒体等细胞器的染色方法。 试验原理 球形颗粒的沉降速率取决于其密度、半径、介质黏度和离心力。 差速离心法（differential centrifug

2、ation）是将细胞匀浆在密度均一的介质中从低速到高速离心，较大颗粒先在低速离心时沉淀，再用高速离心上清液中的小颗粒物质，从而达到逐级分别细胞器的目的。 细胞器的分别常通过组织细胞匀浆、分级分别和分析三个步骤完成。 分级分别方法有两种，即：差速离心法和密度梯度离心法。 细胞器沉降先后依次是细胞核、线粒体、溶酶体和替他微体、核糖体和大分子物质。 线粒体内膜上分布细胞色素氧化酶，能使詹纳斯绿 b 燃料保持在氧化状态呈现蓝绿色，而胞质中的颜料被还原成无色。 试验用品 1器具：匀浆器、高速冷冻离心机、天平、一般光学显微镜、1.5 ml ep 管、载玻片、10 ml 滴管、冰盒、冰块、滤网、染缸、20

3、ml 烧杯。 2材料：动物肝脏。 3试剂：生理盐水、pbs、0.25 mol/l 的蔗糖溶液、0.34 mol/l 的蔗糖溶液、0.88 mol/l 的蔗糖溶液、95%乙醇、丙酮、甲基绿派洛宁、中性红詹纳斯绿、蒸馏水、冰。 4.甲基绿-派洛宁染液： 0.2mol/l 醋酸缓冲液(ph4.8)：冰醋酸 1.2ml，加蒸馏水至 100ml；醋酸钠 2.72g 溶于 100ml 蒸馏水中;运用时两液按 2：3 比例混合.a液：5%派洛宁水溶液4ml、2%甲基绿水溶液14ml、蒸馏水16ml；b液：0.2mol/l。醋酸缓冲液(ph4.8)16 ml。运用时临时将 a 液与 b 液混合(5:2)。 5

4、）中性红-詹纳斯绿 b 染液： a: 将 3 滴詹纳斯绿 b 饱和水溶液(溶解度 5.18)加到 5ml 无水乙醇中，然后再加入 1ml 1:15000 中性红溶液(中性红 10mg 溶于 150ml 水中)，瓶子用黑纸包好，4冰箱保存。 试验步骤 1组织匀浆制备 肝脏用预冷的生理盐水洗净血污，用滤纸吸干。 称取约 1 g 左右的肝组织，用预冷的 0.25 mol/l 的蔗糖溶液冲洗数次，剪碎。以预冷的 0.25 mol/l 的蔗糖溶液 4.5ml 悬浮剪碎的组织，移入匀浆器内，在冰浴条件下匀浆（蔗糖溶液分数次加入）。（0.25 mol/l 的蔗糖溶液使肝脏细胞在匀浆的过程中处于低渗条件下，使

5、得细胞更简单破裂，匀浆彻底）2.细胞器的分级分别 2.1 细胞核的分别： 将组织匀浆分装到 1.5ml 离心管中，3000rpm,离心 10min，沉淀为细胞核及质膜碎片。（上清液留作线粒体分别）2.2沉淀用1ml 0.25mol/l蔗糖溶液洗涤离心2次，每次4000r/min离心10min； 2.3 将沉淀用 500l 0.34mol/l 蔗糖溶液悬浮，然后在悬液下轻轻加入0.88mol/l 蔗糖溶液 400l，尽量使溶液分层，5000r/min 离心 15-20min； 2.4 用 pbs 溶液悬浮涂片干燥95%乙醇固定（5min）甲基绿-派洛宁染色 15-20min放入丙酮分别 30s蒸

6、馏水漂洗吸干镜检。 (2)线粒体的分别 将分别细胞核时收集的上清以 10000g 离心 10 min，弃去上清。沉淀用预冷的 0.25 mol/l 的蔗糖溶液 1ml 重悬后，10000g 离心 10 min，取沉淀。 (3)线粒体的鉴定 于干净载玻片上滴 1 滴中性红-詹纳斯绿 b 染液，用牙签挑取线粒体沉淀匀称涂于染液中，染色 5-10 min，盖上盖玻片，镜检。 结果与分析 光学显微镜下视察，可看到富集分别的细胞核，细胞核呈圆球形，核中心可见到两个或多个被染成红色的核仁，外围的物质被染成蓝绿色；线粒体经詹纳斯绿 b染色呈蓝绿色，呈棒状或哑铃状。 留意事项 1组织匀浆时，既要尽可能使细胞完全破裂，又要尽量快速。 2在细胞器分别过程中，全部操作应尽可能在低温下进行。 3试验过程应留意保持细胞器的完整性，避开操作过于猛烈。 思索题 1 简述细胞器分级分别的试验原理和主要步骤？ 2试验操作中有哪些关键步骤和因素影响所得细胞器的含量和纯度？ 细胞工程试验指导 (试验一) vfp试验一 必修一试验 数字信号试验一