实验室无菌操作注意事项.docx

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1、实验室无菌操作注意事项操作时进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流 动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用 火焰烧灼消毒或取备品更换。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应 是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中 央。工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之 前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重 复使用，应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。吸取营养液、 PBS、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混 用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作野讲话或咳嗽，以

2、免唾沫把细菌或支原 体带入工作台面发生污染。操作前用酒精擦拭超净台面及双手。 手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染， 加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。培养前准备在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计 算要事先做好。根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点 无误后将其放置操作场所（培养室、超净台）内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后.囚物品不全往返拿取而增加污染机 会。操作也消毒无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面一次（拖 布要专用）.紫外线照射消毒30-50min,超净工作台台面每次 实验前要用75%酒精擦洗。然后紫外线淌毒30min。在工

3、作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外 线，消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置.否则会遮挡射 线降低消毒效果。一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试 管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成 功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗 心大意，技术操作不规范，也会导致污染。因而.为在一切操作 中为最大可能的保证无菌.每一项工作都必须做到有条不紊和完 全靠。洗手和着装原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时，可 穿装细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超 净台工作时，因整个前臂要伸入

4、箱内，应着长袖的清洁工作服， 并于开始操作前要用75%酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重 新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消 毒衣帽。火焰消毒在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点燃酒精 灯或煤气灯。以后一切操作，如按装吸管帽、打开或封闭瓶口 等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意：金属器械不能在为焰中烧的时间过长，以防退 火，烧过的金属镣要待冷却后才能挟取组织，以免造成组织损 伤。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头 中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时，火焰灭菌时间要短。防止 因温度过高烧死细胞。另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧 焦产生有毒气体，危害培养细胞。