pcr岗位职责.docx

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1、pcr岗位职责 篇：PCR销售经理岗位职责举荐1.负责PCR诊断产品的销售，独立或在经销商协作下完成所担当的销售任务。2.协作PCR大区经理建立、健全分销渠道。3.实施执行该区域营销及客户开发安排。4.协作大区经理调査及分析市场。 第2篇：PCR试验室简介Pcr试验室又叫基因扩增试验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特别DNA复制。通过DNA基因追踪系统，能快速驾驭患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别，精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、

2、是否必要服药、肝功能有否异样变更能刚好推断病人最适合运用哪类抗病毒药物、推断药物疗效如何、给临床治疗供应了牢靠的检验依据条件1、必需拥有标准的的PCR荧光试验室; 实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出 由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它 有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广 泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍2、检测设备必需符合标准PCR荧光试验室设置要求; 荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系

3、统。3、必需通过国家临床检验中心的验收和认证;4、检测人员必需通过国家临检中心业务培训并取得合格证书; PCR试验室内工作人员必需参与由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR试验室通过验收，试验室至少必需应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR试验室必需建立严格的试验室管理制度、建立标准化操作程序（SOP）、建立系列质量管理文件等，确保试验室日常运行符合国家卫生部的要求，确保检测结果精确、确保试验室卫生平安，确保试验室长期稳定运行5、必需在无菌无尘环境下进行操作功能能够对患者病情进行科学、精确、实时的掌控，并结合抗HBV与T细胞免疫来打破免疫耐受，阻断肝

4、病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒，解决了乙肝病毒易变异、耐药，病毒复制模板难以治疗，人体免疫耐受状态不易打破等医学难题，能快速消退临床症状，而且有效抑制乙肝病毒复制，明显加快e抗原、抗体的血清转换速度，杀灭血液及肝细胞内的病毒，为防止再感染供应了长期爱护，有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程。建立方法1、建立样品打算区这个区域特地用作样品的打算，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应当实行预防措施：PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。组织培育物、组织标本和血清样品都带进样品打算间处理，以依据应用的须要提取DNA或RNA。用于样品处理的工具不能被用作一般分子克隆的工具，也不能

5、用作操作靶序列。DNA样品应当用有特地的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。大体积样品应当用单独包装的无菌一次性移液管吸取。管子打开前都要简短离心以削减气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。任何时候都应当穿试验服和带手套，手套要常常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。试验服要特地用于样品打算间，常常清洗。2、样品打算和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤须要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避开这一问题，反转录一步可以在样品打算区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。3、建立前PCR区。该去特地用于打算各种

6、反应，这个区域必需保持干净，而且没有来自克隆和样品打算的污染。前PCR区必需要有试剂和打算，特殊是特地用于前PCR区的正压活塞式移液管。4、PCR试验室试剂的操作。所用的全部溶液都应当没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。全部PCR试剂中运用的水都应当是高质量的簇新蒸馏的去离子水，用0.22m过滤的，并且是高压灭菌。在20到25贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。所用试剂都应当以大体积配制，试验一下看试剂是否满足，然后分装成仅够一次运用的量进行贮存。全部试剂和样品打算过程中都要运用一次性灭菌的瓶子和管子。

7、新配制的试剂在用于打算新的标本之前应当加以检验。样品打算和前PCR区所运用的移液管在不运用时都应当当心保存。5、在前PCR区建立PCR混合物。可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20或4，在试验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。假如你的试验室运用多套引物，以致于配制包括全部试剂的单一反应混合物不够经济，可以考虑分装保存够一天的PCR成分。作为一个规则，应当保存一套阴性、弱阳性和强阳性比照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和干净程度。而且，你也希望通过运用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。阴性样品要与每组样品同时做，以分析是否

8、存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染，阴性比照应当包括核酸以外的全部试剂。当做阳性比照时，有两个理由确定了应当运用最少数量的核酸。由于必需有比照反应，比照模板的特点应当予以考虑。6、限制污染的方法。已设计出很有力的酶学方法用来消退一种形式的污染运用UNG，这一技术能有效地消退由PCR产物引起的污染。另一种限制污染的方法是运用紫外线，这种方法不能完全消退污染问题，但可以将污染降低几个数量级。7、后PCR区PCR完成以后，须要分析样品并说明数据，应当留出一个特地用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中运用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必需是特地用于这一目的，决不能把试验室这一区域的

9、试剂或仪器用于任何前PCR活动第3篇：检验PCR复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 耗材质检的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ- PCR-006生效日期：2023年03月01日页码： 第 1页，共 4 页耗材质检的标准操作程序 1.目的：保证每批用于临床基因扩增检验试验室的耗材质量能符合临床基因扩增检验试验室检验要求，保证新批次的耗材不对检验结果产生偏差。2.适用范围：各种用于临床基因扩增检验试验室的离心管和吸头 3.操作人: 陈宇明季秀玲 4.程序细则全部验收标准均依据本试验室检验标本的要求制定，所制定的验收方法仅适用于本试验

10、室耗材的验收。4.1 离心管的验收 4.1.1 目测:检查离心管有无畸形、破损、盖子无法关闭。 4.1.2 试验检测：每批随机抽样10个离心管用于试验检测。 4.1.3 加半量生理盐水后，10000rpm 20min，如发觉有管盖爆开或漏液状况发生，即认为该批离心管不符合本临床基因扩增检验试验室试验要求，作退货处理。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 可移动紫外消毒车运用的 标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-016生效日期：2023年03月01日页码： 第 2 页，共 3 页4.1 当紫外灯管损坏时须更换紫外灯管，保证消

11、毒的效果。 4.2 消毒后应记录在临床基因扩增检验试验室日记录表中记录1.临床基因扩增检验试验室日记录表（样张）.复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 可移动紫外消毒车运用的 标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-016生效日期：2023年03月01日页码： 第 3 页，共 3 页培训记录签名 日期 签名 日期 签名 日期年度审核记录签名日期年月日签名日期年月日签名日期年月日签名日期年月日签名日期年月日复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件

12、编号：HS-JY-CZ-PCR-017生效日期：2023年03月01日页码： 第 1 页，共 13 页室内质量限制的标准操作程序1.目的：随时了解并限制临床基因扩增检验试验室检测的精密度改变。 2.适用范围：各种临床基因扩增检验项目检测全过程 3.相关职任人: 王洁 陈宇明 季秀玲 4.程序细则4.1临床基因扩增检验试验室的室内质量限制指整个基因扩增检验的全部阶段，包括测定分析前的标本采集处理，测定中的核酸提取、扩增和产物分析以及测定后的结果报告各步骤的质量限制。4.2质控物：1个试剂空白、1个阴性和2个水平的阳性质控与待测临床标本同等处理提取核酸及扩增检测，试验结束后将质控数据记录在临床基因

13、扩增检验试验室日记录表中。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017生效日期：2023年03月01日页码： 第 2 页，共 13 页4.3阴性质控：仅有扩增反应液但不含扩增模板的反应管。4.4阳性质控：HBV-DNA用已知的阳性质控品或HCV-RNA用临床阳性标原来监测核酸提取及扩增效率；用已提取纯化的靶DNA或cDNA来监测基因扩增的有效性。 4.5试验有效性推断：临床基因扩增检验试验室负责人核对阴性、阳性质控品的检测结果值，若与预期结果相符，可判定待测标本测定结果有效，

14、一旦质控中有出现任何检测结果与预期值不相符，均应判定试验无效。详细参见试验结果有效性推断的标准操作程序。4.6定量结果判定：临床基因扩增检验试验室检测操作的工作人员用已知拷贝数的阳性标准品浓度梯度系列同步扩增检测，建立标准曲线（拟合度应0.970）,然后依据标准曲线推算出待测样本的拷贝数。4.7临床基因扩增检验试验室负责人运用Westgard多规则限制程序作为质控推断规则。老婆我爱你 2023-8-17 16:14:08复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017生效日期：2

15、023年03月01日页码： 第 9 页，共 13 页4.10.3分析时发觉大批甚至全部的标本都扩增了（结果均有数值出现），推断为失控。 4.10.4 分析发觉阳性比照没有扩增或者结果4.10.5分析时发觉全部标准曲线CT值与平常均至少相差+/-3或以上时，推断为失控。 4.10.6分析时发觉标准品曲线数少于4个时，应推断为失控。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017生效日期：2023年03月01日页码： 第 10 页，共 13 页4.11室内质评的持续性改进程序4.11

16、.1 每半年分别统计HBV-DNA和HCV-RNA在1年内（数据跨度多于1年的统计1年中的数据）的全部斜率、截距、回来率和每次用来构建标准曲线的标准品浓度梯度数量。求出均值和SD；分别统计临床基因扩增检验试验室每个操作的工作人员各个项目各个批号凹凸值质控品的CV值，分别求出各人全部高值质控品和低值质控品的CV值均数和SD。 4.11.2视察斜率、截距的均值2SD所求出的值是否在所规定的范 围之内，视察回来率。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017生效日期：2023年03

17、月01日页码： 第 11 页，共 13 页4.11.3 实施整改3个月后统计此3个月数据，对整改措施做出评估，写出对整改措施的评估报告，分析整改措施对检验质量改善、无效或者导致检验质量下降的缘由。若统计数据表明措施无效或措施使试验质量变得更糟糕则去除该措施，依据分析的缘由重新制定整改措施；若数据表明整改措施导致检验质量改善，应将整改措施中的内容在修改质量手册时写入。 4.11.4全部书面整改措施报告、对整改措施的评估报告、统计资料存档保存至少2年。 4.11.5 每季度统计HBV-DNA、HCV-RNA标本检测的阳性率、复做率、阴性率，以监测试验的质量。全部记录保存至少2年。老婆我爱你 202

18、3-8-17 16:14:47 复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017生效日期：2023年03月01日页码： 第 12 页，共 13 页参考文献1.乙型肝炎病毒（HBV）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒运用说明书.2.冯仁丰.统计质量限制.冯仁丰主编.临床检验质量管理技术基础.上海：上海科技技术文献出版社，2023：151-241.3.吴星，王佑春，张华远等.乙型肝炎病毒DNA国家定量标准品的研制及初步应用.中华肝脏病杂志.2023，11（7）：402-404.相关

19、文件1.临床基因扩增检验试验室试验结果有效性推断的标准操作程序.临床基因扩增检验试验室标准操作程序（第一版）.2023：120-123.记录1.华山医院2023年14月临床基因扩增检验试验室HBV和HCV截距统计表.2.临床基因扩增检验试验室日记录表（样张）.3.室内质控失控记录表（样张）.复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017生效日期：2023年03月01日页码： 第 13 页，共 13 页培训记录签名 日期 签名 日期 签名 日期年度审核记录签名日期年月日签名日期年

20、月日签名日期年月日签名日期年月日签名日期年月日复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室间质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-018生效日期：2023年03月01日页码： 第 1 页，共 6 页室间质量限制的标准操作程序1.目的：室间质评（EQA）是临床基因扩增检验试验室质量限制体系中重要部分，是保证患者检验结果和其报告的精确性和牢靠性，以及各临床基因扩增检验试验室间结果的可比性的重要手段。2.适用范围：临床基因扩增检验室 3.相关职任人: 王洁 季秀玲 陈宇明 4.程序细则4.1室间质控标本的处理、检测和结果上报

21、4.1.1 质控标本的接收和验收：收到质控血清后由临床基因扩增检验试验室负责人登记、签字，依据质控标本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20保存于样本打算室。 4.1.2 室间质控若须要复溶的，检测前先依据说明对质控物进行复溶。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室间质量限制的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-018生效日期：2023年03月01日页码： 第 2 页，共 6 页4.1.3 质控样本必需按临床基因扩增检验试验室常规工作进行，由进行常规工作的人员检测，工作人员必需运用临床基因扩增

22、检验试验室的常规检测方法和试剂，不得特别对待。检测结果须在截止日期前上报。 4.1.4 严禁与其它临床基因扩增检验试验室沟通室间质评的检测结果。 4.2 室间质控的持续性改进程序：分析前（降低样本拒收率）、分析中（缩短TAT）、分析中（削减报告补发率）。4.2.1质控的检测结果和反馈结果均记录于室间质控记录表，临床基因扩增检验试验室负责人依据反馈结果分析室间质控的状态，如有出控（无法接受的结果）应查找缘由，实行相应的措施，并写出书面整改报告。 4.2.2 检查收到标本后存放至报告发出的冰箱温度记录，视察是否有温度过高的记录，若有则可能是冰箱温度失控导致DNA或RNA的降解；若没有冰箱温度失控问

23、题，应解除标本收集保存方面的问题。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 耗材质检的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ- PCR-006生效日期：2023年03月01日页码： 第 2 页，共 4 页4.2 吸头的验收 4.2.1 目测：检查吸头有无畸形、破损。 4.2.2 试验检测:每批随机抽样10个吸头用于试验检测。 4.2.3 套上适合的吸头吸取适量液体，视察加样器的吸孔，在解除堵塞、漏气等加样器因素后，如有异样发觉，即认为该批吸头不符合本临床基因扩增检验试验室要求，作退货处理。 4.3 抑制物试验 4.3.1 全部新购买的耗材必

24、需经过抑制物试验，证明与前批次耗材没有抑制物差别方可正式启用，经上述检测发觉有不合格状况，作退货处理。 4.3.2 参加抑制物试验的离心管必需经（1212）15min高压消毒灭菌并烘干，带滤芯的吸头应当干脆参加抑制物试验。 4.4 根据试剂质检的标准操作程序，同时用老批号的耗材和新批号的耗材处理后，同时上机扩增，若发觉运用新批号耗材的结果与用老批号耗材的结果无系统性降低则说明新批号耗材通过抑制物试验。将试验结果记录在耗材验收记录表中。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 耗材质检的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ- PCR-006

25、生效日期：2023年03月01日页码： 第 3 页，共 4 页参考文献1.乙型肝炎(HBV) 荧光定量PCR检测的标准操作程序.临床基因扩增检验试验室标准操作程序（第一版）.2023:97-102.2.禽流感病毒通用荧光RT-PCR 检测方法.中华人民共和国国家标准 GB/T 19438.1-2023 相关文件1.试剂质检的标准操作程序临床基因扩增检验试验室标准操作程序.（第一版）.2023:17-21.记录1.耗材验收记录表（样张）.老婆我爱你 2023-08-14 15:09:04 复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 试剂质检的标准操作程序 版 本

26、号：1.0文件编号：HS-JY-CZ- PCR-007生效日期：2023年03月01日页码： 第 1页，共 5 页试剂质检的标准操作程序1.目的：保证每批用于临床基因扩增检验试验室的试剂质量良好，符合要求。2.适用范围：各种用于临床基因扩增检验试验室的核酸扩增荧光检测试剂（HBV、HCV） 3.操作人：季秀玲、陈宇明 4.程序细则4.1 收到试剂后，目测试剂是否处于冻存状态。4.2 核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、检测项目、批准文号、批号和有效期等）和内包装（试剂瓶完整性、真空包装完整性、运用说明书有否等）。 4.3 刚好将试剂转入试剂打算室的20冰箱保存。将标准品和阴阳性质控

27、品保存在样本打算室的20冰箱保存。4.4 最迟在前批次试剂存量可维持常规试验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验试验1。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 试剂质检的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ- PCR-007生效日期：2023年03月01日页码： 第 2 页，共 5 页4.5 效验试验1：在运用前批次试剂进行常规试验的同时带上少量新批次的试剂。用新批次试剂空白、阴性质控、低值阳性质控品、高值阳性质控以及2个随机选中的标本，若阴阳性质控结果均与前批试剂差别不大，2个标本的结果与前次结果均相符，可通过验收。若试剂空白、阴性

28、质控出现阳性结果、低值阳性质控品出现阴性结果或结果偏差太大等状况时要求对新批号试剂进行效验试验2。 4.6 效验试验2： 4.6.1 要求设置：试剂比照、阴性质控、低值阳性质控品、高值阳性质控各一管，阳性标准品梯度（103、104、105、106、107）。 4.6.2 出现如下状况中任何一种的，推断为试剂不合格，不能用于临床检测：a）空白比照出现扩增。如扩增曲线CT值大于27，需重复试验确证试剂污染。b）阳性比照和阳性标准品均未检出，或阳性比照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 试剂质

29、检的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ- PCR-007生效日期：2023年03月01日页码： 第 3 页，共 5 页4.6.3 阳性比照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。重复新旧提取液阳性比照试验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可运用。空白比照没有扩增，阴性质控出现扩增，解除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可运用该批试剂。 4.6.4 阳性比照检出，阳性标准品未被检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大3个循环以上。提示阳性标准品存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可投入运用。 4.6.

30、5 阴性质控没有扩增，阳性比照正常检出，相关性（0.971之间）均在运用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床运用。 4.7 将试验结果记录在试剂验收记录表中。老婆我爱你 2023-08-14 15:10:10复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 仪器设备管理的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-008生效日期：2023年03月01日页码： 第 1 页，共 4 页仪器设备管理的标准操作程序1.目的：保证临床基因扩增检验试验室的仪器设备得到妥当的管理，保障工作正常进行。 2.范围：临床基因扩增检验试验室的全部仪器设备3.职责：

31、仪器设备的管理、维护、保养等的详细事项由临床基因扩增检验试验室负责人负责管理。4.程序细则4.1 临床基因扩增检验试验室各试验室的仪器设备各试验室专用。4.2 建档管理：须要建档管理的临床基因扩增检验试验室仪器设备应包括ABI PRISM 7000型荧光定量PCR仪、微量加样器、高速台式冷冻离心机、生物平安柜。 4.2.1 建档的临床基因扩增检验试验室仪器设备的一般状况应包括：名称、制造商名称、型号、序号或其它唯一性标识、接受日期和启用日期、目前放置地点，接受时状态等。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 仪器设备管理的标准操作程序 版 本 号：1.0文件

32、编号：HS-JY-CZ-PCR-008生效日期：2023年03月01日页码： 第 2 页，共 4 页4.2.2 建档的临床基因扩增检验试验室仪器设备的相关文件包括：仪器设备的说明书，操作手册，保修卡等，有关文件（或复印件）的文件序号，名称，校准和/或检定的日期和结果以及下次校准和/或检定的日期、迄今所进行的维护和今后维护安排的细微环节、管理负责人等。 4.2.3 临床基因扩增检验试验室仪器设备的损坏、故障、修理须作如下记录：日期、仪器名称、故障现象、检查状况、处理看法、处理结果、修理人员签名等。 4.2.4 有问题的临床基因扩增检验试验室仪器设备加贴明显的黄色停用标识，标识上应有停用日期及缘由

33、；可搬动的仪器移至装备科报修，不行移动的设备应当盖上布，封存待修。 4.2.5 修好的临床基因扩增检验试验室仪器设备重新经校准、检定或检测合格方能再次投入运用。复旦高校附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 仪器设备管理的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ-PCR-008生效日期：2023年03月01日页码： 第 3 页，共 4 页4.2.6 临床基因扩增检验试验室仪器设备的报废处理：因运用寿命、损坏、故障导致仪器设备不能满意检测须要时，该设备可报废。由临床基因扩增检验试验室负责人填写报废申请，检验医学中心主任核实，装备科批准后由许小凤在设备

34、档案中签名注销。4.2.7 临床基因扩增检验试验室的仪器设备根据规定须要进行校准和检定的有：温度计、温度湿度计、微量加样器、ABI PRISM 7000型荧光定量PCR仪。校准报告至少留档保存2年。 参考文献1.申子瑜，李金明等.临床基因扩增检验试验室技术验收表.申子瑜，李金明主编.临床基因扩增检验技术.北京：人民卫生出版社，2023： 196-201.第4篇：PCR检验聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特别DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛

35、发、皮肤或血液，只要能分别出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其独创了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2023年，PCR已发展到第三代技术。1973年，台籍科学家钱嘉韵，发觉了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95高温时变性会变成单链，低温（常常是60C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5-3)的

36、方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延长温度之间很好地进行限制。 荧光定量PCR技术检测的报告形式 一，拷贝数的意义： 表示原始标本内可供探针结合的核酸片段数量二，拷贝数与病原体的关系：拷贝数与病原体的数量成正相关三，报告形式：1假如标本量是可以定量的，如血液等，则检测结果报告为：IU/ml(可溯源到国际标准物质的标准品) 如HBV-DNA：检测下限：100IU/毫升 即：Ct值得意义扩增越靠后定量的重复性就越差-扩增末期，扩增效率可能因为大量的靶序列而产生不行控的影响，偏离线性 -在Ct值处重复性特别好 -荧光定量技术要求在低浓度进行荧光定量

37、PCR在临床中的应用 一,感染性疾病 1，肝炎病毒定量检测2，结核杆菌及呼吸道病原体检测 3，优生优育（TORCH）相关项目检测 4，性病病原体检测5，手足口病相关病毒EV71，柯萨奇病毒的检测 二，肿瘤个体化诊断与治疗 三，遗传性疾病 四，疾病风险评估乙型肝炎病毒（Hepatitis B）HBV基因分型与CHB（临床遗传性疾病）的关系 全基因组测序HBV可分为A.B.C.D.E.F.G.H 8个基因型 HBV基因型-HBV基因型与病毒复制及病毒标记物表达的关系 -HBV基因型临床疾病谱及疾病预后的关系 -HBV基因型与抗病毒疗效之间有关系血清学指标（-）不能解除HBV感染 HBeAg(-)/

38、HBV-DNA(+) 编码e抗原的pre C区基因极易出现变异，在pre C区出现终止密码子，在pre C区基因与C区基因不能转译出完整的e抗原。导致HBeAg表达缺失，机体感染HBV不表达HBeAg，当然血清学方法也不能检测出HBeAg的存在。HBV基因型-HBV基因型临床疾病谱及疾病预后的关系 -HBV基因型是影响慢性乙型肝炎的临床转归的主要确定因素之一。-HBV感染的临床转归一方面确定于患者的年龄和免疫实力，另一方面与基因型种类亲密相关。在B,C为优势地区，C型具有较强的疾病实力，预后差；在以A,D为优势的地区，D型具有较强的致病性，肝病严峻，预后不良；基因型C在乙肝后肝硬化的发病中起肯

39、定的作用，然而基因型B与年轻无肝硬化患者肝癌的发生有关。HBV基因型与抗病毒疗效之间有关系-干扰素抗病毒疗效与HBV基因型有肯定的相关性，基因C和D对干扰素的治疗反应比基因型A和B要差（HBV基因型与病毒复制与清除。病毒变异.临床表现.治疗应答和预后均有关系，提示不同基因型具有不的致病性）HBV DNA与疾病的诊断 HBV DNA与乙肝”两对半“-”两对半”：机体的免疫反应状态，为间接指标 -HBV DNA是乙肝病毒的遗传物质，是病毒存在和复制的最牢靠，最干脆的指标。-“携带者”，“大三阳”，“小三阳”等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。“大三阳”与HBV-DNA：“ HBsAg（

40、+）HBeAg（+）HBcAb（+）”提示患者体内HBV-DNA呈活动性复制，传染性强，荧光定量PCR方法检测HBV-DNA阳性检出率大于80-90%，且病毒载量10的六次方IU/ml “小三阳”与HBV-DNA：“ HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）”，HBV-DNA阳性率为40-80%左右，且病毒载量HBeAb（+）表明HBV复制处于较低水平并可能和宿主DNA发生整合，导致含量较低，应进行HBV-DNA定量检测。常规结核病试验室诊断方法及不足 -细胞培育“金标准”,周期长-痰涂片作抗酸染色：灵敏度差，检出率30%。特异性差，无法将结核杆菌和其他分枝杆菌区分开 -血清学诊断：交

41、叉反应，假阳性FQ-PCR诊断结核的关键点-痰液，肺及支气管灌洗液-肺结核 -血液-播散性结核和各脏器的结核病 -脑脊液-中枢神经系统结核病-宫颈拭子，尿道拭子-泌尿生殖系统结核病 -胸水-结核性胸膜炎 -腹水-结核性腹膜炎HCV的基因型/亚型 6个型，68个亚型 -1a,b,c,d,e,f,g,h,i,j,k,l,m -2a,b,c,d,e,f,g,h,i,k,l,m -3a,b,c,d,e,f,g,h,i,k, -4a,c,d,e,f,g,h,k,l,m,n,o,p,q,r,s,t -5a -6a,b,d,f,g,h,i,j,k,l,m,n 中国亚型1b（66%），2a（14%），对抗病毒

42、治疗应答不同，因此治疗方案不同。 HCV的基因耐药突变特异基因靶向治疗（小分子抑制物）中靶点编码区的耐药 -HCV蛋白酶（NS3-4A） -RNV酶（NS5b） HCV的基因型与药物治疗 -现知欧美国家多数HCV-1型感染，而亚洲国家以2型为主，三型次之-三型感染临床症状较重，有引起严峻肝病的倾向 -1b型感染对干扰素治疗不敏感，效果差，2a型感染用干扰素治疗效果好。HCV RNA 定量的临床意义？TORCH感染特点-母婴传播的主要病原体-引起胎儿畸形新生儿缺陷的重要缘由 -自然状态下呈隐性感染-怀孕，多次输血，AIDS等易发生显性感染 -可致多发性，全身性感染-只有风疹可获得许久的免疫力，可

43、用疫苗预防 TORCH相关病原体检测 -弓形虫（TOX） -风疹病毒（RV） -人巨细胞病毒（HCMV） -单纯疱疹病毒（HSV-2）基因检测与预料医学基因检测使预料医学称为可能。疾病分险基因，易感基因的检测，不同人群差异基因的检测，可以全面评估个体对相关疾病的患病风险，从而预料疾病的发生，早期干预，预防。结核杆菌与呼吸道病原体检测 -结核杆菌（TB） -EB病毒（EBV） -肺炎衣原体（CP） -肺炎支原体（MP） 常见性传播病原体检测 -淋球菌（NGH） -沙眼衣原体（CT） -解脲支原体（UU） -梅毒螺旋体（TP） -单纯疱疹病毒（HSV） -乳头瘤病毒（HPV） -人类免疫缺陷病毒（

44、HIV）第5篇：PCR试验室高端PCR试验室限制设计说明 PCR试验室即分子生物学试验室，在医疗、科研、生物技术方面得到广泛的应用。因其在不同行业的应用各有区分，在详细设计时也有不同之处，就医疗机构的应用而言，主要运用三区或四区设计，即试剂打算区、样品提取区、扩增分析区；此类三区设计时候应用于类似荧光定量型或同类PCR分析设备，及扩增与分析过程在设备内一次完成。而四区设计在三区的基础上讲扩增分析区拆分为扩增区与分析区适用于其他类型的pcr设备及手工处理。 在PCR试验的设计上，经过多年的阅历累积，已经在一些关键技术上达成了共识。 因为PCR试验中所产生的DNA与RNA片段过于微小，以至于可以穿

45、透高效过滤器，所以在试验室设计上已经不在强制要求设计高效净化系统，但是为了提高试验环境水平及爱护试验室内的敖贵设备方面，假如在具备条件的状况下可考虑追加高效空气净化系统；建议净化级别万级。 在PCR试验中所产生的DNA与RNA片段污染是始终以来PCR试验的重点问题。此类污染主要至上次试验中所产生的基因片段对下次试验产生的污染，而且一旦试验环境中的污染形成后很难处理。因为消毒等传统方式对于基因污染没有很良好的效果。所以在PCR试验室设计中一般将整套试验室设计为全新风型试验室，这样而已通过有效的换气次数来达到净化室内污染的作用。 而在限制方面也有许多不同之处，因为各单位对PCR试验的重视程度各有不

46、同，所以在设计上也有不同，主要的限制设计有定送定排式压力限制系统、变送定排式压力限制系统变送变排式压力限制系统。在限制设备方面也有许多区分如压力无关型限制系统、压力有关型限制系统。依据业主要求，本PCR试验室为三区设计，各区可独立运用，不设置高效过滤系统等相关要求，依据业主以上要求，我方给出的设计方案为压力无关型变送变排压力限制系统。 本系统的特点是，设备启动后可依据试验室内运用节点调整送风量及排风量来限制各房间状态，系统说明见下图l 每个房间可分别限制，运用时通过房间开关输出启动信号，当设备接到启动信号时设备运行，运行中依据管道压力反馈确定变频器大小，房间内送排风量由压力无关型风量调整阀限制

47、。 l 当有多个房间开启或关闭时，设备更加管道压力反馈，调整设备变频器增加或削减送排风量来稳定管道压力。各房间内压力又房间内的压力无关型定风量阀进行限制。l 当BSC（生物平安柜，B2全排）开启时BSC专用供风机组运行，BSC-供风机-排风机连锁运转。l 当BSC做变风量调整时，依据房间内压力改变，BSC专用供风机组前安装的压力无关型变风量调整阀依据压力改变增减送风量，确保房间压力执行在可控范围内。l 当房间不适用时，房间与缓冲间均关闭电动密闭阀，确保房间处在密闭状态避开布朗运动造成的可能污染风险。l 房间换气次数均根据肯定净化标准设计，当室内污染发生时，通过肯定时间的换气处理后，污染问题可以基本解决。 l 本系统假如业主须要，可在室内送风口末端加装高效过滤设备，房间可升级为净化型试验室。l 压力无关型风阀简介：压力无关型风阀的特点是不会依据管道压力的改变而影响风阀内部的送风量，在肯定管道压力区间内能够自行调整阀体阻力，来稳定送风量，是高端试验室必备的关键部件，目前此类阀体技术均有国外生产厂家限制，目前国内主用运用的产品有妥思、文丘里、西门子等品牌。