河医大生药学实验指导21石蜡切片法.docx

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1、附录五石蜡切片法一、取材与固定：将新鲜材料切成适当大小，一般以不超过0.5lmm3为宜。材料切好后，立即投入固定液中，固定的目的是使植物组织很快被杀死，以保持其生科学研究时状态。定的时间须视材料而定，常用的固定液为固定液。干燥材料不需要固定，可用水或甘油浸软后，切成小块即行 脱水。二、冲洗：材料经固定后，必须充分除去固定液，可以流动 三、脱水：一般用乙醇脱水，每次调换乙醇浓度的时间视材 料而定材料坚硬者每隔3小时为宜。乙醇浓度通常为10%、冲洗或以清水换洗数次，使定液全部除净。20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% （二次）。四、透明：二甲苯为透明剂。一般将二

2、甲苯用无水乙醇配成 25%、50%、75%的浓度至纯二甲苯,23小时更换一次，至材料透明为止。五、浸蜡：材料脱水至二甲苯时，可加少量石蜡；以后再逐 渐增加熔融石蜡至全部为石蜡浸透止，此操作须在熔蜡炉或 恒温箱中进行，一般温度以较石蜡溶点高2 4。（：为宜，约3小时调蜡一次。六、包埋：将烧融石蜡倒在小纸盒（或气埋模子）内，立即将 已浸透石蜡的材料放在纸盒中央排列好位置，待石蜡渐泠凝 成块状，或石蜡表面冷凝时，即抽入水中，使其迅速冷却成 硬块。七、切片：将包埋的石蜡块切成四方形或略长方形，材料在 中央，其四周边距离相等而平整，将下端用蜡粘于金属 器或木块上使之牢固。夹木块于旋转切片机上，另将刀装妥

3、, 并夹紧，然后刀口与蜡块接近，再调节厚度（一般为105pm）,切片,将切下的蜡片，置于切片盘中。八、贴片：取蛋白粘贴剂少许，置于洁净的玻片上，均匀涂 沫后，加蒸储水一滴，将蜡片的光滑面置于玻片上，移至烘 片台上，待蜡片伸展平直后，倒去多余的水，烘干。九、溶蜡：将烘干的玻片置于二甲苯中，溶去石蜡，数分钟 后，移入二甲苯与无水乙醇的等量混合液中，再移入无水醇 中，各需数分钟。十、染色：材料复水至与染色液浓度相等时可染色，常用番 红亮绿染色，染色时间须视染色液和材料而定，染色过 程在染色缸中进行。十一、脱水与封藏：依次加乙醇、无水乙醇、二甲苯脱水至 切片透明清晰为止。然后加加拿大树胶12滴于切片上， 小心盖上盖玻片。在载玻片左方贴上标签，注明切片名称, 切面和日期即可。附1 : 固定液的配置50% 或 70% 乙醇 90ml冰醋酸5ml40%甲醛5ml附2 :蛋白粘剂的配制新鲜鸡蛋白25ml甘油25ml水杨酸钠0.5g