CCK8实验原理与步骤7.doc

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1、 CCK8实验原理与步骤CCK8实验1、在 96孔板中配置 100 l的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37，5% CO2）。2、向培养板加入 10 l不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或 48小时）。4、向每孔加入 10 l CCK8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD值的读数）。5、将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。6、用酶标仪测定在 450nm处的吸光度。7、若暂时不测定 OD值，可以向每孔中加入 10 l 0.1M的 HCL溶液或者 1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会

2、发生变化。PS：1% w/v SDS溶液配制方法：组份浓度：10% (W/V)SDS 配制量：100ml 配制方法：1.称量 10g高纯度的 SDS置于 100-200ml烧杯中，加入约 80ml的去离子水，68加入溶解2.滴加浓盐酸调节 pH值至 7.23.将溶液定容至 100ml后，室温保存。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。活力计算：细胞活力*（）=A(加药)-A（空白）/A（0加药）-

3、A（空白） 100 A（加药）：具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度A（空白）：具有培养基和 CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度A（0加药）：具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力CCK-8 可以用于细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8，它在电子载体(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒染料，生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比,因此可以用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。其使用方法在增殖和毒性试验中有所区别: 细胞增殖试验: 1.接种细胞悬液 100微升于 96

4、孔板,预先置于 37度,5%CO2饱和湿度的培养箱内培养 2.在每孔内加入 10微升的 CCK-8试剂. 3.把培养板放培养箱内 1-4小时(根据细胞类型其时间有所不同) 4 在 450nm波长处测定吸光值,参比波长为 600nm或以上波长. 毒性分析试验: 1.接种 100微升细胞悬液(5000个/孔)于 96孔板2.预先放置 37度 5%CO2饱和湿度培养箱培养 24小时3.加入 10微升不同浓度的毒性物质到孔内培养基4.在培养箱内培养 48小时. 5.在每孔内加入 10微升 CCK-8试剂,在培养箱内培养 1-4小时; 6在 450nm波长处测定吸光值,参比波长为 600nm或以上. 以

5、上步骤摘自CCK-8的说明书,由于涉及到某些原因,我省去了上面的一些推销用语) (内有标价,1245元/1000孔) 写在前面：一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我最能体会。看到园子里有一些同学在问有关 CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我 写的只是个人实验心得，仅供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。我没有做过 MTT实验，但其实原理及目

6、的都是一样的（反应机理不一样）。都说 CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。CCK8的说明书大家一定要认真阅读，里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值，因为那是反复验证过的最佳数值。但无论如何，做这个试验一定要摸条件。你就算再懒，这个懒不得，否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提，如果你做的是促进细胞生长的药物的药效实验那就另当别论了。摸条件包括 1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、CCK8试剂加入量；5、CCK8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白

7、板，也就是不加药物，只加细胞和 CCK8。1、种板数：这个要查文献，看你所用细胞别人有无做过，把范围大致找出。记住还要参考说明书，这个很重要。然后稀释一系列浓度种板。首先你要观察多长时间细胞可贴壁完全，一般贴壁生长 24小时。然后还有在你的实验时间内，不同细胞数下孔内生长情况。比如我拟定考察 4天的时间，那么在 4天内，细胞是刚好铺满还是堆积生长？因为每块板都会设置对照孔，也就是含有细胞的培养基+CCK8，这个数值是板上的最大数值，CCK8试验最佳 OD值在 1.0附近，所以这 个最大数值最好能控制在 1.0左右。我的实验经验是不要让细胞长满，一旦长满了很难去判断是否堆积生长了，对药物能否顺利

8、进入细胞有影响此为其一，其二生长不均匀易导致孔间 OD值数据偏差大，而且OD值也很大。2、贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长 24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了 3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择最好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的 10%。这里有一个问题：假设我要孔内是 200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=20

9、0微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，CCK8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人最终采用的是后者。5、cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把 OD值控制在 1.0左右。这里我考察了 0.5h、1.0h、2.0h。再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置 6个复孔，得到的 OD值去掉最大值与最小值，其余取平均值。我用的是排枪，会省很多力气， 但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液枪和选用最适枪头了。做这个实验我想大家遇到的最大问题应该是数据不稳定，组内数据偏差大。讲了很多怎样摸条件，其

10、实就一个原则，把 OD值控制在 1.0左右。数据不稳定也只能通过增大样品数，借助数据处理来弥补。还有实验操作一定要仔细小心，尽量平行操作。能力有限，表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论，我们的目标是共同进步，哈哈。补充：谢谢大家的热烈讨论。突然想起用酶标仪检测的时候还有一些细节问题，园子里也有前辈提过。比如孔里不能有气泡，如果有气泡，就用吸耳球吹掉，气泡会很影响检测结果。样品板要擦拭干净，当然了，盖子一定要记得拿掉啊补充说明：这几天有同学提出了一个问题，这个问题非常好也非常关键：将 OD值控制在 1.0这个说法是否有依据？这里我还是想提醒大家一定要认真阅读试剂盒的说明书，试想一

11、个试剂盒的上市并且作为技术手段得到认可需要经过多少试验反复验证。我购买的是同仁化学研究所的 CCK8试剂盒，说明书的 P7Q23：OD值在什么范围比较合适？答：一般情况下 OD值在 0.1-2.0都可以，在 1.0附近比较好。再说到自己的实验设计，酶标仪的原理其实和紫外分光光度计是一样的，所以 UV上很多减小误差的注意事项在酶标仪上同样受用。这就能够理解为什么不能有气泡，为什么要擦拭干净样品板了。再者熟悉 UV原理的同学会了解利用紫外检测有一个最佳检测范围，超过了这个范围，数值就会呈现出不稳定，无规律。（大家可以把自己的数据统计分析看看是不是数值控制在 1.0附近更稳定。）而更有甚者就是超出了

12、仪器的检测范围，仪器读数为。我在摸条件的时候，cck8加入 2.0h后检测就出现过酶标仪读不出数据的情况。 199条建筑设计知识1. 公共建筑通常以交通、使用、辅助三种空间组成2. 美国著名建筑师沙利文提出的名言形式由功能而来3. 密斯.凡.德.罗设计的巴塞罗那博览会德国馆采用的是自由灵活的空间组合开创了流动空间的新概念4. 美国纽约赖特设计的古根海姆美术馆的展厅空间布置采用形式是串联式5. 电影放映院不需采光6. 点式住宅可设天井或平面凹凸布置可增加外墙面，有利于每层户数较多时的采光和通风7. 对结构形式有规定性的有大小和容量、物理环境、形状的规定性8. 功能与流线分析是现代建筑设计最常用的

13、手段9. 垂直方向高的建筑需要考虑透视变形的矫正10. 橙色是暖色，而紫色含有蓝色的成分，所以偏冷；青色比黄色冷、红色比黄色暖、蓝色比绿色冷11. 同样大小冷色调较暖色调给人的感觉要大12. 同样距离，暖色较冷色给人以靠近感13. 为保持室内空间稳定感，房间的低处宜采用低明度色彩14. 冷色调给人以幽雅宁静的气氛15. 色相、明度、彩度是色彩的三要素；三元色为红、黄、蓝16. 尺度的概念是建筑物整体或局部给人的视角印象大小和其实际大小的关系17. 美的比例，必然正确的体现材料的力学特征18. 不同文化形成独特的比例形式19. 西方古典建筑高度与开间的比例，愈高大愈狭长，愈低矮愈宽阔20. 稳定

14、所涉及的要素是上与下之间的相对轻重关系的处理 21.人眼观赏规律H1845182718局部、细部整体2H3H整体及环境22.黄金分隔比例为1：1.61823.通风屋面只能隔离太阳辐射不能保温，适宜于南方24.总图布置要因地制宜，建筑物与周围环境之间关系紧凑，节约因地；适当处理个体与群体，空间与体形，绿化和小品的关系；合理解决采光、通风、朝向、交通与人流的组织25.热水系统舒适稳定适用于居住建筑和托幼蒸汽系统加热快，适用于间歇采暖建筑如会堂、剧场26.渐变具有韵律感27.要使一座建筑显得富有活力，形式生动，在构图中应采用对比的手法对比的手法有轴线对比、体量对比、方向对比、虚实对比、色彩对比28.

15、要使柱子看起来显得细一些，可以采用暗色和冷色29.巴西国会大厅在体型组合中采用了对比与协调的手法30.展览建筑应使用穿套式的空间组合形式31.室外空间的构成，主要依赖于建筑和建筑群体组合32.在意大利威尼斯的圣马可广场的布局中，采用了强调了各种空间之间的对比33.当坡地坡度较缓时，应采用平行等高线布置34.建筑的有效面积=建筑面积-结构面积35.加大开窗面积的方法来解决采光和通风问题较易办到36.中国古代木结构大致可分为抬梁式、穿斗式和井干式三种 37.建筑构图原理的基本范畴有主从与重点、对比与呼应、均衡与稳定、节奏与韵律和比例与尺度38.建筑构图的基本规律是多样统一39.超过8层的建筑中，电

16、梯就成为主要的交通工具了40.建筑的模数分为基本模数、扩大模数和分模数41.建筑楼梯梯段的最大坡度不宜超过3842.住宅起居室、卧室、厨房应直接采光，窗地比为1/7，其他为1/1243.住宅套内楼梯梯段的最小净宽两边墙的0.9M，一边临空的0.75M住宅室内楼梯踏步宽不应小于0.22M，踏步高度不应小大0.20M44.住宅底层严禁布置火灾危险性甲乙类物质的商店，不应布置产生噪声的娱乐场所45.地下室、贮藏室等房间的最低净高不应低于2.0米46.室内坡道水平投影长度超过15米时，宜设休息平台47.外墙内保温所占面积不计入使用面积烟道、风道、管道井不计入使用面积阳台面积不计入使用面积壁柜应计入使用

17、面积48.旋转楼梯两级的平面角度不大于10度，且每级离内侧扶手中心0.25处的踏步宽度要大于0.22米49.两个安全出口之间的净距不应小于5米50.楼梯正面门扇开足时宜保持0.6米平台净宽，侧墙门口距踏步不宜小于0.4米，其门扇开足时不应减少梯段的净宽35.加大开窗面积的方法来解决采光和通风问题较易办到36.中国古代木结构大致可分为抬梁式、穿斗式和井干式三种37.建筑构图原理的基本范畴有主从与重点、对比与呼应、均衡与稳定、节奏与韵律和比例与尺度 38.建筑构图的基本规律是多样统一39.超过8层的建筑中，电梯就成为主要的交通工具了40.建筑的模数分为基本模数、扩大模数和分模数41.建筑楼梯梯段的

18、最大坡度不宜超过3842.住宅起居室、卧室、厨房应直接采光，窗地比为1/7，其他为1/1243.住宅套内楼梯梯段的最小净宽两边墙的0.9M，一边临空的0.75M住宅室内楼梯踏步宽不应小于0.22M，踏步高度不应小大0.20M44.住宅底层严禁布置火灾危险性甲乙类物质的商店，不应布置产生噪声的娱乐场所45.地下室、贮藏室等房间的最低净高不应低于2.0米46.室内坡道水平投影长度超过15米时，宜设休息平台47.外墙内保温所占面积不计入使用面积烟道、风道、管道井不计入使用面积阳台面积不计入使用面积壁柜应计入使用面积48.旋转楼梯两级的平面角度不大于10度，且每级离内侧扶手中心0.25处的踏步宽度要大

19、于0.22米49.两个安全出口之间的净距不应小于5米50.楼梯正面门扇开足时宜保持0.6米平台净宽，侧墙门口距踏步不宜小于0.4米，其门扇开足时不应减少梯段的净宽35.加大开窗面积的方法来解决采光和通风问题较易办到36.中国古代木结构大致可分为抬梁式、穿斗式和井干式三种37.建筑构图原理的基本范畴有主从与重点、对比与呼应、均衡与稳定、节奏与韵律和比例与尺度38.建筑构图的基本规律是多样统一 39.超过8层的建筑中，电梯就成为主要的交通工具了40.建筑的模数分为基本模数、扩大模数和分模数41.建筑楼梯梯段的最大坡度不宜超过3842.住宅起居室、卧室、厨房应直接采光，窗地比为1/7，其他为1/12

20、43.住宅套内楼梯梯段的最小净宽两边墙的0.9M，一边临空的0.75M住宅室内楼梯踏步宽不应小于0.22M，踏步高度不应小大0.20M44.住宅底层严禁布置火灾危险性甲乙类物质的商店，不应布置产生噪声的娱乐场所45.地下室、贮藏室等房间的最低净高不应低于2.0米46.室内坡道水平投影长度超过15米时，宜设休息平台47.外墙内保温所占面积不计入使用面积烟道、风道、管道井不计入使用面积阳台面积不计入使用面积壁柜应计入使用面积48.旋转楼梯两级的平面角度不大于10度，且每级离内侧扶手中心0.25处的踏步宽度要大于0.22米49.两个安全出口之间的净距不应小于5米50.楼梯正面门扇开足时宜保持0.6米

21、平台净宽，侧墙门口距踏步不宜小于0.4米，其门扇开足时不应减少梯段的净宽51.入地下车库的坡道端部宜设挡水反坡和横向通长雨水篦子52.室内台阶宜150*300；室外台阶宽宜350左右，高宽比不宜大于1：2.553.住宅公用楼梯踏步宽不应小于0.26M，踏步高度不应大于0.175M54.梯段宽度不应小于1.1M（6层及以下一边设栏杆的可为1.0M），净空高度2.2M55.休息平台宽度应大于梯段宽度，且不应小于1.2M，净空高度2.0M 56.梯扶手高度0.9M，水平段栏杆长度大于0.5M时应为1.05M57.楼梯垂直杆件净空不应大于0.11M，梯井净空宽大于0.11M时应采取防护措施58.门洞共

22、用外门宽1.2M，户门卧室起居室0.9M，厨房0.8M，卫生间及阳台门0.7M，所有门洞高为2.0M59.住宅层高不宜高于2.8M60.卧室起居室净高2.4M，其局部净高2.1M（且其不应大于使用面积的1/3）61.利用坡顶作起居室卧室的，一半面积净高不应低于2.1M利用坡顶空间时，净高低于1.2M处不计使用面积；1.2-2.1M计一半使用面积；高于2.1M全计使用面积62.放家具墙面长3M，无直接采光的厅面积不应大于10M263.厨房面积、4M2；、5M264.厨房净宽单面设备不应小于1.5M；双面布置设备间净距不应小于0.9M65.对于大套住宅，其使用面积必须满足45平方米66.住宅套型共

23、分四类使用面积分别为34、45、56、68M267.单人卧室6M2；双人卧室10M2；兼起居室卧室12M2；68.卫生间面积三件3M2；二件2-2.5M2；一件1.1M269.厨房、卫生间净高2.2M70.住宅楼梯窗台距楼地面净高度低于0.9米时，不论窗开启与否，均应有防护措施71.阳台栏杆净高1.05M；中高层为1.1M(但要1.2)；杆件净距0.1172.无外窗的卫生间应设置防回流构造的排气通风道、预留排气机械的位置、门下设进风百叶窗或与地面间留出一定缝隙 73.每套应设阳台或平台、应设置晾衣设施、顶层应设雨罩；阳台、雨罩均应作有组织排水；阳台宜做防水；雨罩应做防水74.寒冷、夏热冬冷和夏

24、热冬暖地区的住宅，西面应采取遮阳措施75.严寒地区的住宅出入口，各种朝向均应设防寒门斗或保温门76.住宅建筑中不宜设置的附属公共用房有锅炉房、变压器室、易燃易爆化学物品商店但有厨房的饮食店可设77.住宅设计应考虑防触电、防盗、防坠落78.跃层指套内空间跨跃两楼层及以上的住宅79.在坡地上建住宅，当建筑物与等高线垂直时，采用跌落方式较为经济80.住宅建筑工程评估指标体系表中有一级和二级指标81. 7层及以上（16米）住宅必须设电梯82.宿舍最高居住层的楼地面距入口层地面的高度大于20米时，应设电梯83.医院病房楼，设有空调的多层旅馆，超过5层的公建室内疏散楼梯，均应设置封闭楼梯间（包括首层扩大封

25、闭楼梯间）设歌舞厅放映厅且超过3层的地上建筑，应设封闭楼梯间。公共建筑门厅的主楼梯如不计入总疏散宽度，可不设封闭楼梯间84.图书馆内书库、非书资料库的疏散楼梯，应设计为封闭楼梯间或防烟楼梯间档案馆库区设置楼梯时，应采用封闭楼梯间，门采用不低于乙级防火门85.电梯不应与卧室、起居室紧邻布置86. 12层及以上每栋楼设电梯不应少于两台87.建筑楼梯一般不应超过18级，且不应少于3级88.楼梯净宽按每股人流0.55M+（0-0.15M）计算，并不应少于2股人流89.管道井在安全、防火和卫生方面互有影响的管道不应敷设在同一竖井内 90.排烟和通风不得使用同一管道系统91.图书馆照明一般室0.75M水平

26、面150-200-300LX老年室0.75M水平面200-300-500LX陈列室0.75M水平面75-100-150LX读者休息室0.75M水平面30-50-75LX92.托幼园照度标准活动室150LX、保健隔离室100、寝室75、卫生间30、门厅2093.中小学照度均匀度不应低于0.7黑板灯其垂直照度不应低于200LX94.二级踏步不允许出现在楼梯梯段95.电梯和自动扶梯均不可以计作安全出口96.建筑物底层地面至少应高出室外地面0.15M97.电梯不宜被楼梯环绕单侧排列电梯不应超过4台双侧排列电梯不应超过8台98.候梯厅深度单侧台住宅电梯其他电梯B1.5B多台双侧排列时相对电梯B之和；并4

27、.5M（客梯）99.一般平屋面的最小坡度为1：50瓦屋面无望板坡度1：2、有望板1：2.5石棉瓦坡度为1：3波型金属瓦坡度为1：4压型钢板为1：7 100. 10米以上建筑无上人屋面楼梯时应设上屋面人孔或外墙爬梯101.开向公共走道的窗扇，其地面高度不应低于2米，外窗窗台低于0.8米时应采用防护措施102.双面弹簧门应在可视高度部分装透明玻璃103.旋转门、电动门和大型门的临近应另设普通门104.建筑物内的吊顶应设检修口及通风口、水管道通过应有防产生冷凝水措施、管线多时应留有检修空间105.天窗应采用防破碎的透光材料或安全网，并应有防产生冷凝水或引泄冷凝水的措施106.窗的开启形式应能方便使用

28、、开启应安全并易于清洗、平开窗适用于多层或高层107.砖墙-0.06米处设连续水平防潮层，室内相邻地面有高差时应在墙身侧面加设防潮层108.设计最高地下水位低于地下室底板0.3-0.5米，且基地内土壤回填土无形成滞水可能时，可采用防潮做法109.全国气候分区：严寒地区（区）累年最冷月平均-10寒冷地区（区）累年最冷月平均-10，0温暖地区（区）累年最冷月平均0累年最热月平均28炎热地区（区）累年最热月平均28110.厕所隔间平面最小尺寸；外开门0.9*1.2；内开门0.9*1.4淋浴隔间平面最小尺寸；外开门1.0*1.2；带更衣1.0*（1.0+0.6）111.有空调的建筑外表面积要小；窗户面

29、积要小；连续开机的建筑，其围护结构内侧宜选用重质材料；外墙颜色要浅 112.设备层应有自然通风或机械通风，当设备层设于地下室又无机械通风道时，应在地下室外墙上设不小于地下室地板面积的1/400的出口或通风口113.内走道长度20米时至少应有一端采光，20米时应有两端采光，40米时应增加中间采光口，否则应采用人工照明114.离地面高度在0.5米以下的采光口不应计入有效采光面积115.影剧院建筑空间组合的核心问题是观众厅、舞台、休息厅、门厅之间的关系116.影剧院的观众席应按每400个座位设一个轮椅席（0.8*1.1）117.视力残疾人的导盲杖的摆动波长为0.9-1.5米118.肢体残疾人用双拐水

30、平行进时的宽度约为0.95米119.板式高层建筑与塔式高层相比，具有体形系数小，冬季耗热量少并且夏季通风散热好，节能好120.大型医院建筑常以群体的形式出现原因是：根据不同功能特点分散布置，有利于组织不同的流线、争取较好的通风和朝向、防止交叉感染121.影响建筑日照的因素有地理纬度、日照间距、冬季太阳的高度角和方位角122.太阳能采暖建筑一般分为主动式和被动式123.非机动车道纵坡2.5%，坡长可不限困难情况下最大纵坡3.5%但有长度限制2.5%时的坡长限250米3.0%时的坡长限150米3.5%时的坡长限100米车道宽度2.5米124.残疾人使用的道路及建筑物规范道路纵坡2.5%；道路宽度2

31、.5M125.不设人行道栏杆的商业街缘石坡道间距100M单面坡缘石道坡度不应大于1：20坡道；扇形宽1.5M；在转角处单面直线宽2.0M 三面坡不应大于1：12坡道；宽1.2M；坡道中缘石外露高20；凸条停步块材路宽0.6M人行道中的地下管线井盖必须与地面接平，不得用蓖式井盖；侵入人行道上空的物件距地面高度不得小于2.2米人行横道与缘石坡道处不得设雨水口126.人行天桥和人行地道梯道宽度不应小于3.5米，踏步0.3*0.15；超过18级；休息平台宽1.5米且不小于梯段宽梯道、坡道、走道净高均不得低于2.2米；扶手高应为0.9米，设下层的为0.7米坡道坡度1：12，特殊困难处1：10，每升高1.

32、8米或转弯处设长度2米的平台127.无障碍入口的地面坡度不应大于1：50128.建筑人口轮椅通行平台最小宽度大中型公建、中高层建筑、公寓建筑2.0其他1.5129.方便残疾人通行的入口坡道宽度0.9M；坡度1：12；每段坡长9M；每段升起的最大高度0.75M中间休息平台深1.2米；转弯出平台深1.5米；起止点留有1.5米轮椅缓冲带130.残疾道扶手高度0.85M，0.65M、扶手应保持连贯、起点、终点应水平延伸0.3M扶手与墙之间的距离为38；131.供一辆轮椅通过的走道净宽1.2M；供一人一辆轮椅通过的走道净宽1.5M；供二辆轮椅通过的走道净宽1.8M132.出入口设两道门时，门扇开启后应留

33、有不少于1.2米的轮椅通行净距（大型公共建筑中高层建筑1.5米）133.轮椅通行的门洞门扇开启的最小净宽0.8M 自动门最小净宽1.0米134.轮椅通行最小宽度大型公建走道1.8米中小型公建走道、建筑基地人行通道1.5米居住建筑走廊1.2米检票口、结算口轮椅通道0.9米135.门扇走道开启的凹室不应小于1.3（0.8+0.5）*0.9136.无障碍主要对象是视力残疾、住拐杖、坐轮椅者137.残疾人使用的电梯：候梯厅面积不应小于1.5*1.5电梯门开启后净宽不应小于0.8M、电梯轿厢面积不小于1.4*1.1138.残疾厕所设有足够的轮椅面积、单设隔间、设安全抓手、设置坐式大便器墙挂式小便器最大离

34、地高度为430；小便器前应有760*1220的活动空间洗脸盆应是独立墙挂式，占地为760*1220139.残疾人使用的出入口：宜靠近电梯厅；室内外有高差时应采用坡道连接；内外应留有1.5*1.5平坦的轮椅回转面积；出入口设有两道门时，门扇开启后应留有不小于1.2M的轮椅通行净距140.县级及以上的政府机关与司法部门，必须设置无障碍专用厕所141.高层、中高层住宅及公寓建筑，每50套住房宜设两套符合乘轮椅者居住的无障碍住房套型142.残疾人通行的门不得采用旋转门143.卫生间室内外地面不应有高差厕所内应留有1.5*1.5的轮椅回旋面积隔间门1.2*0.8144.坡道地面应平整、宜采用不滑及不易松

35、动的表面材料 145.残疾人机动车停车位应布置在进出方便地段并靠近人行通路，其车位一侧应留有不小于1.2米宽的轮椅通道，并应有明显标志146.食堂、报告厅、影剧院及体育场等建筑的轮椅席位（0.8*1.1）应布置在便于疏散的出入口附近147.残疾人国际通用标志牌的应用有；指示建筑物出入口及安全出口；指示建筑物内、外通道；指示专业空间位置148.防火等级分为四级149.一、二级除二级吊顶用难燃材料其他全部采用非燃材料150.钢材的耐火极限为0.25小时151.预应力钢筋混凝土为普通混凝土的1/2耐火等级152.室内排水管下表面距楼地面不应低于1.9M，且不得影响门窗开启153.套内入口过道净宽不宜

36、小于1.2M；通卧室的过道1M；通辅助房的过道0.9M-154.套内吊柜净高不应小于0.4M；壁柜净深不宜小于0.5M155.楼梯人口处地坪与室外地坪高度差不应小于0.1M156.综合楼的定义是：由二种及二种以上用途的楼层组成的公共建筑157.高级住宅是建筑装修标准高和设有空气调节系统的住宅158.高层建筑的地下室的耐火等级是一级159.甲级防火门的耐火极限是1.2小时乙级防火门的耐火极限是0.9小时丙级防火门的耐火极限是0.6小时160.高层建筑使用丙类液体燃料，储油罐直埋于建筑或裙房附近，在面向油罐的一面4米内建筑外墙为防火墙时，油罐总储量不超过15M3时，油罐和建筑物的防火间距不限161

37、.两座高层相邻，较高一面外墙比较低屋面高15M及以下范围内墙为不开门窗的防火墙时，其防火间距可不限 162.高层主体之间或与高层附属房之间防火间距13M高层附属房与高层附属房防火间距为6M高层主体与其他建筑一、二级耐火防火间距为13M高层主体与其他建筑三级耐火防火间距为15M高层主体与其他建筑四级耐火防火间距为18M高层附属房与其他建筑一二、三、四级耐火防火间距为6M、7M、9M163.高层内院或天井，当短边超过24M时，宜设有进入内院或天井的消防车道高层民用建筑周围，应设环形消防车道供消防取水的天然水源和消防水池，应设消防车道164.穿过高层的消防车道，净宽和净高不应小于4M165.一类高层

38、每个防火分区的建筑面积是1000M2二类高层每个防火分区的建筑面积是1500M2地下室每个防火分区的建筑面积是500M2166.多层一、二级耐火等级的建筑防火分区2500M2（150M）多层三级耐火等级的建筑防火分区1200M2（100M）多层四级耐火等级的建筑防火分区600M2（60M）地下室、半地下室每个防火分区的建筑面积是500M2167.一栋高层与裙房之间设有防火墙分隔，当设自动喷水灭火系统时，裙房的防火分区允许最大建筑面积是5000M2168.规范没有对通风及空调机房的门提出防火门要求169.民用建筑及厂房的疏散用门应向疏散方向开启。人数不超过60人的房间且每樘门的平均疏散人数不超过

39、30人时，开启方向不限。170.高层塔式住宅只设一座防烟楼梯和消防电梯时，每层面积不超过650M2 171.高层住宅户门不应直接开向电梯间前室，确有困难，可部分户门开向前室，采用乙级防火门172.标准层超过1000M2的超高层公共建筑，屋顶宜设直升飞机停机坪173.一级建筑使用年限为100年以上；二级建筑使用年限为50-100年；三级建筑使用年限为25-50年；四级建筑使用年限为15年以下；174.架空电力线距甲乙类厂房水平距离不应小于电杆高度的1.5倍；丙级1.2倍175.1KV以下的电力线于建筑物垂直距离2.5，地面6，树木1，行车道路6米；水平距离1米176.高于24M为高层（不含24M

40、单层）；高于100M为超高层177.厕所浴室地面略低于走道20-50，0.5%的坡度坡向地漏178.洗脸盆、盥洗槽水嘴中距0.7M；距墙0.55M179.小便器中距0.65M180.烟道伸出屋面0.6M181.采光口上部有1.0M的阳台时，其采光面积按70%计182.水平天窗有效采光面积可按采光面积的2.5倍计算183.自然通风开口面积与地板面积之比，居室浴室厕所1/20；厨房1/10，并不得小于0.8M2184.噪声标准卧室50昼-40夜；一般室为55-45分贝；有音质要求的为40分贝185.学校主要房间净高：小学教室3.1米；中学教室和实验室3.4米；合班教室3.6米；辅助用房3.1米；办

41、公室2.8米 186.绿化用地：中师2M2/生；中学1；小学0.5187.运动场小学每生2.3M2；中学每生3.3M2188.南向普通教室日照宜为2小时189.小学规模以12-24班为宜；农村可设6班；教学楼不应超过四层；中学规模以18-24班为宜；大城市密集人口可30班；教学楼不应超过五层190.课桌排距：小学850（合班800），中学900（合班850），纵向走道宽度550（合班900），课桌于墙净距120（合班550）191.第一排课桌距黑板2000（合班2500），最后一排课桌后沿到黑板距离小学不宜大于8000；中学8500（合班18000）192.黑板尺寸：高度不应小于1000；宽度

42、小学不宜小于3600；中学不宜小于4000黑板下沿与讲台垂直距离：小学宜为800-900；中学宜为1000-1100讲台两边至黑板边缘的水平距离不应小于200，宽度不应小于650，高度宜为200-193.教室灯具距桌面的最低悬挂高度不应低于1.7米，灯管排列应采用长轴垂直于黑板的方向布置194.黑板灯的垂直照度不应低于200LX195.教室的窗台高度不宜低于800，并不宜高于1000196.教室窗间墙宽度不应大于1200197.教学楼走道宽度，内廊2100；外廊1800；办公1500；外廊栏杆不应低于1100198.教室安全出口的门洞宽度不应小于1000，合班教室1500199.学校所有房间采光均采用玻地比，除厕所淋浴为1/10；其他全为1/6