SN_T 5493-2023 固体和液体样品中29种芬太尼的测定 液相色谱-四级杆飞行时间质谱法.docx

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1、SN/T54932023固体和液体样品中29种芬太尼的测定液相色谱-四级杆/飞行时间质谱法1范围本文件规定了片剂药品、白色粉末化工品、液体饮料样品中29种芬太尼(附录A)的液相色谱-四级杆/飞行时间质谱测定方法。本文件适用于片剂药品、白色粉末化工品、液体饮料样品中29种芬太尼的定性和定量测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4方法提要试样采用

2、乙腈或乙腈-水溶液提取,液相色谱分离,四级杆/飞行时间质谱定性和定量测定,外标法定量。5试剂和材料水为GB/T6682规定的一级水。1235.乙腈:色谱纯。5.甲醇:色谱纯。5.甲酸:色谱纯。45.氢氧化钠:分析纯。(55.10%甲酸水溶液:移取1mL甲酸5.3)至10mL容量瓶中,用水定容至刻度。4(65.1mol/L氢氧化钠溶液:称取0.0g氢氧化钠5.4),用水溶解,并转移至10mL容量瓶中,用水定容至刻度。7/(8(5.甲酸钠溶液:分别移取10%甲酸水溶液5.5)和1molL氢氧化钠溶液5.6)各1mL,混匀。5.甲酸钠校正溶液:移取1mL甲酸钠溶液5.7)和9mL乙腈混合均匀。9(8

3、(115.乙腈-水溶液1+9,体积比):量取10mL乙腈5.1),加入到90mL水中,混匀。5.00.8%甲酸水溶液:取0.mL甲酸5.3)加入到1000mL水溶液中,混匀。5.129种芬太尼标准品:应符合附录A,纯度95%。1SN/T54932023511(5.229种芬太尼标准储备溶液:分别准确称取29种芬太尼固体标准品(.1)mg(精确至0.1mg),用甲醇5.2)溶解并定容至10mL,配成浓度为100g/mL的标准储备溶液。04条件下贮存,有效期12个月。(1(25.329种芬太尼混合标准中间溶液:吸取标准储备溶液5.12)0L至10mL容量瓶中,用乙腈5.1)定容至刻度,配成浓度为0

4、.0g/mL的混合标准中间溶液。04条件下贮存,有效期6个月。(15.429种芬太尼混合标准工作溶液:吸取混合标准中间溶液5.13)用乙腈-水溶液5.9)稀释成适当浓度的混合标准工作溶液。04条件下贮存,有效期3个月。:1515.5微孔滤膜0.22m,有机相(尼龙)。5.6塑料离心管:0mL。6仪器和设备1E2346.液相色谱-四级杆/飞行时间质谱仪:配有电喷雾离子源(SI)。6.分析天平:感量0.1mg、感量0.1g。6.离心机:转速不低于5000r/min。6.涡旋混合器。7试样制备和保存0片剂药品试样:取有代表性的片剂药品试样5粒10粒,用研钵捣碎、混匀。04保存。白色粉末化工品和液体饮

5、料试样:4保存。使用前应充分混合试样,使样品处于均匀状态。8分析步骤18.提取2(片剂药品类、白色粉末化工品、蛋白饮料:称取试样0.g(精确到0.1g)于50mL塑料离心管5.16)中,加入10mL乙腈5.1),在涡旋混合器上涡旋2min,以4000r/min离心5min,取上清液(2mL过滤膜5.15),待测。251(液体饮料(除蛋白饮料外):称取试样0.g(精确到0.1g)于50mL塑料离心管(.6)中,加入10mL乙腈-水溶液5.9),在涡旋混合器上涡旋2min,以4000r/min离心5min,取上清液2mL过滤膜(5.15),待测。28.仪器参考条件218.液相色谱参考条件:116B

6、:44a)色谱柱:核壳颗粒C18色谱柱,00mm2.mm(内径),粒径2.m,或相当者;b)流动相:A为0.8%甲酸水溶液,为乙腈,梯度洗脱程序见表1;c)流速0.mL/min;d)柱温:0;1e)进样体积:0L。2时间/min流动相A/%流动相B/%095552080820808.195510.5955H)的精确理论质量数,构建为29种芬太尼的一级谱库,见附录A。SN/T54932023表1梯度洗脱程序228.质谱参考条件:a)离子化模式:电喷雾电离模式(ESI);b)扫描模式:正离子模式(+);(c)质谱校正方式:甲酸钠校正溶液5.8)外标法校正;d)校正周期:甲酸钠校正溶液和其他测试溶液

7、参插进样;e)采集模式:四级杆/飞行时间质谱一级全扫描(TOFMS)和子离子二级全扫描(TOFMS/MS,高灵敏度模式);21I555i6iC4if)扫描时间:一级全扫描0.5s,子离子二级全扫描0.s;g)扫描质量范围:一级和二级均为50Da650Da;h)电喷雾电压(S):500V;i)离子源温度(TEM):50;j)雾化气压力(GS1):0ps;k)辅助气压力(GS2):0ps;l)气帘气压力(UR):0ps;8m)去簇电压(DP):0V;3n)碰撞电压(CE):05V。38.标准工作曲线(将混合标准中间溶液5.13)用乙腈-水溶液5.9)稀释成质量浓度为0.01g/mL、0.002g/

8、mL、0.05g/mL、0.010g/mL、0.020g/mL的系列混合标准工作溶液5.14)。按参考色谱和质谱条件测定。分别以目标化合物质量浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数。48.定性418.建立一级和二级谱库输入29种芬太尼的分子式和中英文名称,由飞行时间质谱软件计算得到每个化合物母离子(M+(29种芬太尼混合标准工作溶液5.14)进行子离子二级全扫描,采集每个化合物的二级碎片离子质谱图,分别导入到质谱库,构建为29种芬太尼的二级谱库,完成29种芬太尼一级和二级谱库的构建。4229种芬太尼标准品子离子二级全扫描质谱图见附录B。8.鉴别在一级全扫描(TO

9、FMS)模式下,样品溶液中待测物保留时间与对应浓度的标准工作溶液保留时310,则可初步判断试样中含有该种芬太尼。间偏差在2.5%之内;待测物母离子(M+H)精确质量数实测值与理论值相对偏差小于或等于5Xi=(i-Ai0)cVAism(1)SN/T54932023+-6438.确认C在子离子二级全扫描(TOFMS/MS)模式下,对于初步鉴别出的阳性芬太尼,观察其采集到的二级碎片离子质谱图,在相同碰撞电压(E)下,主要二级碎片离子全部出现,且与其二级谱库匹配(若仪器软件采用匹配度进行计算,推荐匹配度70%为匹配;若采用分值进行计算,推荐分值70分为匹配),可判定为试样中存在该种芬太尼。58.定量将

10、标准工作溶液和待测溶液分别注入液相色谱-四级杆/飞行时间质谱仪中,样品中目标化合物质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内,超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应用相对应的提取液稀释后进样,采用母离子(M+H)的峰面积进行计算,外标法定量。同时做空白试验。29种芬太尼一级全扫描模式下色谱图见附录C。68.空白试验除不加试样外,采用完全相同的步骤进行平行操作。9结果计算1按公式()计算试样中目标化合物含量:A式中:Xi试样中目标化合物的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);Ai试样溶液中目标化合物的峰面积;Ai0空白溶液中目标化合物的峰面积;Ais标准工作溶液中目标化合物的峰面积;c标准工作溶液中目

11、标化合物的质量浓度,单位为微克每毫升(g/mL);gm试样质量,单位为克();V样液最终定容体积,单位为毫升(mL)。计算结果应扣除空白值。10检出限和定量限本方法片剂药品和白色粉末化工品中29种芬太尼的检出限均为0.25mg/kg;液体饮料的检出限均为0.1mg/kg。本方法29种芬太尼的定量限均为0.5mg/kg。11精密度在重复性条件下,获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。在再现性条件下,获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。4序号中文名英文名CAS号分子式+母离子(M+H)精确质量数1去甲芬太尼Norfentanyl1609-66-1C14

12、H20N2O233.16482去甲卡芬太尼Norcarfentanil72996-78-2C16H22N2O3291.17033N-甲基去甲卡芬太尼N-methylnorcarfentanil59708-50-8C17H24N2O3305.1864丁酰去甲芬太尼Butyrylnorfentanyl1432-03-7C15H22N2O247.18055去甲舒芬太尼Norsufentanil61086-18-8C16H24N2O2277.19116瑞芬太尼Remifentanil132875-61-7C20H28N2O5377.20717-羟基硫代芬太尼-hydroxythiofentanyl14

13、74-34-6C20H26N2O2S359.178884-甲氧基乙酰芬太尼4-methoxyacetylfentanyl23651-12-9C22H28N2O2353.22249噻吩基芬太尼Thienylfentanyl122861-39-6C19H24N2OS329.168210奥芬太尼Ocfentanil101343-69-5C22H27FN2O2371.212911-羟基芬太尼-hydroxyfentanyl78995-10-5C22H28N2O2353.2224124-甲氧基甲氧乙酰芬太尼4-methoxymethoxyacetylfentanyl2525279-63-2C23H30N

14、2O3383.232913甲氧基乙酰芬太尼Methoxyacetylfentanyl101345-67-9C22H28N2O2353.222414硫代芬太尼Thiofentanyl1165-22-6C20H26N2OS343.1839154-苯胺基-N-苯乙基哌啶4-anilino-N-phenethylpiperidine21409-26-7C19H24N2281.201216N-苄基呋喃去甲芬太尼N-benzylfuranylnorfentanyl497240-21-8C23H24N2O2361.191117阿芬太尼Alfentanil71195-58-9C21H32N6O3417.260

15、9184-甲氧基四氢呋喃芬太尼4-methoxytetrahydrofuranfentanyl/C25H32N2O3409.248619芬太尼Fentanyl437-38-7C22H28N2O337.227420-甲基硫代芬太尼-methylthiofentanyl103963-66-2C21H28N2OS357.199521对氟脱丙酰芬太尼Despropionylpara-fluorofentanyl122861-41-0C19H23FN2299.191822苄基卡芬太尼Benzylcarfentanil61085-72-1C23H28N2O3381.2173234-甲氧基丙烯酰芬太尼4-m

16、ethoxyacrylfentanyl/C23H28N2O2365.222424呋喃基芬太尼Furanylfentanyl497240-21-8C24H26N2O2375.206725环丙基芬太尼Cyclopropylfentanyl1169-68-2C23H28N2O349.227426苯基芬太尼Phenylfentanyl2309383-15-9C26H28N2O385.227427舒芬太尼Sufentanil56030-54-7C22H30N2O2S387.2101282,3-司可芬太尼2,3-seco-fentanyl253342-66-4C22H30N2O339.243129庚酰芬太

17、尼Heptanoylfentanyl/C26H36N2O393.2929种芬太尼的中英文名称、AS号、分子式和母离子(M+H)精确质量数见表A.。SN/T54932023附录A(规范性)29种芬太尼中英文名称+1表A.29种芬太尼信息/注:“”无CAS号。5SN/T54932023附录B(资料性)29种芬太尼标准品子离子二级全扫描质谱图C(E=305V)229种芬太尼子离子二级全扫描质谱图见图B.1图B.9。1图B.去甲芬太尼2图B.去甲卡芬太尼3图B.N-甲基去甲卡芬太尼6SN/T549320234图B.丁酰去甲芬太尼5图B.去甲舒芬太尼6图B.瑞芬太尼-7图B.羟基硫代芬太尼7SN/T54

18、9320238-图B.4甲氧基乙酰芬太尼9图B.噻吩基芬太尼1图B.0奥芬太尼-1图B.1羟基芬太尼8SN/T549320231-图B.24甲氧基甲氧乙酰芬太尼1图B.3甲氧基乙酰芬太尼1图B.4硫代芬太尼1-图B.54苯胺基-N-苯乙基哌啶9SN/T549320231图B.6N-苄基呋喃去甲芬太尼1图B.7阿芬太尼1-图B.84甲氧基四氢呋喃芬太尼1图B.9芬太尼10SN/T549320232图B.0-甲基硫代芬太尼2图B.1对氟脱丙酰芬太尼2图B.2苄基卡芬太尼2-图B.34甲氧基丙烯酰芬太尼11SN/T549320232图B.4呋喃基芬太尼2图B.5环丙基芬太尼2图B.6苯基芬太尼2图B

19、.7舒芬太尼12SN/T5493202323图B.82,-司可芬太尼2图B.9庚酰芬太尼131.去甲芬太尼2.去甲卡芬太尼3.N-www.b甲基去甲卡芬太尼4.丁酰去甲芬太尼5.去甲舒芬太尼6.瑞芬太尼7.-羟基硫代芬太尼8.4-甲氧基乙酰芬太尼SN/T54932023附录C(资料性)29种芬太尼标准品一级全扫描色谱图129种芬太尼一级全扫描色谱图见图C.1图C.29种芬太尼一级全扫描色谱图149.噻吩基芬太尼10.奥芬太尼11.-羟基芬太尼12.4-甲氧基甲氧乙酰芬太尼www.b13.甲氧基乙酰芬太尼14.硫代芬太尼15.4-苯胺基-N-苯乙基哌啶16.N-苄基呋喃去甲芬太尼17.阿芬太尼18.4-甲氧基四氢呋喃芬太尼SN/T549320231图C.29种芬太尼一级全扫描色谱图(续)1519.芬太尼20.-甲基硫代芬太尼21.对氟脱丙酰芬太尼22.苄基卡芬太尼www.b23.4-甲氧基丙烯酰芬太尼24.呋喃基芬太尼25.环丙基芬太尼26.苯基芬太尼27.舒芬太尼28.2,3-司可芬太尼SN/T549320231图C.29种芬太尼一级全扫描色谱图(续)16SN/T5493202329.庚酰芬太尼1图C.29种芬太尼一级全扫描色谱图(续)17