[给学生]《微生物遗传育种学》复习思考题.docx

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1、给学生微生物遗传育种学复习思考题(1)2023 级生物技术专业微生物技术方向微生物遗传育种复习思考题微生物遗传育种复习思考题01 绪论1、工业微生物菌种应具有哪些根本特征？非致病性；适合大规模培育工艺要求；利于规模化产品加工工艺；具有相对稳定的遗传性能和生产性状；形成具有商业价值的产品或具有商业应用价值。 2、简述工业微生物遗传育种的分类。自然菌种native strain：通过自然筛选和分别获得的工业菌种；诱变菌种mutagenized strain：通过物理、化学等诱变剂在试验室人工诱变自然筛选与分别的菌株所获得产量或/和性状改善的工业菌种；重组菌种recombinant strain是通

2、过遗传重组技术对菌种进展定向遗传改进获得的工业菌种；遗传修饰生物体genetic modification organisms, GMOs：经外源基因导入并因此发生遗传整合和性状转变的生物体。3、试从微生物遗传学的不同角度阐述你对微生物多样性的生疏。一、微生物物种的多样性; 二、微生物遗传的多样性;三、微生物代谢的多样性 ;四、微生物的生态多样性;五、微生物利用的广泛性02 第四章 工业微生物育种诱变剂1、什么是诱变剂？可分为哪几种类型？诱变剂：凡能诱发生物基因突变，并且突变频率远远超过自发突变率的物理因子或化 学物质.可以分为三类：物理诱变剂；化学诱变剂：一类能对 DNA 起作用，转变 DN

3、A 构造， 并引起遗传变异的化学物质；生物诱变剂：承受某些噬菌体来筛选抗噬菌体突变菌株时， 常常觉察伴随着消灭抗生素产量明显提高的抗性突变株。因此，可以认为这些溶源性噬菌 体是一种生物诱变剂。2、什么是突变？突变的表现型有哪些？基因突变的特点有哪些？突变，从广义上讲，除了转化、转导、接合等遗传物质的传递和重组引起生物变异以外，任何表型上可遗传的突变都属突变范围，如染色体整倍性和非整倍性的变化及染色体构造上的畸变等都包括在内。 1、形态突变型，是一种可见突变，它包括微生物菌落形态变化，如菌落外形大小、颜色、外表构造等；2、生化突变型，；3、条件致死突变型； 4、致死突变型；5、抗性突变型；6、养

4、分缺陷型；普遍性；随机性基因突变可以发生在生物个体发育的任何时期和生物体的任何细胞。突变发生的时期越早，表现突变的局部越多，突变发生的时期越晚，表现突变的局部越少。；突变率低；多数有害；不定向性一个基因可以向不同的方向发生突变，产生一个以上的等位基因。3、突变后其基因型是否会很快表现？为什么？变基因的消灭并不意味着突变表型的消灭，表型的转变落后于基因型的转变，即表型延迟，微生物通过自发突变或人工诱变而产生的基因型个体所表现出来的遗传特性不能在当代消灭，其表型的消灭必需经过 2 代以上的生殖复制。表现延迟的缘由有：1、与诱变剂性质和细胞壁构造组成有关；2、当突变发生在多核细胞中的某一个核，该细胞

5、就成为杂核细胞了；3、原有基因产物的影响。产生缘由：分别性拖延现象生理性拖延现象 4、物理诱变剂主要有哪几类？请举例？物理诱变剂包括：紫外线，X 射线， 射线，快中子， 射线， 射线，微波，超声波，电磁波，激光射线和宇宙射线等 5、化学诱变剂主要有几大类？碱基类似物；烷化剂；脱氨剂；移码诱变剂；羟化剂；金属盐类；其他化学诱变剂第 1 页 共 10 页2023 级生物技术专业微生物技术方向微生物遗传育种复习思考题6、使用化学诱变剂时需要留意什么？、在进展化学诱变处理时，掌握使用剂量要以诱变效应大，而副反响小为原则。处理时的温度对诱变效应也有肯定影响。绝大多数化学诱变剂都具有毒性，其中90%以上是

6、致癌物质或极毒药品，使用时要格外留神，不能直接用口吸，避开与皮肤直接接触，不仅要留意自身安全防止污染环境，造成公害。7、依据你所学的诱发突变的学问，你认为能否找到一种仅仅对某一基因具有特异性诱变作用的化学诱变剂？为什么？不能找到具有特异性诱变作用的化学诱变剂，由于对于一般的化学诱变剂：碱基类似物、碱基修饰剂、移码突变剂，均不具有特异性。 诱变的特异性是靠识别碱基对来进展的，而任一个基因都不行能有完全特异的碱基对供识别。突变是随机性的。由于从分子生物学的角度来看，全部的基因都是存在于DNA 双链中，基因的信息都存在于由ATCG 碱基对的排列挨次中。即使有某些物质可以特异的识别某几个碱基的排列挨次

7、，但这种排列也存在于其他基因之中，诱变是在整个基因组范围内发生的。所以从现有的科研水平来看， 不存在有特异性的理化诱变剂。 现在对基因的诱变可以通过传统的遗传学方法实现，可以构建带有诱变位点的基因载体，转入生物体中，到达特异诱变的目的 。8、表现延迟：微生物通过自发突变或人工诱变而产生的基因型个体所表现出来的遗传特性不能在当代消灭，其表型的消灭必需经过 2 代以上的生殖复制。03 第五章 菌种分别筛选1、工业微生物的来源？1、向菌种保藏机构索取有关菌株，从中筛选所需菌株；2、由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进展分别筛选；3、从一些发酵制品中分别目的菌株。 2、从土壤中筛选微生物时

8、，采样应当留意一些什么问题？依据土壤特点：1、土壤有机质含量和通气状况；2、土壤酸碱度和植被状况；3、地理条件；4、季节条件；采样方法：用取样铲，将表层 5cm 左右的浮土除去，取 5-25cm 处的土样 10-25g，装入事先预备好的塑料袋内扎好。 3、什么叫富集培育？是在目的微生物含量较少时，依据微生物的生理特点，设计一种选择性培育基，制造 有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下快速地生长生殖，数量增加，由原来自然 条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分别到所需要的菌株。 4、纯种分别的方法有哪些？简述菌种分别和筛选的步骤。纯种分别通常承受梯度稀释涂布法和划线法。划线法是用接种针

9、挑取微生物样品在培育基上直接划线一般承受梯度划线法，培育后获得单菌落。划线法简便、快速，但所得到的单菌落不肯定是纯种可承受屡次转接划线加以弥补。稀释法是先将样品经无菌水或灭菌生理盐水 梯度稀释后，再涂布到固体培育基上， 培育后获得单菌落。稀释法使微生物样品分散更加均匀，获得纯种的概率更大。通过掌握养分和培育条件进展纯种分别：一般都承受筛选性平板辅以筛选性培育条件1掌握分别培育基中的养分成分碳氮源 2掌握培育基的 pH 值承受缓冲体系3掌握培育温度 嗜热性、大类特性如细菌 35，霉菌 27 度 4供氧条件的掌握厌好氧 利用生化反响进展分别初步分别：依据目的微生物的特别生理特性或其代谢产物的生化反

10、响进展设计。常用方法：1透亮圈法培育基浑浊 2变色圈法指示剂或显色剂3生长圈法承受养分缺陷菌作为指示 4抑菌圈法抗生素敏感菌作为指示可分为采样、富集、分别、产物鉴别几个步骤。第 2 页 共 10 页2023 级生物技术专业微生物技术方向微生物遗传育种复习思考题04 第六章 微生物诱变育种1、用野生型的大肠杆菌为动身菌株，可用哪种诱变剂怎样进展诱变得到 Leu-突变株， 如何检出和鉴定该突变株？ 1。先要获得野生型大肠杆菌的纯培育物2。诱变：可以选择各种诱变法，如紫外线诱变法，将肯定浓度的菌液可分成好几等分分别做试验放在肯定强度的紫外灯下照耀，那分成的几等分可以分别照耀10S，20S，30S，4

11、0S，50S，60S，留意，菌液不行太稀太浓，这个操作应当在黑暗的条件下进展，只允许有紫外光，以免光修复造成突变失败。3.培育：将上述菌种分别涂抹在配好的完全培育基上牛肉膏-蛋白胨培育基，倒置培育过夜4，筛选：配置好根本培育基，再往上面添加肯定浓度的氨基酸养分液，除了不要添加你说要得到的养分缺陷的那种氨基酸，必需氨基酸都要添加，再用影印法将3 中的菌落印到这些培育基上，倒置培育过夜。5。挑取：直接挑取 4 中培育基上的菌落，就是你要找的氨基酸养分缺陷突变菌株在 2 中，之所以要分成好几份做，再以不同时间长短去照耀，是为了加大筛选的效率时间过短，可能得不到想要的突变菌种，而时间过长，菌株全死，也

12、得不到想要的菌株， 所以这样做也可以算是一个试验性的步骤！2、诱变育种工作中如何制备菌悬液？在诱变育种中，所处理的细胞必需是单细胞的均匀悬液状态。缘由：1、分散状态的单细胞可以均匀地接触诱变剂；2、可避开长出不纯菌落。菌悬液由动身菌株的孢子或菌体细胞用生理盐水或缓冲液制备而成，其质量将直接影响诱变效果。1、供试菌株的孢子或菌体要年轻、强健；2、菌悬液制备方法：细菌经 20h-24h 培育的颖斜面，移接到盛有根本培育基的三角瓶中，于 35-37振荡培育到对数期，在于 6 培育 1h 使之同步生长，然后参加肯定密度的嘧啶、嘌呤或酵母膏，连续振荡培育20-60min。置于低温 10min，离心洗涤，

13、用冷生理盐水或缓冲液制备菌悬液，放在盛有玻璃珠的三角瓶内振荡 10min,令其分散，用无菌脱脂棉或滤纸过滤。通过菌体计数，调整菌悬液的浓度供诱变处理。3、依据突变的光复活修复作用、原理，你认为在进展紫外线诱变处理时，应留意什么?为了使被诱变的细胞能均匀地受到紫外线照耀，你将如何做？ 必需在暗室或红光下进展，并且不能马上进展光照耀 照耀距离要适宜，不能太远，否则达不到诱变作用，也不能太近，否则菌体会死 照耀时间要恰当紫外灯的功能要适宜。在紫外线照耀时，盛菌液的培育皿应置于磁力搅拌器上，边照耀边搅拌使细胞能均匀受到紫外线照耀。4、紫外线引起的胸腺嘧啶二聚体对微生物有何影响？哪些修复系统可对此进展修

14、复， 其结果如何？微生物在正常状况下进展DNA 复制时，首先DNA 双链解开成为单链，然后两条单链各自与细胞内游离的碱基互补配对形成链。假设此时双链之间有嘧啶二聚体存在，则因二聚体的交联作用，阻碍双链分开，复制到此处就无法进展下去，造成DNA 特别状态。假设在一条单链上消灭嘧啶二聚体，则会影响复制过程碱基的正常配对。在正常状况下T 与 A 配对，假设二聚体形成，就要破坏A 的正常掺入，复制就会在这一点突变停顿或错误进展， 以致在形成的链上有了一个转变了的碱基序列。有光修复、切补修复、重组修复、SOS 修复系统。还有聚合酶的校正作用。第 3 页 共 10 页2023 级生物技术专业微生物技术方向

15、微生物遗传育种复习思考题光修复、是一种高度专一的修复方式，只作用由紫外线引起的DNA 嘧啶二聚体的修复切补修复、发生在DNA 复制之前，是对模板的修复，如大肠杆菌的Uvr 修复系统，负责切除大量的胸腺嘧啶二聚体。重组修复、不将损伤碱基除去，而是通过复制后，经染色体交换，使子链上的空隙部位不再正对T=T，而是面对正常的单链。其中Rec 系统负责消退那些没有被切除修复系统所切除的T=T 可能造成的可怕的后果。SOS 修复系统、松懈DNA 复制校对系统，允许生DNA 链越过T=T 而延长，不去管双螺旋构造的变形。导致错误的碱基消灭在生长链的任何位置，数量太大，错配修复和切除修复系统订正一些，仍留有很

16、多错配碱基，从而造成突变。光修复、切补修复和聚合酶修复都是修复模板链。而重组修复是形成一条的模板链， SOS 是产生连续的子链。SOS 修复是唯一导致突变的修复，其余的修复机制都是将DNA 损伤恢复到损伤前的状态或产生与亲本完全一样的子代DNA。5、某人将一细菌培育物用紫外线照耀后，马上涂布在加有链霉素Str的平板上， 放在有光条件下培育，从中筛选Str 抗性突变株，结果没有长出Str 抗性菌落，试分析失败的缘由？1、紫外线诱变后见光培育，造成光修复，使得突变率大大下降，以致选不出str 抗性菌株；2、紫外线的照耀后可能根本没有产生抗str 的突变。 6、紫外线诱变育种的作用机制。紫外线诱变一

17、般承受 15W 紫外线杀菌灯，波长为 2537A灯与处理物的距离为 15 30cm，照耀时间依菌种而异，一般为几秒至几格外钟。一般我们常以细胞的死亡率表示， 期望照耀的剂量死亡率掌握在 7080%为宜。被照耀的菌悬液细胞数，细菌为 106 个/mL 左右，霉菌孢子和酵母细胞为 106107 个 /mL。由于紫外线穿透力不强，要求照耀液不要太深，约 0.51.0cm 厚，同时要用电磁搅拌器或手工进展搅拌，使照耀均匀。由于紫外线照耀后有光复活效应，所以照耀时和照耀后的处理应在红灯下进展。 7、何为根本、完全、补充培育基？ 根本培育基：但凡能满足某种野生型菌株养分要求的最低成分的合成培育基，称为根本

18、培育基；常以-表示；完全培育基：在根本培育基中参加一些富含氨基酸、维生素及含氮碱基之类的自然有机物质如蛋白胨、酵母膏等，以满足该微生物的各种养分缺陷型菌株都能生长生殖的培育基，称为完全培育基，常用+ 表示；补充培育基：在根本培育基中只是有针对性地参加某一种或某几种养分缺陷成分， 以满足相应的养分缺陷型生长的培育基，称为补充培育基，补充培育基可按所参加养分成 分相应地用A、B等来表示。8、何为野生型、养分缺陷型、原养型？养分缺陷型auxotroph：经诱变产生 的一些合成力量消灭缺陷，而必需在培育基内参加相应有机养分才能正常生长的变异菌株。如：lys - ；his - ；野生型(wild typ

19、e)：自然界分别到的任何微生物，在其发生养分缺陷突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。如： lys+；his+ ;原养型 (prototroph) ： 指 auxo 突变菌株回复突变或重组后产生的菌株，与野生型的表型一样。9、淘汰野生型的目的、原理及方法如何？ 目的：使缺陷型菌株得以富集，以利于检出；原理：限制养分成分使缺陷型细胞生长受抑制，野生型细胞在生长过程中被杀死或生长后被除去。方法：1抗生素法：野生型能在MM 中生长，而缺陷型不能，于是将诱变处理液在MM中培育短时让野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生长，仍处于休眠状态。由于细菌或酵母对一些抗生素敏感，于是就相应参加肯定量的抗生素，

20、结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷型。一般细菌可以承受青霉素，酵母可承受制霉菌素。2菌丝过滤法：适用于丝状菌放线菌、霉菌。原理：野生型在根本培育基上发 育成菌丝，第 4 页 共 10 页2023 级生物技术专业微生物技术方向微生物遗传育种复习思考题不能 通过滤膜；养分 缺陷型孢子可通过滤膜，野生型 菌丝不能通过。3差异杀菌法： 根本培育基上只有野生型生长，加热杀死野生型养分体，保存养分缺陷型芽孢。 细菌80 酵母60 适用于产芽孢、孢子菌。 10、如何检出和鉴定养分缺陷型突变株？原理：在固体根本培育基和完全培育基上，生长状况完全不同，缺陷型在CM 上生长良好，而在MM 上则不生长，野生型

21、都能生长。检出具体方法：影印法 1将一较平皿直径小 1cm 的金属圆筒蒙上一层灭菌的丝绒， 用金属夹夹住，灭菌。2将完全培育基上长出的全部菌落在丝绒上轻轻一压，使之成为印模，标记方位。3将根本培育基平皿和完全培育基平皿在标记的同一方位上先后轻轻一压，此菌印模即复印于上。4 将CM 和 MM 在恒温箱中培育。5二平皿一样方位进展比较， 即可觉察在MM 平皿上长出的菌落少于GM 平板上的。MM 上未长而相应于CM 上长出的那几个菌落就可能是缺陷型。此法要求平皿上菌落不能太多，菌落之间应有肯定间隔。点种法点植比照法也就是任意法。用接种针或牙签将CM 上长出的菌落在MM 和 CM 两副平板上接种，依次

22、在相应位置点种，然后一起培育，观看其生长状况。此法结果明确， 但工作量大。夹层法先在培育皿上倒一层根本琼脂培育基，凝固后涂上一层含菌的MM，凝固后再倒一薄层MM 琼脂培育基，培育 24h，将消灭的菌落标记，然后倒上一层CM 琼脂培育基，再培育。这时其次批长出的菌落就可能是缺陷型。此法缺点是，结果有时不明确， 而且将缺陷型菌落从夹层中挑出并不很简洁。限量补充培育法。 鉴定方法： 含养分缺陷型菌株的根本培育基平板的制备。 养分缺陷型养分类别的鉴定。 缺陷型菌株单一养分因素的鉴定。 可分为两类：一种方法是在一个平皿中参加一种养分物质以测定多株缺陷型菌株对该生长因子的需求状况；其次种方法是在同一平皿上

23、测定一种缺陷型菌株对很多种生长因子的需求状况，成为生长谱法。步骤：测定缺陷型菌株所需生长因子的类别具体测缺陷该类别物质中的哪种生长因子用单一生长因子进展复证试验。1缺陷型类别的鉴定；2缺陷型所需生长因子的测定。11、用什么方法可获得大肠杆菌E. coli的组氨酸缺陷型？ 养分缺陷型菌株的筛选一般要经过：1诱发突变 2淘汰野生型菌株 3检出养分缺陷型 4鉴定养分缺陷型 4 个环节。将筛选得到的缺陷型菌株分别涂在不加任何氨基酸的根本培育基和加有组氨酸的根本培育基上，过夜培育一段时间后观看，假设前者不长后者长出菌落，即为组氨酸缺陷型。12、试述筛选养分缺陷型菌株的方法，并说明养分缺陷型菌株在应用上的

24、作用。1诱发突变 2淘汰野生型菌株 抗生素法 菌丝过滤法 原理：野生型在根本培育基上发 育成菌丝，不能 通过滤膜；养分 缺陷型孢子可通过滤膜，野生型 菌丝不能通过：?高温杀菌法3检出养分缺陷型 ?点植比照法?影印法?夹层法限量补充培育法4鉴定养分缺陷型作用：1、可作为标记菌种；2、利用缺陷型可以获得某些代谢的中间产物，因此在生 产上可作为生产菌种，氨基酸、核苷酸等；3、作为氨基酸、维生素、碱基的测定菌株；4、养分缺陷型在杂交育种中是不行缺少的工具；5、可以用来争论生物合成途径。13、在养分缺陷型突变株的筛选过程中，淘汰野生型的目的是什么？并写出3 中主要方法及其原理。目的是：使缺陷型菌株得以富集，以利于检出；1抗生素法：野生型能在MM 中生长，而缺陷型不能，于是将诱变处理液在MM 中培养短时让野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生长，仍处于休眠状态。由于细菌 或酵母对一些抗生素敏感，于是就相应参加肯定量的抗生素，结果活化状态的野生型就被 杀死，保存了缺陷型。一般细菌可以承受青霉素，酵母可承受制霉菌素。 2菌丝过滤法： 适用于丝状菌放线菌、霉菌。原理：野生型在根本培育基上发 育成菌丝，不能 通过滤膜；养分 缺陷型孢子可通过滤膜，野生型 菌丝不能通过。第 5 页 共 10 页感谢您的阅读，祝您生活开心。