大肠杆菌测试片检定规程行业资料国内外标准规范_行业资料-国内外标准规范.pdf

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1、90%大肠杆菌测试片成品检验规程 一、用途 大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌，食物或水中大肠杆菌的检出即意味着直接或间接被粪便 污染。大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品，与传统检 测方法相比省去了乳糖发酵、氧化酶试验、三糖铁琼脂（TSI）、靛基质试验、尿素酶试验等鉴定过程,大大缩短了检测周期。本产品适用于食品、饮用水及原料中大肠杆菌的计数，也可用于食品设备加工设备 表面的卫生检查。执行标准：食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数 PetrifilmTM 测试片法（GB/T 4789.38 二、基本要求 设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施

2、。三、成品检定 成品按下述技术指标进行检定。【物理性状】组成 规格 盛装材料 物理性状 上层 70 X 90cm 米色粉末 淡黄色薄膜 下层 65 X 85cm 淡黄色培养基 圆形淡黄色薄膜底板 【相关参数要求】准确度 大肠杆菌测试片对样本检测的准确度为：80%100%假阳性率 本测试片通过对判定为大肠杆菌阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定，假阳性率应 小于20%误差率 随机抽取 20 片测试片进行同一样本平行检测，进行 P 值检验，比较 P 值与a值的大小，从而判断本测试片检测样本的均一性。稳定性及老化 取半成品 30 片分别进行 4 C和 37C保存 12 天的数据比对,12

3、 天两组保存数据菌落数符合率大于（一）样品:序 号 食品大类 食品品种 典型代表样品 1 饮料 桶（瓶）装饮用水 娃哈哈 碳酸饮料 可口可乐 2 乳制品 乳粉 伊利女士营养奶粉 着直接或间接被粪便污染大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品与传统检测方法相比省去了乳糖发酵氧化酶试验三糖铁琼脂靛基质试验尿素酶试验等鉴定过程大大缩短了检测周期本产物检验大肠杆菌计数测试片法二基本要求设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施三成品检定成品按下述技术指标进行检定物理性状组成上层下层规格盛装材料米色粉末物理性状淡黄色薄膜淡黄色培养基圆形淡黄阳性的菌落进行大肠

4、杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定假阳性率应小于误差率随机抽取片测试片进行同一样本平行检测进行从而判断本测试片检测样本的均一性值检验比较值与值的大小稳定性及老化取半成品片分别进行和保存天的 液体乳 旺仔牛奶、三花酸奶、伊利纯牛奶 3 肉制品 生肉 鸡肉、猪肉、里脊、鸭肉（选其一）熟肉 熟肉干制品、熏烧烤肉制品（选熟肉即可）4 速冻食品 速冻面米食品 饺子、汤圆 5 蔬菜制品 蔬菜 生菜 蔬菜干制品 挑选一种有代表性的 注：每大类不少于2中样本，样本可随季节和客户需求进行更换 2.国标方法所用试剂：VRBA-MU培养基、蛋白胨水、缓冲葡萄糖蛋白胨水、西柠檬酸盐培 养基、无菌生理盐水、甲基红试剂、V-

5、P试剂、Kovacs靛基质试剂、1M HCL和NaOH 等。3.仪器及耗材 均质机、恒温恒湿培养箱、高压灭菌锅、显微镜、大肠杆菌测试片、平板、移液管、均 质袋等。（二）、试验流程 1、样品的处理及稀释 参照 GB4789.38-2012 中 6.1 进行。2、检测流程-国标方法（GB4789.38-2012）3、检测流程-测试片（参照测试片说明书进行培养和菌落计数）着直接或间接被粪便污染大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品与传统检测方法相比省去了乳糖发酵氧化酶试验三糖铁琼脂靛基质试验尿素酶试验等鉴定过程大大缩短了检测周期本产物检验大肠杆菌计数测试片法二基

6、本要求设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施三成品检定成品按下述技术指标进行检定物理性状组成上层下层规格盛装材料米色粉末物理性状淡黄色薄膜淡黄色培养基圆形淡黄阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定假阳性率应小于误差率随机抽取片测试片进行同一样本平行检测进行从而判断本测试片检测样本的均一性值检验比较值与值的大小稳定性及老化取半成品片分别进行和保存天的取营养琼脂平板上的培养物进行靛基质试验、希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别见表 1。MR、V-P试验和柠檬酸盐利用试验。大肠埃 （三）验证参数 1.准确度 取样品，随机抽取测试片，每个稀释度接种三片，按照本测试片方法进行检测。相

7、同样本，按照国标 GB 4789.38-2012食品安全国家标准 食品微生物学检测 大肠埃希 氏菌计数进行检测。本测试片和国标方法报告菌落数相比较的准确度应 80%-100%范围内，计算公式如下：M-1 Xf-准确度=-K100%M M样品国标方法测得大肠杆菌对数值；M:样品测试片测得大肠杆菌对数值。2.假阳性率 从单个测试片上挑取判定为阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定，分别 统计阳性菌落数和非阳性菌落数。大肠杆菌假阳性率=-x 100%F:为接种VRBA-MUG勺所有菌落数 本测试片检测的假阳性率应小于 20%。生理鉴定：革兰氏阴性无芽抱杆菌 生化鉴定步骤如下：参照GB478

8、9.38-2012中大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化进行 从培养好的测试片上挑取判定为大肠杆菌阳性的菌落，用接种针接触菌落中心部位，移种 到营养琼脂平板上，36 C 1 C,培养18 h24 h。取培养物进行革兰氏染色和生化试验 靛棊质1）甲墓红（MR）VP试验(VP)柠檬醸盐（C）鉴定（型别）着直接或间接被粪便污染大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品与传统检测方法相比省去了乳糖发酵氧化酶试验三糖铁琼脂靛基质试验尿素酶试验等鉴定过程大大缩短了检测周期本产物检验大肠杆菌计数测试片法二基本要求设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施三成品检定成品按

9、下述技术指标进行检定物理性状组成上层下层规格盛装材料米色粉末物理性状淡黄色薄膜淡黄色培养基圆形淡黄阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定假阳性率应小于误差率随机抽取片测试片进行同一样本平行检测进行从而判断本测试片检测样本的均一性值检验比较值与值的大小稳定性及老化取半成品片分别进行和保存天的+胞业大肠埃希氐茵 +非典舉丸肠埃希氏菌+典吐中间胞 +非典舉中側犁-+勲型产q肠杆菌+非典型产气肠什菌 注h 外时生化反应类型+衷明培养物可能不纯.应巫新划线分离，泌要时做璽巫试验*注 N生化试验也可以选用生化鉴宦试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统等方法.按舸产品说明书进行操作.判定标准：鉴定为革兰

10、氏阴性无芽胞杆菌，IMViC生化试验为+或-的菌落 即未大肠杆菌阳性菌。3.均一性 随机抽取 20 片测试片进行同一样本平行检测，进行 P 值检验，比较 P 值与a值的大小，从而判断本测试片检测样本的均一性。4、稳定性老化 取样品，随机抽取测试片，每个稀释度接种三片，按照本测试片方法进行检测。相同样本，按照国标 GB 4789.38-2012食品安全国家标准 食品微生物学检测 大肠埃希 氏菌计数进行检测。本测试片和国标方法报告菌落数相比较的准确度应 80%-100%范围内，计算公式如下：M-1 M-Mx|准确度二 -xlOQ%M M 4C测得大肠杆菌对数值；MX:37E测得大肠杆菌对数值。对应

11、表格：表1大肠杆菌测试片验证数据 项目名称 大肠杆菌快速检测测试片 培养条件 检测样品及项目 样品 稀释倍数 国标法(cfu/mL)(cfu/mL)第三方 平行1 平行2 平行3 平行1 平行2 平行3 平行1 平行2 平行3 1 浓度1:浓度2 2 浓度1 着直接或间接被粪便污染大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品与传统检测方法相比省去了乳糖发酵氧化酶试验三糖铁琼脂靛基质试验尿素酶试验等鉴定过程大大缩短了检测周期本产物检验大肠杆菌计数测试片法二基本要求设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施三成品检定成品按下述技术指标进行检定物理性状组成上

12、层下层规格盛装材料米色粉末物理性状淡黄色薄膜淡黄色培养基圆形淡黄阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定假阳性率应小于误差率随机抽取片测试片进行同一样本平行检测进行从而判断本测试片检测样本的均一性值检验比较值与值的大小稳定性及老化取半成品片分别进行和保存天的 浓度2 3 浓度1 浓度2:4 浓度1 浓度2:5 浓度1 浓度2 表 2报告大肠杆菌及准确度 报告菌落数及准确度 样品 方法 报告菌落 数（cfu/mL）og10 （cfu/mL）（测试片与国标比 较）准确度%（第三方测试片与国标比 较）准确度%1 国标法 第二方 测试片 2 国标法 第二方 测试片 表 3 假阳性率 检测样品

13、挑取菌落数 BGL 沪气管数 假阳性率 1 2 3 表4均一性分析数据 随机取测试片编号 平行1 平行2 平行3 报告困洛数（cfu/mL）1 浓度1 浓度2 2 浓度1 浓度2 表 5 稳定及老化数据 呆存天数 第六天 第九天 第12天 着直接或间接被粪便污染大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品与传统检测方法相比省去了乳糖发酵氧化酶试验三糖铁琼脂靛基质试验尿素酶试验等鉴定过程大大缩短了检测周期本产物检验大肠杆菌计数测试片法二基本要求设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施三成品检定成品按下述技术指标进行检定物理性状组成上层下层规格盛装材料米

14、色粉末物理性状淡黄色薄膜淡黄色培养基圆形淡黄阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定假阳性率应小于误差率随机抽取片测试片进行同一样本平行检测进行从而判断本测试片检测样本的均一性值检验比较值与值的大小稳定性及老化取半成品片分别进行和保存天的审批人：日期：2019.9.30 温度 及倍数、本批次 上批次 本批次 上批次 本批次 上批次 4 C 37 C 4C 37 C 4C 37 C 4C 37 C 4C 37 C 4C 37 C 起草人：审核人：/日期：2019.9.30 日期：/【贮藏】在28 C下避光保存,12个月内使用 着直接或间接被粪便污染大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品与传统检测方法相比省去了乳糖发酵氧化酶试验三糖铁琼脂靛基质试验尿素酶试验等鉴定过程大大缩短了检测周期本产物检验大肠杆菌计数测试片法二基本要求设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施三成品检定成品按下述技术指标进行检定物理性状组成上层下层规格盛装材料米色粉末物理性状淡黄色薄膜淡黄色培养基圆形淡黄阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定假阳性率应小于误差率随机抽取片测试片进行同一样本平行检测进行从而判断本测试片检测样本的均一性值检验比较值与值的大小稳定性及老化取半成品片分别进行和保存天的