新高考一轮复习人教版PCR技术与DNA粗提取与鉴定教案.docx
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1、考点3 PCR技术与DNA粗提取与鉴定、必备知识梳理1. RCR技术知原理理清流程 原理:DNA双链复制。模板:DNA母链(2)条件酶:北酶引物:分别与单链相应序列相结合【原料:4种脱氧核昔酸过程变性条件:.实质:温度上升到9095 C左右 双链DNA解旋为单链复性条件:、实质:温度冷却到5560 0c左右 两种引物与两条单链DNA结合延伸条件:、实质:温度上升到7075 左右在Thq酶的作用下,合成子链2. DNA的粗提取与鉴定 (1)实验原理材料的选取 一选用DNA含量相对较高的生物组织破碎细胞 _鸡血细胞一加理置丞一用玻璃棒搅拌 (以鸡血为例)|一|一用纱布过滤一收集滤液|网用DNA在不
2、同浓度NaCl溶液中溶去除杂质一解度不同,通过控制NaCl溶液的浓度 |去除杂质;|将处理后的溶液过滤,加入与滤液体DNAi勺析出积相等的、冷却的体积分数为95%的 酒精溶液J在溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯DNA%勺鉴定|一胺试剂,混合均匀后将试管在沸水中 加热5 min,溶液变成蓝色、核心素养 突破知考向-锋炼技能考向一科学探究PCR技术的过程LQ021 山东统考)双脱氧核昔三磷酸(ddNTP)与脱氧核昔三 磷酸(dNTP)的结构如图所示。已知ddNTP按碱基互补配对的方 式加到正在复制的子链中后,子链的延伸立即终止。某同学要通 过PCR技术获得被32P标记且以碱基“C”为末端的、不同
3、长度的 子链DNA片段。在反应管中已经有单链模板、引物、DNA聚合 酶和相应的缓冲液等,还需要加入下列哪些原料()7POOOIIIIII%HOPOPOPOCH2O- O O-X在ddNTP中表示HX在dNTP中表示OH4,3,- 由碱基 (A/G/C/T) 争HdGTP, dATP, dTTP, dCTP dGTP, dATP, dTTPa位被32P标记的ddCTPy位被32P标记的ddCTPA.B.C.D.解析 本题考查DNA分子的结构、DNA复制的相关知识, 意在考查考生的理解能力。组成DNA分子的基本单位是脱氧核 昔酸,要获得DNA片段,除反应管中已有的物质外,还需要dGTP、dATP、
4、dTTP、dCTP,现要获得被32P标记且以碱基“c”为末端的DNA片段,分析题意可得,还应加入ddCTP,合成DNA的原料是脱氧核昔酸,其含有一个磷酸基团,分析图中 ddNTP的结构,可知应以a位被32P标记的ddCTP作为原料,A项符合题意。答案A2. (2019全国卷I )基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以从基因文库中获得。基因文库包括 和 O(2)生物体细胞内的DNA复制开始时,解开DNA双链的酶o在体外利用PCR技术扩增目的基因时,使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是o上述两个解链过程的共同点是破坏了 DNA双链
5、分子中的(3)目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆DNA聚合酶的主要原因是解析(1)基因文库包括基因组文库和cDNA文库。(2)生物体细胞内DNA复制开始时是利用解旋酶进行解旋的,而在体外 利用PCR技术扩增目的基因时,则是通过加热至9095 进行 解旋的,二者都破坏了碱基对之间的氢键。(3)在PCR过程中, 要加热至9095 C,所以使用热稳定性高的北q酶,而不使用 在高温下会失活的大肠杆菌DNA聚合酶。答案(1)基因组文库cDNA文库解旋酶加热至9095 氢键(3)2q酶热稳定性高,而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活考向二科学探究DNA的粗提取与鉴定NA进行鉴定时,做如下操作:序
6、号AB1力口 2 mol/L 的 NaCl 溶液 5 mL力口 2 mol/L 的 NaCl 溶液 5 mL2不加加入提取的DNA丝状物并搅拌3加4 mL二苯胺,混匀加4 mL二苯胺,混匀4沸水浴5分钟沸水浴5分钟实验现象实验结论一 71 L 口*fj=f=frA 二 二 B二-O M内?_d L根据右图,完成表格空白处的实验内容。对于B试管,完成1、2、3的操作后溶液颜色如何变化?(3)在沸水浴中加热的目的是,同时说明DNA对高 温有较强的 o(4)A试管在实验中的作用是 o(5)B试管中溶液颜色的变化程度主要与 有关。解析 A、B两试管形成对照,B试管中含DNA丝状物,A 试管中不含,起对
7、照作用,其他条件均完全相同。本实验强调反应条件是沸水浴加热5 min,这样可加快颜色反应的速度,观察 对比两试管的颜色时要等到冷却以后。答案(1)溶液不变蓝色溶液逐渐变蓝色DNA在沸水浴的情况下遇二苯胺会被染成蓝色(2)溶液颜色基本不变(3)加 快颜色反应速度耐受性(4)对照(5)加入试管中的DNA(丝状物)的多少武考场二维演练经典考题演练提升隰教材疑点排查(1)限制酶只能用于切割目的基因。(X)(2)切割质粒的限制性核酸内切酶均能特异性地识别6个核 昔酸序列。(X)(3)E-coli DNA连接酶既可连接平末端,又可连接黏性末端。(X)(4)限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常
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