木聚糖酶活力测定行业资料食品饮料_行业资料-食品饮料.pdf

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1、木聚糖酶活力测定 原理：木聚糖是植物半纤维素的主要成分，为自然界中广泛存在、含量仅次于纤维素 的可再生多糖资源，占细胞干重的 7%35%。木聚糖酶是一类可将木聚糖降解成低聚糖和 木糖的复合酶系。它以内切方式降解木聚糖主链架的B-I,4-木糖苷键，其水解产物主要是 木二糖和木寡糖，少量的木糖和阿拉伯糖。木聚糖酶水解木聚糖底物生成的还原性糖，可在 煮沸条件下与 DNS 显色剂生成棕红色的氨基化合物。在一定范围内，还原糖的生成量与反应 液的颜色强度成正比。因此可通过测定棕红色的氨基化合物 540nm 波长下吸光度来测定木聚 糖酶活力。试剂：DNS 溶液：酒石酸钾钠 182 g，溶于 500mL 蒸馏

2、水中，加热，于热溶液中依次加入 3,5-二硝基水杨酸 6.3 g,NaOH 21g,苯酚 5 g，搅拌至全溶，冷却后用蒸馏水定容至 1000 mL,贮于棕色瓶中，室温保存 1mg/mL 木糖标准溶液：无水木糖于 80 C 烘至恒重，称取 0.1 g 于烧杯中，加适量蒸馏水 溶解，转入容量瓶中并定容至 100 mL。方法：标准曲线的绘制：取 6 支 20m 啲试管按下表顺序依次加入各试剂 试管号 试剂（单位：1 2 3 4 5 6 1mg/mL 木糖标准溶液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 DNS 1.5 1.5 1.5 1.5 1

3、.5 1.5 沸水中煮沸 5min,流水冷却 2min,各管中加 16.5 mL 蒸馏水，定容到 20mL 摇匀，放置 20min 后，测定 540nm 处吸光度。待测液木聚糖酶活力的测定 待测样品 1.加底物 1%勺木聚糖溶液 4 mL 2.50 C 预热 3 min 3.加酶液 1 mL 4.混合 5.50 C 水解 10 min 6.力口 DNS 试齐 U 2 mL 7.混合 8.沸水浴中 10 min 9.冷却定容至 20 mL 10.样品 540 nm 下测定 空白对照 1.加酶液 1 mL 2.沸水煮沸 10 min 3.加底物 1%勺木聚糖溶液 4 mL 4.混合 5.50 C

4、水解 10 min 6.力口 DNS 试齐 U 2 mL 7.混合 8.沸水浴中 10 min 9.冷却定容至 20 mL 10.样品 540 nm 下测定y=0.8537X+0.0215 0.8 R2=0.9955 J 6 4 0 0 O4 0.2 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 木糖量（mg）1.2 1.4 源占细胞干重的木聚糖酶是一类可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的复合酶系它以内切方式降解木聚糖主链架的木糖苷键其水解产物主要是木二糖和木寡糖少量的木糖和阿拉伯糖木聚糖酶水解木聚糖底物生成的还原性糖可在煮沸条件红色的氨基化合物波长下吸光度来测定木聚糖酶活力试剂溶液酒石酸钾钠溶于蒸馏水中

5、加于溶液中依次加入二硝基水杨酸苯酚搅拌至全溶冷却后用蒸馏水定容至贮于棕色瓶中室温保存木糖标准溶液无水木糖于烘至恒重称取于烧杯中单位木糖标准溶液蒸馏水沸水中煮沸流水冷却各管中加蒸馏水定容到摇匀放置后测定处吸光度木糖量待测液木聚糖酶活力的测定待测样品空白对照加底物勺木聚糖溶液加酶液预热沸水煮沸加酶液混合水解力口试齐混合沸水浴中冷却Welcome To Download!欢迎您的下载，资料仅供参考！源占细胞干重的木聚糖酶是一类可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的复合酶系它以内切方式降解木聚糖主链架的木糖苷键其水解产物主要是木二糖和木寡糖少量的木糖和阿拉伯糖木聚糖酶水解木聚糖底物生成的还原性糖可在煮沸条件红色的氨基化合物波长下吸光度来测定木聚糖酶活力试剂溶液酒石酸钾钠溶于蒸馏水中加于溶液中依次加入二硝基水杨酸苯酚搅拌至全溶冷却后用蒸馏水定容至贮于棕色瓶中室温保存木糖标准溶液无水木糖于烘至恒重称取于烧杯中单位木糖标准溶液蒸馏水沸水中煮沸流水冷却各管中加蒸馏水定容到摇匀放置后测定处吸光度木糖量待测液木聚糖酶活力的测定待测样品空白对照加底物勺木聚糖溶液加酶液预热沸水煮沸加酶液混合水解力口试齐混合沸水浴中冷却