AcSDKP对大鼠肾间质成纤维细胞生长抑制作用的观察医学心理学基础医学_论文-会议文章.pdf

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1、AcSDKP对大鼠肾间质成纤维细胞 生 长抑制作用的观察 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（N-Acetyl-Seryl-Aspartyl-Lysyl-Proline，AcSDKP这）一四肽链是 Frindek 等1于 1977 年首次 从胎牛骨髓中提取的一种生理性造血细胞生长抑制因子,它可以通过阻止原始造 血干细胞进入 S 期，使其停留在 G0期而发挥其生长抑制作用。随后的研究发 现，AcSDKP对非造血细胞如淋巴细胞也有生长抑制作用 2,3。但目前我们尚不 知 AcSDKP在肾脏细胞增殖中是否起作用,本研究观察了 AcSDKP对大鼠肾间质成 纤维细胞的生长抑制作用。借以探索一种

2、新的抑制肾脏细胞慢性增殖的思路和 方法。材料和方法 1细胞培养：将在-70液氮内冻存的大鼠肾间质成纤维细胞复苏转种至 5个含 5%胎牛血清的 RPMI-1640培养基、直径为 90 mm塑料培养皿中，放入 CO2 恒温培养箱孵育。细胞培养孵育箱箱温为 37,含 5%C20、95%空气。一般数小 时即可见成纤维细胞贴壁，23 d 布满培养皿底部，此时的成纤维细胞极纯，可用来作研究。2反应物：合成的 AcSDKP，购自 BEX CO.,LTDTOKY公O司。用双蒸水将其 配制成不同浓度备用。Alamar blue：购自 Mfg By AccuMed 公司，专利号 5,501.959。3成纤维细胞增

3、生系列：将培养皿中成纤维细胞调配至 2.5 104/ml 的浓 度，种植在 96孔塑料细胞培养基中,将浓度（mol/L）分别为 10-9、10-8、10-7、10-6、10-5的 AcSDKP加入到培养皿中共同孵育 2448 h 以上。4Alamar blue 测定法：将与 AcSDKP共同孵育 24及 48 h 后的成纤维细 胞培养基中,加入 Alarm blue 共同孵育 4 h 后，用 Bio-RAD-Model 550 微板测 定仪测定其吸光度（A）（吸收光谱 570590 nm）。空白对照组：为成纤维细胞 本身。统计学分析:采用 t 检验法及 F 和 Duwnett 检验法。1成纤维

4、细胞在 AcSDKP 1 mol/L 的浓度中孵育 24 及 48 h 后,分别测定 其吸光度（A）值，发现 24 h Alarm blue 的 A 值与对照组差异无显著意义。当 孵育 48 h 后,其A值与对照组差异有非常显著意义（P0.001）。2不同浓度的 AcSDKP对大鼠肾间质成纤维细胞的生长抑制作用具有随浓 度而变化的特性；将成纤维细胞分别孵育在浓度（mol/L）10-9、10-8、10-7、10-6、10-5的 AcSDKP中，测定其 48 h 的 A值时发现,当 AcSDKP为 10-7、10-6、10-5mol/L 时与对照组差异有显著意义(P0.05)，AcSDKP对细胞的

5、生长、抑制作用 具有随浓度而变化的特性,当 AcSDKP的浓度高于 10-5 mol/L 或低于 10-8 mol/L 时,其抑制作用消失,最大抑制浓度为 10-6 mol/L，最大抑制率约 33%(10-6 mol/L)。讨论 肾脏细胞增生是肾小球纤维化和硬化的早期病理过程。它受细胞增殖调节 因子影响。细胞生长与否取决于促生长因子与细胞生长抑制因子之间复杂的平 衡调节。在肾脏间质中成纤维细胞起骨架作用，而且通过自分泌及旁分泌机制 参与了肾小球纤维化及硬化过程。至今为止,我们对于细胞生长负性调节因子所 知甚少。在本研究中,我们观察了一种生理性细胞生长抑制因子 AcSDKP对大鼠 肾间质成纤维细

6、胞的生长抑长抑制作用。结果发现 AcSDKP对肾间质成纤维细胞 具有生长抑制作用,而且其生长、抑制作用具有随浓度而变化的特性,当 AcSDKP 的浓度高于 10-5 mol/L 或低于 10-8 mol/L 时,其抑制作用消失,最大抑制浓度为 10-6 mol/L。最大抑制率约 33%。本研究表明 AcSDKP的生长抑制作用不仅仅局 限于造血干细胞，它对于其他细胞如肾脏间质中成纤维细胞也有生长抑制作用,它可能对抑制肾脏细胞增生也起一定调节作用。肾脏疾病慢性化进程中 AcSDKP 是否参与作用是一个很令人感兴趣的问题。本研究为阻滞肾脏细胞慢性增生、纤维化提供了一种新思路和方法。志谢 本研究主要工

7、作在东京女子医科大学完成。特此向日本老师岩本典 子、吉冈俊正、白发宏司、伊藤克己志谢 本文编辑：江澜 基金项目：日中医学会?川医学奖学金、?川医学生同学会基金资助项目(026)作者单位：肖慧捷(100034 北京医科大学第一医院儿科)参考文献 1 Frindek E,Guigon M.Inhibition of CFU entry into cycle by a bone marrow extract.Exp Hematol,1977,5:74-76.2 Lenfant M,Wdzieczak-Bakala J,Guittet E.Inhibitor of hematopoietic plur

8、ipotent stem cell proliferation:purification and determination of its structure.Proc Natl Acad Sci USA,1989,86:779782.3 Li J,Volkov L,Comte L,et al.Production and consumption of the 牛骨髓中提取的一种生理性造血细胞生长抑制因子它可以通过阻止原始造血干细胞进入期使其停留在期而发挥其生长抑制作用随后的研究发现对非造血细胞如淋巴细胞也有生长抑制作用但目前我们尚不知在肾脏细胞增殖中是否起作材料和方法细胞培养将在液氮内冻存的

9、大鼠肾间质成纤维细胞复苏转种至个含胎牛血清的培养基直径为塑料培养皿中放入恒温培养箱孵育细胞培养孵育箱箱温为空气一般数小时即可见成纤维细胞贴壁布满培养皿底部此时的成纤维细系列将培养皿中成纤维细胞调配至的浓上度种植在孔塑料细胞培养基中将浓度分别为的加入到培养皿中共同孵育以测定法将与共同孵育及后的成纤维细胞培养基中加入共同孵育后用微板测定仪测定其吸光度吸收光谱空白对照组为成tetrapeptide AcSDKP,a negative regulator of hematopoietic stem cells,by hematopoietic microenvironmental cells.Exp

10、Hematol,1997,25:140-146.收稿日期：1999-05-27 牛骨髓中提取的一种生理性造血细胞生长抑制因子它可以通过阻止原始造血干细胞进入期使其停留在期而发挥其生长抑制作用随后的研究发现对非造血细胞如淋巴细胞也有生长抑制作用但目前我们尚不知在肾脏细胞增殖中是否起作材料和方法细胞培养将在液氮内冻存的大鼠肾间质成纤维细胞复苏转种至个含胎牛血清的培养基直径为塑料培养皿中放入恒温培养箱孵育细胞培养孵育箱箱温为空气一般数小时即可见成纤维细胞贴壁布满培养皿底部此时的成纤维细系列将培养皿中成纤维细胞调配至的浓上度种植在孔塑料细胞培养基中将浓度分别为的加入到培养皿中共同孵育以测定法将与共同孵育及后的成纤维细胞培养基中加入共同孵育后用微板测定仪测定其吸光度吸收光谱空白对照组为成